构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达

目的:构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体,并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达。方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原HAb18G胞外段基因,SacI/NotI双酶切后插入真核表达载体pCEL2f中,构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体基因的重组表达载体pCEL2f/HAb18GEF,并经酶切和测序验证。将此重组表达载体与POG44载体(按1∶9的比例混合后),在阳离子脂质体介导下共转染HEK293-16工程细胞,用潮霉素B筛选定点整合表达EpoR/LR-F3/HAb18GEFcDNA的细胞克隆。用间接免疫荧光染色法、流式细胞术及Zeocin致死试验,检测并验证稳定表达株中EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的表达。结果:成功地构建pCEL2f/HAb18GEF真核重组表达载体,共转染后EpoR、HAb18GEF均高效表达于转染的HEK293-16细胞的胞膜上。经潮霉素B筛选得到12株可融合高表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF的稳定株,其表达EpoR的阳性率为99.93%,平均荧光强度(MFI)为1036.39,表达HAb18GEF的阳性率为99.51%,MFI为652.72,且可被Zeocin致死。结论:成功地建立了表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的HEK293-16工程细胞株,为进一步利用哺乳动物蛋白质-蛋白质相互作用陷阱(MAPPIT)系统筛选HAb18G的作用受体奠定了基础。     

肝癌患者接受131Ⅰ-HAb18(Fab'')2导向治疗的安全性研究

为解决不能手术切除的中晚期肝癌患者的治疗问题,我们将对人肝癌细胞有高亲和力的抗人肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８（Ｆａｂ’）２与１３１Ｉ偶联,制成导向治疗药物,用于肝癌治疗。通过对治疗前后血常规、肝、肾及甲状腺功能的对比观察,探讨其治疗的安全性。１材料与方法...     

HLA-DR抗原在培养的肝细胞癌细胞表面的表达及意义

HLA-DR是人类MHCⅡ类分子的主要类型之一,在机体免疫应答及免疫调节过程中发挥着重要的作用.MHCⅡ在肿瘤细胞的表达主要表现为其主要类型HLA-DR的表达,并且其阳性率与多种肿瘤的分化程度和预后密切相关.但是关于HLA-DR在培养的原发性肝细胞癌细胞表面的表达情况尚未见报道.本文采用对生长于盖玻片上的贴壁培养细胞进行免疫组化ANC法染色,检测了HLA-DR在HHCC、SMMC-7721、BEL-7402和HCC-9204等4种培养的人肝细胞癌细胞系以及正常人肝细胞系QZG表面的表达情况.阳性肝癌细胞呈现棕黄染色.如果>5%左右的肝癌细胞为阳性,则认为该种细胞阳性,否则为阴性.两人双盲法阅片,观察结果一致.结果表明,4种肝癌细胞中只有部分SMMC-7721细胞表面呈阳性,多次实验的结果经多个样本率的X~2检验,具有显著差异(P<0.05).阳性肝癌细胞着色略呈细颗粒状,阳性信号普遍较弱,HLA-DR在QZC细胞表面未见表达.说明HLA-DR可以在某些培养的肝细胞癌细胞系中表达.     

肝细胞肝癌(HCC)单克隆抗体(McAb)在体外及体内的导向定位

本文报道分三组用新鲜切除的外科HCC标本制备细胞悬液为抗原,另一组用SMMC-7721细胞系为对照抗原。用鼠鼠细胞融合的办法,共制出能长期稳定分泌抗体的6个杂交瘤细胞株,与HCC反应而与正常肝细胞不反应。 在体外,McAb与HCC结合较好。用免疫细胞化学ABC法,它们分别能与63.1％～91.1％的HCC标本石蜡切片发生特异性反应。反应部位有的膜型、有的浆性,多数为浆、膜性。6株抗体中,4株为IgG1型,2株为IgM型,后者阳性率较高,但交叉反应     

