Livin和Survivin基因短发夹RNA真核表达载体的构建及其联合转染对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的设计并构建能够有效干扰Livin和Survivin基因的表达,且能在胞内稳定转录的表达载体;研究Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染对肝癌细胞增殖活性及凋亡的影响。方法根据设计siRNA的原理,分别从Livin、Survivin基因序列中选取两段siRNA靶序列模板,以其为基础进行shRNA真核表达载体Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin的构建。将传代培养的肝癌Hep G2细胞株分为五组:设阴性对照组(不转染)、空白质粒组(单独转染Pgenesil-1-NC)、Survivin组(单独转染Pgenesil-1-Survivin)、Livin组(单独转染Pgenesil-1-Livin)和共转染组(联合转染Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin),对各组细胞进行单独或联合转染。为检测转染2 d后Livin和Survivin蛋白表达的情况、转染后三个不同时间点(48 h、60 h、72 h)的细胞增殖活性变化及转染后48 h的细胞凋亡率,分别采用了蛋白质印迹法、MTT法及TUNEL法。结果两种表达载体的测序结果与预期相同。与阴性对照组及空白质粒组相比,转染后2 d,Livin组、Survivin组和共转染组的蛋白表达均明显下降(P0.05),而与Livin组和Survivin组相比,共转染组蛋白表达的下降更为显著(P0.05);各组细胞在3个检测时间均表现出增殖活性的下降,且与Livin组和Survivin组相比,共转染组在三个检测时间的细胞生长抑制率(IR)值分别为28.541±0.842、21.644±0.129、15.532±1.12,明显高于前者(P0.05);转染后48 h,共转染组凋亡率为53.956%±4.332%,明显大于Livin组和Survivin组(P0.05)。结论成功设计并构建体内可稳定转录且能有效干扰目的基因表达的质粒载体。对肝癌细胞进行Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染,可更大程度下调相应基因的表达,降低Livin蛋白和Survivin蛋白的胞内含量,可更为有效地阻碍癌细胞的异常增殖,促进癌细胞的程序性凋亡。     

姜黄素对大鼠睾丸缺血再灌注损伤后的保护作用及核因子E2相关因子2表达的影响

目的 ：探究姜黄素对大鼠睾丸缺血再灌注损伤后的保护作用及核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的影响。方法 ：32只4周龄健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、姜黄素单次给药组（术中灌注姜黄素）、姜黄素连续给药组（术中及术后7 d灌注姜黄素）,每组8只。建立左侧睾丸扭转复位动物模型,于缺血再灌注损伤后1周用彩色多普勒超声观察睾丸损伤情况;术后6周处死大鼠,取左侧睾丸,测量精子活动率及精子计数;睾丸组织切片H-E染色观察睾丸组织病理改变;qRT-PCR检测各组大鼠睾丸Nrf2表达的差异。结果 ：姜黄素给药组能明显提高大鼠睾丸缺血再灌注损伤后精子活动率、精子计数水平,且能显著改善睾丸组织损害程度。姜黄素给药组睾丸Nrf2的表达水平明显高于缺血再灌注损伤组。结论 ：姜黄素能够上调缺血再灌注损伤后睾丸Nrf2的表达,有效减轻睾丸缺血再灌注损伤,从而对青春前期大鼠单侧睾丸扭转起到明显的远期保护作用,且连续给药优于单次给药。     

白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控

目的　探究白细胞介素10（interleutin 10,IL-10)基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞（adipose mesenchymal stem cells,ADSCs）对自体外周血Th17细胞的免疫调控作用。方法　构建IL-10 基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells,IL-10-ADSCs)及荧光蛋白标记的兔脂肪来源间充质干细胞（green fluorescent protein-adipose mesenchymal stem cells,GFP-ADSCs）,定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)及Western blot检测细胞IL-10基因及蛋白表达水平。分离培养兔泪腺上皮细胞及自体外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立淋巴细胞体外激活共培养体系,分组按PBMCs∶ADSCs为5∶1的比例加入等量ADSCs、IL-10-ADSCs及GFP-ADSCs,同时以等比例的成人真皮成纤维细胞-α作为对照组,Q-PCR检测各组Th17细胞相关基因mRNA表达水平。结果　成功构建IL-10-ADSCs和GFP-ADSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）表达率达80%以上。Q-PCR及Western blot检测结果显示,IL-10-ADSCs组IL-10 mRNA及蛋白表达水平均高于GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。与对照组相比,ADSCs组、IL-10-ADSCs组及GFP-ADSCs组均可降低兔外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17及转录因子维甲酸相关孤独受体C mRNA表达水平（均为P＜0.05）,且IL-10-ADSCs组降低效果显著高于ADSCs组及GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　IL-10-ADSCs可抑制Th17细胞分化相关基因的表达水平,具有抑制Th17细胞分化的潜能。     

北京:实现中医药资源、服务能力双增长

中医医疗服务是我国医疗服务的重要组成部分,体现了我国医疗服务供给的重要特性。2009年新一轮医改以来,北京市中医药事业发展取得了显著成就,中医药服务体系更加完善,中医药基层服务能力显著提升,中医药产业规模不断扩大,初步形成了诊疗、康养、科教、产业、文化整体发展的新格局。2009年新一轮医改以来,北京市政府对中医药事业的投入不断增加,这是北京市中医资源增长、服务能力增长的重要前提。通过北京市卫生统计年报、北京市中医类医院监测平台等数据,综合比较中医机构财政拨款占全市医疗卫生拨款之比、中医类医院执业(助理)医师占全市公立医院执业(助理)医师之比、中医类医院实有床位数占比、中医类门诊及出院人次占比可以发现.     

