同工酶的鉴定

通常将能催化同一化学反应但分子结构或理化特性不同的酶称之为“同工酶”。1959年Markert和Moller用电泳法分离乳酸脱氢酶(LDH),发现了LDH存在着多种分子形式,并提出用同工酶(Isozyme)这个术语来命名。至今发现的同工酶已不下500种。同工酶可来源于不同个体、器官和组织,也可来源于同一细胞的不同亚细胞结构。因此,如何分离与鉴别组织中存在的同工酶,是同工酶研究中首先要解决的问题。本文将就这方面的研究以及一些常用的方法作简略的介绍。     

正常小鼠肝和HepA腹水肝癌中K型丙酮酸激酶同工酶的比较研究(摘要)

我们曾发现,小鼠HepA腹水肝癌(简称HepA)细胞中丙酮酸激酶(PyK)同工酶谱明显不同于正常小鼠肝;表现为分化型(L型)同工酶的降低和胎儿型(K型)同工酶的明显升高。且HepA中PyK总活性的升高和同工酶谱的改变,与HepA的Crabtree效应相关(本刊1981,8(6)∶428)。本文进一步研究HepA中增多的K型PyK和正常小鼠肝中活性甚低的K型PyK,在性质上有无不同。 比较正常小鼠肝和HepA都已纯化了的K型PyK。发现该种不同来源的K型PyK对下列各项指标均极为接近或完全相同:①在磷酸纤维素柱上均可被相近浓度的KCl洗脱下来;②聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率两者完全一致,两者混合样品在不同的电泳条件下均不能被分开;③两种酶在50℃保温下的半失活时间均为11.5分;④两种酶的pH活性曲线几乎完全重合,其最适pH均为7.4;⑤六种氨基酸分别对两种酶的抑制百分率都十分接近。Mg~( )或丝氨酸对两种酶的激活也基本一样;⑥两种     

佛波酯对人肝癌细胞胞液和膜性组分中3类蛋白激酶的早期效应

研究佛波酯（PMA）对人肝癌细胞7721胞液和膜性组分中3类蛋白激酶（TPK、PKA、PKC）的早期（5～60min）效应。采用体外细胞培养和蛋白激酶的同位素标记底物测定法。结果：PMA在30min内可促进PKA由膜向胞液的转位和PKC由胞液向膜的转位，并能迅速促进胞液PKC的下降，但膜性PKC的下降发生在30min的活力高峰以后。60min时膜性PKA和PKC都恢复到正常水平。PMA还使胞液TPK持续升高，高峰在5min，而使膜性TPK先降低，40min后才明显升高。结论：PMA对蛋白激酶的早期作用相当多样化，不单是通过受体PKC起作用。     

用酶联比色法测定肝脏磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D及其应用

研究建立一种磷脂酞胆碱专一性磷脂酶D（PC—PLD）的酶偶联比色测定法，并研究肝脏中磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D（PC—PLD）活力受磷脂的调节及其在肝癌中的变化。将PLD水解磷脂酰胆碱产生的胆碱用胆碱氧化酶氧化，生成的H2O2再在过氧化物酶催化下将4-氨基安替匹林和酚氧化成粉红色有色物质（Trinder反应）。结果：本法中酶浓度或反应时间和产物胆碱量有良好的正比关系。用0.15％的正辛基β-吡喃葡萄糖苷可将PC-PLD从膜性组分中增溶出来，而基本上不抑制酶活力，而其他5种去垢剂即使在很低的浓度下，均能抑制该酶活力。应用此法测定6种磷脂对鼠肝PC—PLD的影响发现只有磷脂酰乙醇胺（PE）可激活PC—PLD，还发现鼠肝癌中膜结合性PC-PLD活力明显增高，尤其是癌前期；而胞液PC-PLD仅在癌前期增高。结论：结果表明，①PC-PLD的酶联比色测定法较简便，灵敏度和重复性也较好，可以满意地应用于组织和细胞中此酶活力变化的研究；②大鼠肝PC—PLD受PE激活，并在肝癌中升高。     

亚硝胺诱发大鼠肝癌不同细胞组分中三类蛋白激酶的变化

作者研究了正常大鼠肝三个亚细胞组分中酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ），蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力和亚硝胺诱发大鼠肝癌后这些蛋白激酶的变化。发现正常鼠肝中的ＴＰＫ的活力为胞核＞膜性结构＞胞液，ＰＫＡ为胞液＞膜结构＞胞核，而ＰＫＣ则为膜结构＞胞液＞胞核。在胞液的三类蛋白激酶中，ＰＫＣ＞ＰＫＡ＞ＴＰＫ；膜结构为ＰＫＣ＞ＴＰＫ＞ＰＫＡ；而胞核却以ＴＰＫ特别高，ＰＫＡ和ＰＫＣ的含量甚微。ＤＥＮ     

EXPRESSION OF ONCOGENES DURING INDUCED DIFFERENTIATION OF HUMAN HEPATOCARCINOMA CELL LINE

ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＯＮＣＯＧＥＮＥＳＤＵＲＩＮＧＩＮＤＵＣＥＤＤＩＦＦＥＲＥＮＴＩＡＴＩＯＮＯＦＨＵＭＡＮＨＥＰＡＴＯＣＡＲＣＩＮＯＭＡＣＥＬＬＬＩＮＥＣｈａｉＸｉｙｕｎ柴希运ＣｈｅｎＨｕｉｌｉ陈惠黎（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓ...     