β射线诱导人肝癌细胞凋亡

0　引言　凋亡或细胞程序性死亡是一种不同于细胞坏死的死亡方式 ,是在基因控制下的有序死亡 ,是一个主动性自杀过程 ,常伴有特征性形态学和生化变化 .临床上放射线治疗肿瘤主要应用射线诱导细胞凋亡这一机制 .1 88Re发射 2 110Ke V的 β射线 ,15 5 Ke Vγ射线 ,半衰期 17h,具有良好的核物理性质 .国外 1 88Re的研究主要在 1 88Re标记单克隆抗体对肿瘤的放射免疫治疗 ,并显示具有一定的疗效 ,而国内关于 1 88Re的研究较少 ,经文献检索未见有关于 1 88Re诱导细胞凋亡的报道 .本实验旨在研究 1 88Re-β射线诱导人肝癌细胞系 h HCC(human…     

抗入肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究

本文用肝癌手术标本,制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC染色法筛选单克隆抗体,获得特异性较好的杂交瘤-HAb_(18),抗体亚类为小鼠IgG1,抗原经亲和层析获得,分子量为60KD,过碘酸-Schiffs染色阴性,脂蛋白电泳阴性,PI:8.2。肝癌免疫组化染色阳性率为75％。     

肝癌单克隆抗体——氨甲喋呤结合物对肝癌导向治疗的实验研究

本文选择鼠抗人肝癌单克隆抗体Hab18与抗癌药物氨甲喋呤(MTX)交联制备Hab-18-MTX结合物,检测该结合物的抗体活性,体外对肿瘤靶细胞的特异性杀伤作用,     

抗经干扰素处理的SMMC7721肝癌细胞系单克隆抗体HAb23的制备

作者将经人α-干扰素处理的SMMC7721肝癌细胞系作为抗原免疫小鼠,通过细胞融合,筛选得到一株具有分泌一定特异性的抗肝癌单克隆抗休HAb23细胞株,经亚类鉴定HAb23为IgG1。HAb23细胞株性质稳定。在体外连续培养3个月均有抗体分泌。将冻存的HAb23细胞复苏,其克隆的阳性率保持100％。对30例肝细胞性肝癌及其它组织进行免疫组化染色,其中25例肝癌呈阳性,阳性率达83.3％,正常肝组织、肝炎、肝硬化组织均为阴性。     

改良明胶酶谱测定明胶酶活性

基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)是能降解细胞外基质和基底膜成分的酶家族成员之一。这个蛋白家族包括胶原酶、明胶酶、基质素和膜型基质金属蛋白酶 (ＭＴ ＭＭＰ)等 5大类。ＭＭＰｓ家族成员目前已鉴定出 2 8种[1] 。ＭＭＰ的基因表达水平和酶活性的高低与许多生理或病理过程及其恶性程度相关 ,如肿瘤转移、血管浸润、骨质疏松、组织纤维化等 ,尤其是明胶酶Ａ和Ｂ(ＭＭＰ 2 ,9)在肿瘤的转移和血管生成方面起重要的作用[2 ] 。目前 ,测定明胶酶活性的方法多用明胶酶谱法 ( ｇｅｌａｔｉｎｚｙｍｏｇ ｒａｐｈｙ) ,即收集待测样本 ,处理后在含有明…     

CD147分子与MMPs在肝癌细胞系中表达的相关性

目的 研究CD147与MMPs(基质金属蛋白酶）在肝癌细胞系中表达的相关性。方法 流式细胞仪检测正常肝细胞QZG及不同肝癌细胞系（BEL－7402，QGY－7404，SMMC－7721，HHCC和HHCC－9204）中CD1474 表达；酶谱法分析其产生MMPs的含量及活性。结果 正常肝细胞株QZG中CD147表达阴性，其余5株肝癌细胞系CD147表达阳性；MMP－2和MMP－9在QZG和肝癌细胞系中均表达，但在肝癌细胞系中表达明显增高；MMP－9以酶原和活性形式表达，MMP－2仅以酶原形式表达；统计学分析CD147和MMPs表达成正相关。结论 CD147可作为判断肝癌细胞具备高侵袭转移潜能的标志。