肝外胆管癌组织中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活力的测定

目的研究肝外胆管癌组织中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活力及其意义.方法通过反相高效液相层析(HPLC)系统,测定15例肝外胆管癌以及15例良性胆道疾病组织中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ(GnT-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)的活力.结果肝外胆管癌组织中GnT-Ⅲ、Ⅴ活力升高,其中GnT-Ⅲ活力较良性组织增高约3.3倍;GnT-Ⅴ活力增高约13.5倍,尤以伴淋巴结转移的肝外胆管癌为甚(P<0.05).GnT-Ⅳ活力变化不大.结论N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ、Ⅴ活力升高可作为肝外胆管癌存在或转移的标志物,有助于肝外胆管癌的诊断及预后判断.     

分析人绒毛膜促性腺激素的糖链以诊断滋养细胞肿瘤

用放射免疫法测定正常孕妇（ＮＰ）、良性葡萄胎（ＨＭ）、侵袭性葡萄胎（ＩＭ）和绒毛膜癌（ＣＣ）患者晨尿中人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）的含量，发现４组间无显著差别。但用蔓陀罗凝集素（ＤＳＡ）亲和层析柱分析尿中ｈＣＧ的结合率，可将良性（ＨＭ）和恶性（ＩＭ、ＣＣ）滋养细胞肿瘤明确地区别开来。ＨＭ尿中ｈＣＧ的ＤＳＡ结合率与ＮＰ无异；而ＩＭ与ＣＣ尿中ｈＣＧ的结合率明显高于ＮＰ和ＨＭ；ＩＭ－ＣＣ和ＮＰ－ＨＭ两组     

视黄酸对人肝癌细胞的逆转作用

视黄酸(又称维甲酸、RA,全反式)可抑制某些肿瘤的生长,但对人类肝细胞癌的作用则未见研究报导。本文系统地研究了视黄酸对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的作用,采用一系列形态学,生物学,生物化学和分子生物学的新技术证明了视黄酸具有促使人肝细胞向正常分化逆转的作用。1、10μM的RA可明显抑制肝癌细胞的生长,在第1、2、4天的抑制率分别为22.3％、36.4％和42.6％,以后保持在50％左右,此作用不是对肝癌细胞的杀伤作用。     

一种较理想的ELISA辣根过氧化酶的比色底物

<正> 辣根过氧化酶(HRP)已被广泛地应用于神经组织化学及酶标免疫技术(定位及定量)的研究。在酶标免疫吸附测定(ELISA)时,较常用的三种底物为5-氨基水杨酸(5AS)、邻联甲苯胺(OT)和邻苯二胺(O-PD),其中5AS生色较差,空白较高;而OT的生色很不稳定,易受温度影响,O-PD则在上述各点及灵敏度方面优于5AS及OT,成为目前最常用的比色底物。但O-PD也有缺点,如溶液需暗处保存,否则空白加深,且Ames试验证明有致癌性。本文介绍一种国内尚未报道的可应用于ELISA而优于O-PD的比色底物,即     

抗人LDH-C_4单克隆抗体的特异性分析及其初步应用

用纯化人LDH-C_4免疫小鼠,经常规方法融合、筛选出3株具有分泌特异性抗人LDH-C_4单克隆拉体的杂交瘤细胞株。该单克隆拉体的特’性为:①琼脂双向扩散试验及ELISA检测只能与人LDH-C_4产生特异性反应,不能与动物和人LDH-A_4·B_4起反应;②血凝抑制试验能特异性地抑制该单克隆抗体与人LDH-C_4的结合;③用免疫荧光与ABC法发现精子头部、头后区和中段产生特异性荧光染色和酶联反应;④该单克隆抗体属于小鼠IgG_1。采用BA-ELISA法检测72例不同人群(正常人、停服棉酚者恢复期、少精和无精患者)精液中的LDH-C_4,其OD值依次由高到低。并证实少精患者中19％为LDH-C_4缺如,提示可能IAh-C基因缺陷。还发现LDH-C_4与精子活力明显相关。     

