环介导等温扩增快速检测人类嗜T淋巴细胞病毒I型方法建立

[目的]建立环介导等温扩增(LAMP)快速检测人类嗜T淋巴细胞病毒I型方法. [方法]将HTLV-I的PX基因转染pUC57构建HTLV-I检测参考菌株,针对PX基因设计LAMP和PCR引物,用正交实验设计优化反应体系,并考察方法的特异性和灵敏度. [结果]25μl LAMP最佳反应体系为:外引物02 μmol/L、内引物1.8 μmol/L、dNTP 2 000 μmol/L、Mg2+4 mmol/L、甜菜碱0.4 mol/L、BstDNA聚合酶8 U;最佳反应条件为64℃恒温反应60min.[结论]LAMP方法具有灵敏、特异、操作简便、成本低廉的特点,可为HTLV-I的快速检测提供新手段.     

非典型致病性大肠埃希菌引起食物中毒病原学研究

目的:对一起食物中毒暴发流行的病原体进行分离鉴定和分子流行病学研究。方法:采集患者和厨工肛拭子、末梢水及物表涂抹拭子共90份。通过分离鉴定、生化试验和血清学试验,确定病原菌后采用实时荧光PCR方法分别检测病原菌毒力基因eaeAi、paHs、tl、ts、tx1与stx2存在情况。其中4株病原菌全基因组经限制性内切酶XbaI酶切后,通过PFGE获得电泳图谱并进行同源性分析。结果:90份标本中22份样品分离出携带eaeA基因的EPEC。BioNumerics分析结果显示4株EPEC PFGE带型完全相同,表明来源于同一克隆株。结论:这起食物中毒是由带eaeA基因非典型EPEC引起的暴发流行。     

脉冲凝胶电泳分型在伤寒暴发中的应用

目的:探讨深圳市某区伤寒暴发在不同厂区,不同来源的伤寒沙门菌之间的遗传相关性,建立分子流行病学研究,进行同源性分析,并与表型分型比较。方法:对深圳市某街道社区10个工厂的伤寒患者分离的28株伤寒沙门菌,根据不同厂区、不同来源的伤寒菌株,采用传统的生化分型、血清学分型,肥达反应,药物敏感分型,荧光PCR及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子生物学分型的技术进行研究。结果:从93例发热现症病人的血和粪便中分离出28株伤寒沙门菌,肥达反应阳性(“O”≥1∶80;“H”≥1∶160;)59例,分离出伤寒沙门菌患者中,肥达反应阳性19例。从伤寒沙门菌菌株中抽取4个工厂患者中分离的11株伤寒沙门菌和1株乙型副伤寒沙门菌,进行了荧光PCR和脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,12株伤寒沙门菌的指纹图谱完全相同,有高度的同源性。对12株伤寒沙门菌荧光PCR检测均呈阳性,28株伤寒沙门菌生化表型相同,血清学分型相同,药敏结果有差异,肥达实验抗体滴度与健康人群比较,差异有统计学意义。结论:生化表型和血清学分型不能进行同源性分析,而通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,可追溯其同源性,通过12株伤寒菌株的PFGE分型图谱分析,菌株之间有高度的同源性,确认是由相同病原菌引起的一宗伤寒疫情。     

2008-2011年广东省深圳市龙岗区手足口病流行病学特征分析

目的 分析广东省深圳市龙岗区手足口病流行病学特征,为制定手足口病防控策略提供参考依据。 方法 收集《国家疾病报告信息管理系统》和《深圳市疾病控制信息管理系统》中相关的手足口病疫情监测资料,采用描述性流行病学方法进行综合分析。 结果 2008-2011年,深圳市龙岗区手足口病年发病率分别为45.75/10万、96.80/10万、307.48/10万和349.36/10万。不同年份发病率差异有统计学意义(P0.01)。各街道均有发病,以龙岗街道、坪地街道、布吉街道发病率较高,分别为420.37/10万、356.06/10万和259.83/10万。发病主高峰集中在4-7月, 病例数占59.59%,次高峰集中在9-11月,病例数占23.14%。人群主要集中在5岁以下儿童,职业以散居及托幼儿童为主。学校和托幼机构时有暴发。重症病例数逐年增多,2008-2011年分别为2、14、31和55例。4年间共死亡19例,2008-2011年死亡病例数分别为2、5、8和4例。 结论 深圳市龙岗区手足口病疫情处于逐年上升趋势,已成为该地区严重的公共卫生问题,应采取综合性防治措施,切实预防和控制手足口病的流行和暴发流行。     

