抗人肝癌基因工程嵌合Fab抗体的原核表达及复性

目的　分别在大肠杆菌中高效表达嵌合Fd及嵌合轻链 ,并进行嵌合Fab复性的研究。方法　分别将嵌合Fd及嵌合轻链基因插入到原核表达载体pET32a中 ,构建成重组载体pET32a/cFd和pET32a/cL。转化大肠杆菌后诱导其表达。大量制备表达的嵌合Fd及嵌合轻链后 ,按二者绝对量等摩尔比混合后进行透析复性。然后 ,分别利用SDS PAGE、Westernblot和ELISA进行分析和鉴定。结果　成功获得了嵌合Fd及嵌合轻链的原核非融合高效表达 ,表达蛋白相对分子质量 (Mr)均在 2 4×10 3 左右。表达量分别约占菌体总蛋白的 2 8.3%和 32 .3% ,2种目的蛋白均主要以不溶性的包涵体形式存在。另外 ,嵌合Fd与嵌合轻链在缓慢透析的条件下成功地复性为嵌合Fab抗体 ,Mr 约为 4 2×10 3 ,具有特异性抗原结合活性和良好的亲和力。在起始总蛋白浓度为 10 0 μg/ml时 ,复性效率约为4 9 %。结论　成功实现了嵌合Fab抗体的高效表达及高效复性 ,为进一步探讨其在肝癌治疗中的应用奠定了基础     

β射线诱导人肝癌细胞凋亡

0　引言　凋亡或细胞程序性死亡是一种不同于细胞坏死的死亡方式 ,是在基因控制下的有序死亡 ,是一个主动性自杀过程 ,常伴有特征性形态学和生化变化 .临床上放射线治疗肿瘤主要应用射线诱导细胞凋亡这一机制 .1 88Re发射 2 110Ke V的 β射线 ,15 5 Ke Vγ射线 ,半衰期 17h,具有良好的核物理性质 .国外 1 88Re的研究主要在 1 88Re标记单克隆抗体对肿瘤的放射免疫治疗 ,并显示具有一定的疗效 ,而国内关于 1 88Re的研究较少 ,经文献检索未见有关于 1 88Re诱导细胞凋亡的报道 .本实验旨在研究 1 88Re-β射线诱导人肝癌细胞系 h HCC(human…     

免疫亲和层析纯化大肠癌相关抗原

目的 :从培养的大肠癌细胞Hce 86 93中分离纯化并鉴定大肠癌相关抗原。方法 :利用流式细胞术选择高表达大肠癌相关抗原的大肠癌细胞系 ,分别用单去污及三去污裂解液裂解细胞。然后用 5株抗大肠癌单克隆抗体 (mAb)CYL 1～CYL 5进行Westernblot,分析与大肠癌细胞结合反应最强的mAb。以此mAb作为配基进行亲和层析纯化大肠癌相关抗原 ,纯化结果利用Westernblot法进行鉴定。结果 :大肠癌细胞系Hce 86 93上相关抗原的表达量最高 ;抗大肠癌mAbCYL 2与Hce 86 93的结合力最强。纯化所获与CYL 2特异结合的大肠癌相关抗原 ,Mr 约为 13× 10 3 。该抗原由Mr 为 6 0× 10 3 和70× 10 3 两种亚基组成。结论 :利用mAbCYL 2进行亲和层析 ,从大肠癌细胞系Hce 86 93中获得纯化的肿瘤相关抗原。     

抗入肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究

本文用肝癌手术标本,制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC染色法筛选单克隆抗体,获得特异性较好的杂交瘤-HAb_(18),抗体亚类为小鼠IgG1,抗原经亲和层析获得,分子量为60KD,过碘酸-Schiffs染色阴性,脂蛋白电泳阴性,PI:8.2。肝癌免疫组化染色阳性率为75％。     

抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定

目的: 克隆抗人肝癌单抗HAb18 Fd及轻链基因，并对其可靠性和准确性进行验证。方法: 从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA，利用RTPCR扩增抗体Fd及轻链基因，连入pMD18T载体后，挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列进行分析。然后将轻链及Fd基因依次克隆到噬菌体展示载体pComb3中，转化大肠杆菌XL1blue并利用辅助噬菌体M13K07进行挽救，收获噬菌体后利用间接ELISA方法检测其抗原特异性。结果: 扩增的HAb18全长轻链和Fd 基因大小分别为665 bp和668 bp，序列分析显示：VH及VL均含有2个特征性的半胱氨酸，CH1属于IgG1亚类，CL属于κ亚型。ELISA证实，Fab基因表达产物具有与相应抗原特异结合的活性。结论：成功克隆了肝癌单抗HAb18的Fd及轻链基因，为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础。     

肝癌单克隆抗体——氨甲喋呤结合物对肝癌导向治疗的实验研究

本文选择鼠抗人肝癌单克隆抗体Hab18与抗癌药物氨甲喋呤(MTX)交联制备Hab-18-MTX结合物,检测该结合物的抗体活性,体外对肿瘤靶细胞的特异性杀伤作用,     

CD147分子与MMPs在肝癌细胞系中表达的相关性

目的 研究CD147与MMPs(基质金属蛋白酶）在肝癌细胞系中表达的相关性。方法 流式细胞仪检测正常肝细胞QZG及不同肝癌细胞系（BEL－7402，QGY－7404，SMMC－7721，HHCC和HHCC－9204）中CD1474 表达；酶谱法分析其产生MMPs的含量及活性。结果 正常肝细胞株QZG中CD147表达阴性，其余5株肝癌细胞系CD147表达阳性；MMP－2和MMP－9在QZG和肝癌细胞系中均表达，但在肝癌细胞系中表达明显增高；MMP－9以酶原和活性形式表达，MMP－2仅以酶原形式表达；统计学分析CD147和MMPs表达成正相关。结论 CD147可作为判断肝癌细胞具备高侵袭转移潜能的标志。     

^111In标记单克隆抗体进行肿瘤导向诊断的研究进展

１１１Ｉｎ是目前认为比较理想的放射免疫显像核素。本文论述了１１１Ｉｎ的特点，与常用显像核素１３１Ｉ的对比，以及“１１１１Ｉｎ标记单克隆抗体的方法、用于肿瘤导向诊断的效果和存在的问题。     

HAg18人肝癌相关抗原的表达与细胞周期的关系

为了分析ＨＡｇ１８人肝癌相关抗原的异质性。我们用流式细胞仪双参数相关分析法观察了ＨＡｇ１８人肝癌相关抗原在４种不同人肝癌细胞系中的表达与细胞周期的关系，发现ＨＡｇ１８相关抗原在４种人肝癌细胞系中均有表达，但表达量不同。Ｇ０－Ｇ１期表达量少，Ｓ期居中，Ｇ２－Ｍ期抗原量大。在同种细胞的同一细胞系其表达异质性与细胞周期的时相变化有关。在同种细胞的不同细胞群，其表达异质性与细胞周期的时相变化无明显关系。     

体外重组基底膜侵袭实验条件及计数方法的探讨

目的:探讨体外重组基底膜侵袭实验中最佳趋化条件及细胞计数方法.方法:采用体外重组基底膜侵袭实验方法,加入不同趋化 剂:成纤维细胞条件培养液、纤维黏连蛋白(FN)、条件培养液与FN联合;HE染色后,采用40×光镜随机视野计数法及利用显微 照相系统全滤膜计数法计数.结果:趋化剂组穿膜细胞数显著高于对照组;条件培养液和FN联合穿膜细胞数显著高于单独条件 培养液组和FN组;条件培养液组穿膜细胞数高于FN组;随机视野计数法与全滤膜计数法相比所得结果误差大.结论:趋化剂能 显著增加细胞的定向穿膜侵袭能力,不同趋化剂的趋化能力各有不同;全滤膜计数法是一种客观准确的细胞计数法.