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证模型小鼠NLRP3、caspase-1和mTOR蛋白的影响

目的:观察灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎(helicobacter pylori associated gastritis,HAG)脾胃湿热证模型小鼠NOD样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)和mTOR的影响,探讨细胞自噬与细胞焦亡在复合病因造模法所致小鼠HAG脾胃湿热证模型胃黏膜损伤中的作用。方法:将50只小鼠随机分为正常对照组、内湿Hp组、外湿Hp组、复合病因造模组和清热祛湿组,每组各10只。采用复合病因造模法建立BALB/c小鼠HAG脾胃湿热证模型,造模成功后清热祛湿组予以灭幽汤灌胃,给药剂量为12.4 g·kg~(-1),每日1次,其他组分别灌等量蒸馏水。采用Western-blot、RT-PCR法检测NLRP3、caspase-1蛋白与mTOR的蛋白和基因表达情况。结果:与正常对照组比较,内湿Hp组、外湿Hp组、复合病因造模组胃组织NLRP3、caspase-1和mTOR基因及蛋白水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与内湿Hp组、外湿Hp组比较,复合病因造模组胃组织NLRP3、caspase-1和mTOR基因及蛋白水平升高,差异具有统计学意义(P0.05);与复合病因造模组比较,清热祛湿组NLRP3、caspase-1和mTOR基因及蛋白水平显著下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:灭幽汤可能通过调控细胞自噬与焦亡,从而有效治疗脾胃湿热型HAG。     

老干部病房陪护现状调查分析与管理对策

目的:调查分析老干部病房陪护现状,探讨具有针对性的管理对策。方法:采取时点调查法调查医院老干部病房陪护情况,分析陪护现状和原因。结果:医院老干部病房患者疾病类型多为呼吸系统、神经内科、心脑血管疾病;陪护率为90.00%;陪护的主要原因为患者生活不能自理,其次为病情危重、高龄、认知功能障碍等;陪护人员多为1人,主要为家属、保姆;陪护人员多未经过培训(P0.01)。结论:制定陪护培训、准入、管理制度,重视继续教育,多部门协作,强化沟通交流,提高专业陪护人员比例,改善病房休息环境、工作秩序和降低用药风险,是老干部病房陪护管理的有效对策。     

基质细胞衍生因子预处理的内皮祖细胞对大鼠急性心肌梗死的治疗作用

目的 探讨基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)预处理的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对大鼠急性心肌梗死的治疗作用.方法 培养大鼠骨髓来源的内皮祖细胞,检测SDF-1在体外对EPCs迁移和存活能力的影响.建立大鼠急性心肌梗死模型,随机分为SDF-1+EPCs组、EPCs组和对照组,每组12只.心梗后24 h,将SDF-1预处理或未处理的EPCs经尾静脉注入动物体内,对照组注射不含细胞的培养基.细胞输注后的14 d和28 d,分别检测血管密度、心功能及心肌梗死面积等指标.结果 细胞输注后14 d,SDF-1+EPCs组血管密度高于EPCs组及对照组.细胞输注后28 d,SDF-1+EPCs组大部分心功能指标优于EPCs组和对照组,心梗而积低于EPCs组和对照组.结论 SDF-1预处理能促进EPCs的迁移和存活,促进体内EPCs介导的新血管生成,减少心肌梗死面积,促进心功能的恢复.     

女人三十，在事业与生活间优雅徘徊

我们之所以总是感觉自己不幸福，原因不在我们得到的太少，而是我们奢望的太多。     

柯萨奇病毒B组3型感染胰岛细胞的体外研究

目的 观察柯萨奇病毒B组3型(Coxsackie virus B3,CVB3)对体外培养胰岛细胞的感染情况,初步探讨CVB3损伤胰岛细胞的机制.方法 分离并培养骨髓间充质干细胞,用尼克酰胺和β-巯基乙醇进行胰岛细胞诱导并鉴定.用CVB3感染胰岛细胞,RT-PCR检测胰岛细胞内的CVB3特异性片段.结果 骨髓间充质干细胞经药物诱导后,呈半悬浮状并聚集成用.双硫腙特异性染色后细胞变成红棕色,RT-PCR也证明诱导细胞内具有表达胰岛素的mRNA.CVB3感染胰岛细胞,细胞出现皱缩,折光性下降等典型病变,RT-PCR法成功扩增出胰岛细胞内的CVB3特异性片段.结论 CVB3可以在体外直接损伤胰岛细胞,最终引起胰岛细胞的裂解.     

心理技能训练对慢性精神分裂症患者社会适应能力的影响

目的 观察心理技能训练对慢性精神分裂症患者社会适应能力的影响.方法 将80例慢性精神分裂症患者按入院先后分为对照组和观察组各40例,两组均接受抗精神病药物治疗和精神科常规护理,观察组在此基础上进行心理技能训练.分别在入院时、出院前用社会功能缺陷筛选量表及护士用住院患者观察量表对患者进行测评.结果 两组患者入院时测评比较...