麦胚凝集素亲和层析法分离碱性磷酸酶肝型同工酶及其临床意义

应用麦胚凝集素亲和柱层析分离血清碱性磷酸酶肝型同工酶，正常小儿为２５．０±５．９（％），急性肝炎患儿为６３．４±５．７（％），慢性肝炎为３２．５±８．１（％），肝炎后肝硬化为４０．２％，均明显升高。本方法分离效果好，采用荧光比色法检测碱性磷酸酶活性，可检出总酶活力在正常范围而肝型同工酶已有异常的病例，使诊断更具敏感性和特异性。     

肼化辣根过氧化物酶糖蛋白染色法

探索一种简便灵敏的糖蛋白半定量法。在 ｐＨ ５．０，碳二亚胺（ＥＤＣ）催化下，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）与己二酰二肼反应生成肼化的ＨＲＰ（ＨＲＰ－ＨＺ），固相于硝酸纤维素膜上的糖蛋白（纤连蛋白或转铁蛋白）经过碘酸氧化其糖链中的糖基后生成的醛基可与ＨＲＰ—ＨＺ缩合，用ＨＲＰ的发包底物显色即可检出精蛋白的存在与否。结果：糖蛋白中，１０ ｎｇ的糖即可被检出。结论：与其他糖定量方法相比，该方法灵敏度高，方法简便，能够普遍应用。     

用酶联比色法测定肝脏磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D及其应用

研究建立一种磷脂酞胆碱专一性磷脂酶D（PC—PLD）的酶偶联比色测定法，并研究肝脏中磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D（PC—PLD）活力受磷脂的调节及其在肝癌中的变化。将PLD水解磷脂酰胆碱产生的胆碱用胆碱氧化酶氧化，生成的H2O2再在过氧化物酶催化下将4-氨基安替匹林和酚氧化成粉红色有色物质（Trinder反应）。结果：本法中酶浓度或反应时间和产物胆碱量有良好的正比关系。用0.15％的正辛基β-吡喃葡萄糖苷可将PC-PLD从膜性组分中增溶出来，而基本上不抑制酶活力，而其他5种去垢剂即使在很低的浓度下，均能抑制该酶活力。应用此法测定6种磷脂对鼠肝PC—PLD的影响发现只有磷脂酰乙醇胺（PE）可激活PC—PLD，还发现鼠肝癌中膜结合性PC-PLD活力明显增高，尤其是癌前期；而胞液PC-PLD仅在癌前期增高。结论：结果表明，①PC-PLD的酶联比色测定法较简便，灵敏度和重复性也较好，可以满意地应用于组织和细胞中此酶活力变化的研究；②大鼠肝PC—PLD受PE激活，并在肝癌中升高。     

山羊IgG的结构及Fab′片断的制备

<正> 我们曾报道从兔IgG制备Fab′片断及其与辣根过氧化酶交联的方法(铰链区法),证明所用酶标法具有交联物均一、分子量小,用于ELISA时空白低、灵敏度高等优点。本文进而选择山羊抗兔IgG为材料,研究其制备F(ab′)_2以及Fab′的条件,同时探讨其轻链和重链的长短以及铰链区二硫键的数目。     

凝集素点印迹法分析胆汁糖蛋白糖链结构诊断胆管癌

目的：研究胆管癌胆汁中的肿瘤相关糖蛋白N－连接型糖链结构及其诊断价值。方法将31例胆管癌胆汁和13例良性胆道疾病胆汁直接点在硝酸膜（NC）上，采用辣根过氧化物酶（HRP）标记的刀豆凝集素（ConA)、欧曼陀罗凝集素（DSA）、麦胚凝集素（WGA）小豆凝集素（LCA）进行点印迹分析，结果胆管癌组和良性组ConA、DSA、LCA和WGA阳性率（阳性例／总例数）分别为80．6％（25．31％）和76．95（10．13）、74．2％（23／31）和0（0／13）、70．0％（22／31）和15．4％（2／13）、80．65（25／31）和23．1％（3／13），胆管癌组DSA、LCA和WGA阳性率高于良性组（P＜0．05）。结论胆管癌胆汁糖蛋白复杂型糖链增多，其核心岩藻糖和唾液酸含量丰富，可能出现偏二天线以及天线数的增加，胆汁糖蛋白的凝集素印迹分析法为胆管癌的诊断提供了新的有效方法。     