深圳市环境水体肠道病毒监测

目的:研究肠道病毒在环境水体中的分布情况。方法:本次研究选择了五个采水点,从2010年4月-2011年12月连续每月采样,利用实时荧光RT-PCR检测水样中的肠道病毒。结果:105份水样中,肠道病毒检测呈阳性的有72份,占68.57%;各采水点之间肠道病毒的检出率无明显差异。结论:水体中肠道病毒广泛存在,有必要加强水环境中肠道病毒的监测并进一步研究水中肠道病毒对公众健康带来的风险。     

深圳市龙岗地区沙门菌的菌群分布及耐药性

目的了解深圳龙岗地区沙门菌的流行特点和耐药情况。方法以纸片扩散法（K-B法）对从该地区2003年1月-2007年1月食物中毒和伤寒、副伤寒疫情中分离的67株沙门菌进行药敏试验。结果该地区沙门菌主要流行菌群为D群，引起食物中毒最常见，占总暴发疫情的40．30％。51．85％的食物中毒由肠炎沙门菌引起。沙门菌对氟哌酸、氯霉素、氨基糖苷类及第3代头孢类抗生素完全敏感，对青霉素、苯唑西林完全耐药，对头孢氨苄的耐药率高达41．79％，对氨苄西林、羧苄市西林、哌拉西林、四环素和复方新诺明的耐药率分别为37．31％、37．31％、25．37％、25．37％和2．99％；非伤寒沙门菌对羧苄西林、氨苄西林、强力霉素、四环素、哌拉西林、美满霉素的耐药率显著高于伤寒和副伤寒沙门菌；沙门菌多重耐药率为13．00％。结论由沙门菌引起的暴发疫情在逐年增加，除四环素、氨苄西林、羧苄西林、哌拉西林和复方新诺明外，沙门菌对其他常用抗生素都敏感。非伤寒沙门菌的耐药性显著增加，加强监测非常必要。     

双重实时荧光PCR检测肠出血型大肠埃希菌stx1和stx2基因方法的建立

目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌（EHEC）产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ1标记。建立双重实时荧光PCR反应体系并对反应条件进行优化,对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析。结果建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法。菌液浓度为102～108cuf/ml时,均可观察到扩增曲线,且扩增曲线平滑;检测30份模拟临床样品,均检测到stx1和stx2基因,且均培养出EHEC,该方法灵敏度为100%;3次重复测定108、105、102cfu/ml3个高、中、低浓度的菌液DNA模板,得到其扩增曲线,计算各浓度的Ct值标准差及变异系数,均小于5%,在误差允许范围内。结论建立的双重实时荧光PCR法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC。     

深圳市龙岗区空肠弯曲菌的流行状况及分子分型

目的了解并分析深圳市龙岗区腹泻患者粪便、禽肉类等样品中空肠弯曲菌的流行状况及同源性。方法对2016年5—12月深圳市龙岗区某医院腹泻患者粪便或肛拭子样品和来自养鸡场、农贸市场、超市等地的禽畜类等样品进行空肠弯曲菌分离培养,菌株经镜检和生化鉴定后再使用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对其进行全基因组分子分型。最后应用Bio Numerics软件进行聚类分析。结果 41份腹泻患者样品分离出5株空肠弯曲菌,分离率为12.2%,全部阳性样品均来自11岁以下儿童。53份来自食品和外环境样品分离出14株空肠弯曲菌,分离率为26.4%,其中来自农贸市场的分离率为57.1%(8/14),来自不同超市样品空肠弯曲菌的分离率为11.1%(4/36)。18株菌呈现15种PFGE带型,其中来自市场1的3株菌株带型完全一致,且与病例1只有一条带的差异;来自市场2与病例5的带型完全一致且与病例4的带型只有一条带的差异。结论深圳市龙岗区腹泻患者空肠弯曲菌感染率较高,感染可能是由于食用了来自市场未煮熟的食物或接触了来自市场被空肠弯曲菌污染的食物,农贸市场存在空肠弯曲菌的交叉污染,该地区空肠弯曲菌呈现多样性。     

大肠菌群荧光定量聚合酶链反应法和多管发酵法检测结果相关性研究

目的比较大肠菌群荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和多管发酵法检测结果的相关性。方法建立大肠菌群荧光定量PCR法和多管发酵法同时检测系列浓度梯度的实验室模拟水样的大肠菌群水平,比较2种方法定量结果的相关性。结果大肠菌群荧光定量PCR能够准确检测高于10000 CFU/L水平的水样大肠菌群,在此水平以上的定量结果同多管发酵法结果具有较高相关性。结论大肠菌群荧光定量PCR法具有快速、特异、操作简便的特点,可以作为多管发酵法检测方法的补充,用于水样大肠菌群的快速定量检测。