人绒毛膜促性腺激素的凝集素层析在判断滋养细胞肿瘤中的应用

目的　研究恶性滋养细胞肿瘤分泌的人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ） 中的异常糖链结构应用于临床诊断的可能性。　方法　测定２２ 例正常孕妇（ＮＰ） 、１２ 例良性葡萄胎（ＨＭ） 、１８ 例侵蚀性葡萄胎（ＩＨＭ） 和１７ 例绒毛膜癌（ＣＣ） 患者一次性晨尿中ｈＣＧ 的含量及其在蔓陀罗凝集素（ＤＳＡ） 亲和柱上的结合率。　结果　滋养细胞疾病病人一次性尿中的ｈＣＧ 含量与ＮＰ 没有差别。ＨＭ 尿中ｈＣＧ 的ＤＳＡ 结合率与ＮＰ 无异,而ＩＨＭ 与ＣＣ 尿中ｈＣＧ 的ＤＳＡ 结合率则明显高于ＮＰ或ＨＭ,ＩＨＭＣＣ和ＮＰＨＭ 两组间没有交叉重叠。ＣＣ尿中ｈＣＧ 的ＤＳＡ 结合率更高于ＩＨＭ 组,但无统计学差别。ＩＨＭ 或ＣＣ 经化疗后,尿中ｈＣＧ 含量降低,但ｈＣＧ的ＤＳＡ 结合率的降低在统计学上较含量降低更为显著。　结论　尿ｈＣＧ 的ＤＳＡ 结合率可用于恶性滋养细胞疾病的诊断及疗效认定。     

血清碱性磷酸酶的凝集素亲和层析在肝脏疾病鉴别诊断中的应用

血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）通过ＷＧＡ亲和层析柱后，可分成不结合的峰Ⅰ和结合的峰Ⅱ两个活力峰，峰Ⅰ为肝型（Ｌ－ＡＬＰ），而峰Ⅱ为骨型（Ｂ－ＡＬＰ）。Ｌ－ＡＬＰ在急性肝炎时明显增高；慢性肝炎或肝癌时轻度上升，而肝硬化时变化不大。如将Ｌ－ＡＬＰ再通过欧蔓陀罗凝集素（ＤＳＡ）亲和层析柱，则正常血清Ｌ－ＡＬＰ完全不被ＤＳＡ结合；急性肝炎的血清Ｌ－ＡＬＰ有部分为弱结合；慢性肝炎和肝硬化除弱结合组分外，出现较多的中度结合组分；而原发性肝癌则出现中度结合组分及特有的强结合组分。这些结果说明肝病越发展成慢性或恶习性或恶性，血清Ｌ－ＡＬＰ和ＤＳＡ的结合力越强。这可应用于临床上鉴别各类不同肝的。肝病血清Ｌ－ＡＬＰ结合于ＤＳＡ增多的原因主要是Ｎ－连接型糖链的无线数增加，后者尚可从天线末端唾液酸增多以及强结合组分不被ＣｏｎＡ结合而获得证明。     

佛波酯对人肝癌细胞胞液和膜性组分中3类蛋白激酶的早期效应

研究佛波酯（ＰＭＡ）对人肝癌细胞７７２１胞液和膜性组３类蛋白激酶（ＴＰＫ、ＰＫＡ、ＰＫＣ）的早期（５－６０ｍｉｎ）效应。采用体外细胞培养和蛋白激酶的同位素标记底物测定法。结果ＰＭＡ在３０ｍｉｎ内中促进ＰＫＡ由膜向胞液的转位和ＰＫＣ由胞液向膜的围位，并能迅速促进胞液ＰＫＣ的下降，但膜性ＰＫＣ的下降发生在３０ｍｉｎ的活性高峰以后，６０ｍｉｎ时膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都恢复到正常水平。ＰＭＡ还使胞液ＴＰＫ持续     

用酶联免疫法研究糖尿病患者低密度脂蛋白的受体结合

目的探讨糖尿病患者低密度脂蛋白（ＬｏｗＤｅｎｓｉｔｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＬ）与其受体的特异结合。方法用荧光法测正常组（ＨｂＡ１ｃ，３．９６％～５．３０％）、糖尿病Ⅰ组（ＨｂＡ１ｃ＜７．６０％）和Ⅱ组（ＨｂＡ１ｃ＞９．３０％）的ＬＤＬ糖化值，用酶联免疫受体法测上述三组的ＬＤＬ与人胚肺成纤维细胞ＬＤＬ受体的特异结合。结果对照组、糖尿病Ⅰ组和Ⅱ组的ＬＤＬ糖化值分别为１８．２±２１．８７、３２．１５±５．２３和６８．５３±８．９６Ｇｌｙｃｏｇｒｏｕｐｓ／ＬＤＬ，而ＬＤＬ受体特异结合分别为２５．１６±２．３４、３２．８９±３．５６和４２．３３±４．１４ｍｇ／ｇ细胞蛋白，糖尿病Ⅰ组和Ⅱ组的ＬＤＬ糖化值及ＬＤＬ受体特异结合均高于对照组（Ｐ＜０．０１），Ⅱ组又高于Ⅰ组（Ｐ＜０．０１）。结论糖尿病患者ＬＤＬ糖化高于正常人，但其ＬＤＬ受体特异结合较正常人低，且糖化程度越高则ＬＤＬ受体结合下降越明显。