前列腺增生和前列腺癌患者血、尿中PSA糖链结构的改变及意义

目的探索前列腺癌的早期诊断和答别诊断的新依据。方法收集前列腺增生和前列腺癌患者空腹第一次晨尿和血标本各90份和30份，随机分为3组，用PSA抗体亲和层析柱提纯尿液和血液中的PSA，用辣根过氧化物酶（HRP）标记的凝集素SNA（sambucus nigra agglutinin）做探针，连接到已固定在膜上纯化的PSA的糖链，榆测已结合的HRP来代表PSA糖链与凝集素的结合力，用增强化学发光法（ECL）检测已结合的HRP的结合力，其数值用发光单位（LLU）来表示。结果用HRP标记的凝集素SNA-HRP作探针检测前列腺癌和前列腺增生血中PSA时，前列腺癌血中平均LLU仅为前列腺增生血中PSA的18．3％，与SNA—HRP的结合力两者之间有明显差异（P〈0．001）；而在尿液中两者无明显差异（P〉0．05）。说明前列腺癌血中PSA糖链结构中唾液酸残基表达较前列腺增生明显减少。结论前列腺癌患者血中PSA糖链结构与前列腺增生相比发生改变，其中糖链结构中唾液酸残基表达的改变可能为今后前列腺癌的早期诊断和鉴别诊断提供新的依据。     

与肿瘤侵袭相关的Lewis抗原在人肝癌细胞H7721上的表达及其合成的酶学分析

目的　研究人肝癌细胞H772 1表面 4种含岩藻糖类抗原—Lewis抗原的表达、它们与肝癌细胞在体外侵袭行为的关系 ,及其合成相关酶α1,3岩藻糖转移酶 (FucT) 5种亚型的基因表达。方法　用单克隆抗体结合流式细胞仪测定Lewis抗原 ,用涂有Matrigel膜的转移小室测定细胞的侵袭行为 ,利用实时RT PCR测定FucT的表达。结果　H772 1细胞表面主要表达Slex和少量SDLex,而Lex和Slea表达极微。其中只有Slex和H772 1细胞的侵袭明显相关。H772 1细胞中FucT的表达强度为FucT IV >FucT III >FucT VI≥FucT VII,后两者表达少 ,而几乎完全缺乏FucT IX。结论　Slex是H772 1细胞表面最多也是与细胞侵袭最有关的Lewis抗原 ,因据报道FucT VI催化合成Slex和SDLex的效率高于FucT III及VII,故可能是负责H772 1细胞中Slex和SDLex合成的主要FucT ,但也不排除FucT VII和FucT III也参与Slex的合成。合成Lex中最重要的FucT IX的缺乏可能是Lex低表达的原因。     

胆管癌胆汁中糖蛋白的糖链结构特点

目的：探讨与胆管癌相关的胆汁糖蛋白的糖链结构特点。方法：对15例胆管癌胆汁及10例良性胆道疾病的胆汁蛋白进行蛋白质电泳考马斯亮蓝及银染色，并用4种识别不同糖链结构的辣根过氧化酶标记的凝集素（ConA-HRP,WGA-HRP,LCA-HRP,DSA-HRP）进行凝集素印迹分析。结果：胆管癌胆汁和良性胆汁蛋白SDS－PAGE谱基本相同，ConA结合的胆管癌相关糖蛋白有4种（－138，－122，－108，－101kDa)，WGA结合胆管癌相关糖蛋白1种（－201kDa);LCA结合胆管癌相关糖蛋白1种（－122kDa);DSA结合胆管癌相关糖蛋白3种（－201，－163，－122KDa)。结论：胆管癌胆汁中一些糖蛋白的糖链结构发生了改变，主要表现为唾液酸含量增加及天线数，高甘露糖型糖链增多，可能与胆管上皮的恶性转化有关。     

亚硝胺诱发大鼠肝癌不同细胞组分中三类蛋白激酶的变化

作者研究了正常大鼠肝三个亚细胞组分中酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ），蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力和亚硝胺诱发大鼠肝癌后这些蛋白激酶的变化。发现正常鼠肝中的ＴＰＫ的活力为胞核＞膜性结构＞胞液，ＰＫＡ为胞液＞膜结构＞胞核，而ＰＫＣ则为膜结构＞胞液＞胞核。在胞液的三类蛋白激酶中，ＰＫＣ＞ＰＫＡ＞ＴＰＫ；膜结构为ＰＫＣ＞ＴＰＫ＞ＰＫＡ；而胞核却以ＴＰＫ特别高，ＰＫＡ和ＰＫＣ的含量甚微。ＤＥＮ