胆管癌组织及其胆汁糖蛋白末端唾液酸结构的改变及其意义

目的探讨胆管癌组织及其胆汁糖蛋白N 型糖链末端唾液酸的结构特点及意义。方法采用半定量RT PCR法 ,分析 35例胆管癌和 35例良性胆管组织唾液酸转移酶ST6Gal Ⅰ和ST3Gal ⅢmRNA的表达 ;采用能识别末端唾液酸结构的麦胚凝集素 (WGA) ,对良恶性标本进行WGA组织化学染色 ,并进行图像分析 ;对各良恶性胆汁进行WGA点印迹分析。结果胆管癌组织中ST3Gal Ⅲ和ST6Gal ⅠmRNA表达均增强 (P <0 0 1) ,以ST3Gal Ⅲ明显 ;胆管癌组织WGA阳性率为 10 0 % (35 / 35 ) ,良性组织为 4 3% (15 / 35 ) ,胆管癌WGA强度指数高于良性对照组 (P <0 0 1) ;胆管癌组织WGA指数与ST3Gal ⅢmRNA表达正相关 ,二者均与TNM分期、肿瘤分化、转移等有关 ;恶性病变胆汁WGA点印迹阳性率 (83% )高于良性病变胆汁 (17% ) ,且与胆管癌组织WGA指数有关。结论胆管癌细胞糖蛋白末端唾液酸含量增加 ,并发生连接键型的变化 ,具有特征性 ,与胆管癌生物学特性有关 ;在分泌的胆汁中也可检测到糖蛋白末端唾液酸含量增加。     

γ射线对白血病细胞K562 ppGalNAcT2 Mrna表达的影响及中药多糖的防护作用

目的 探讨γ射线对白血病细胞株K562中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2,E.C2.4.1.41)基因mR-NA表达的影响,并探讨中药多糖对此种影响的防护作用。方法 以不同剂量的~(60)COγ射线照射K562细胞,并设加中药多糖实验组,观察不同剂量(5Gy、10Gy、15Gy)γ射线对K562细胞ppGalNAcT2 mRNA表达影响,及加入不同剂量中药(50mg/L,100mg/L,200mg/L)后对10Gy照射K562细胞组中T2 mRNA表达的防护作用。以RT-PCR法检测ppGalNAcT2 mRNA的表达差异变化。结果 γ射线照射K562细胞后ppGalNAcT2 mRNA表达明显减少,且与剂量呈负相关,而中药多糖则可对抗此种作用,使加中药多糖组细胞在照射后ppGalNAcT2 mRNA表达水平维持在正常细胞水平。结论 5～15Gyγ射线照射抑制白血病细胞ppGal-NAcT2 mPNA表达,可能与肿瘤细胞受照后分化抑制有关,而中药多糖明显对抗此种抑制作用。     

正常小鼠肝和HepA腹水肝癌中K型丙酮酸激酶同工酶的比较研究(摘要)

我们曾发现,小鼠HepA腹水肝癌(简称HepA)细胞中丙酮酸激酶(PyK)同工酶谱明显不同于正常小鼠肝;表现为分化型(L型)同工酶的降低和胎儿型(K型)同工酶的明显升高。且HepA中PyK总活性的升高和同工酶谱的改变,与HepA的Crabtree效应相关(本刊1981,8(6)∶428)。本文进一步研究HepA中增多的K型PyK和正常小鼠肝中活性甚低的K型PyK,在性质上有无不同。 比较正常小鼠肝和HepA都已纯化了的K型PyK。发现该种不同来源的K型PyK对下列各项指标均极为接近或完全相同:①在磷酸纤维素柱上均可被相近浓度的KCl洗脱下来;②聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率两者完全一致,两者混合样品在不同的电泳条件下均不能被分开;③两种酶在50℃保温下的半失活时间均为11.5分;④两种酶的pH活性曲线几乎完全重合,其最适pH均为7.4;⑤六种氨基酸分别对两种酶的抑制百分率都十分接近。Mg~( )或丝氨酸对两种酶的激活也基本一样;⑥两种     

麦胚凝集素亲和层析法分离碱性磷酸酶肝型同工酶及其临床意义

应用麦胚凝集素亲和柱层析分离血清碱性磷酸酶肝型同工酶，正常小儿为２５．０±５．９（％），急性肝炎患儿为６３．４±５．７（％），慢性肝炎为３２．５±８．１（％），肝炎后肝硬化为４０．２％，均明显升高。本方法分离效果好，采用荧光比色法检测碱性磷酸酶活性，可检出总酶活力在正常范围而肝型同工酶已有异常的病例，使诊断更具敏感性和特异性。     

肼化辣根过氧化物酶糖蛋白染色法

探索一种简便灵敏的糖蛋白半定量法。在 ｐＨ ５．０，碳二亚胺（ＥＤＣ）催化下，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）与己二酰二肼反应生成肼化的ＨＲＰ（ＨＲＰ－ＨＺ），固相于硝酸纤维素膜上的糖蛋白（纤连蛋白或转铁蛋白）经过碘酸氧化其糖链中的糖基后生成的醛基可与ＨＲＰ—ＨＺ缩合，用ＨＲＰ的发包底物显色即可检出精蛋白的存在与否。结果：糖蛋白中，１０ ｎｇ的糖即可被检出。结论：与其他糖定量方法相比，该方法灵敏度高，方法简便，能够普遍应用。