耐异烟肼结核杆菌KatG463condon点突变的分子信标快速检测

目的应用分子信标探针检测结核杆菌耐异烟肼kat G463condon点突变,并与测序结果比较以验证该检测方法。方法运用软件对Beacondesigner设计,katG基因包含463condon的分子信标,建立其扩增体系及分子信标芯片检测方法;对扩增产物测序并作比较。结果通过CDC相机观测到结核标准株及耐异烟肼PCR产物与分子信标杂交后荧光信号区别明显;16株耐异烟肼组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐异烟肼组463condon突变检出率为37％,分子信标检测方法与测序法符合率达93％。结论分子信标技术是一种具有高灵敏核酸点突变检测技术;分子信标芯片检测方法与测序法符合率较好。     

临床检验学实习教学的探讨

医学检验学是一门实践性学科,要求学生既要掌握扎实的理论知识,又要具备娴熟的实验操作技术.而临床检验学着重要求学生掌握实验操作技术,并着力培养学生动手能力,对培养优秀的检验医师起着重要作用.多年来,我们一直探索医学检验专业的实习教学工作,现总结报告如下.     

Cad-Ⅱ基因转染的hMSCs在异种骨基质材料上的粘附和增殖研究

目的 探讨经Cad-Ⅱ(OB-Cadherin,成骨细胞特异性钙粘蛋白)基因转染的人骨髓间允质干细胞(humanmarrow mesenchymal stem cells,hMSCs)在骨基质材料上的粘附性和增殖情况.方法 将脂质体介导的Cad-Ⅱ cDNA转染体外分离培养的hMSCs,再将已转染和未转染的hMSCs分为实验组和对照组,分别与异种冻十脱钙骨基质材料复合体外构建组织工程骨,通过相差显微镜、扫描电镜及MTT检测对比观察两组细胞在材料上的黏附和增殖情况.结果 2组细胞均能在骨基质材料上粘附、伸展、增殖,其中增殖情况无明显差异(P>0.05),但Cad-Ⅱ基因转染组的上架细胞数和上架率(84.5%),显著高于未转染组(71.7%),差异显著(P<0.05).结论 Cad-Ⅱ基因转染能提高种子细胞在支架材料上的粘附性,但对细胞增殖无影响.     

结核杆菌耐链霉素Rrs基因点突变单侧延长臂发夹探针设计与检测研究

目的选择结核杆菌耐链霉素（Sm）Rrs基因包含主要突变位点的序列设计发夹探针及其单侧延长臂发夹探针,建立扩增体系及发夹探针芯片检测方法。方法运用Beacon designer软件设计Rrs基因包含主要突变位点的发夹探针及其单侧延长臂发夹探针,建立其扩增体系及发夹探针芯片检测方法,应用荧光显微镜检测荧光信号。结果通过荧光显微镜检测到标准株及耐SM株PCR产物与发夹探针杂交后荧光信号区别明显;51株耐链霉素（SM）与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐SM组Rrs基因突变检出率为29％（P〈0．05、P〈0．01）。结论发夹探针技术是一种具有高灵敏核酸点突变检测技术。单侧延长臂发夹探针对解决发夹探针在芯片表面固定难题提供了一种有效方法,采用荧光显微镜观测荧光信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。     

达英-35与二甲双胍联合治疗多囊卵巢综合征疗效观察

目的：探讨达英．35与二甲双胍联合治疗多囊卵巢综合征的临床疗效。方法：78例多囊卵巢综合征患者随机分为对照组统与观察组．对照组39例采用达英-35治疗,观察组39例采用达英-35与二甲双胍联合治疗,比较两组患者体重指数（BMI）、总睾酮（T）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、性激素结合蛋白（SHBG）变化及排卵率。结果：治疗后两组患者体重指数（BMI）、总睾酮（T）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）均较治疗前明显下降,且观察组低于对照组（P＜O．05）：治疗后两组患者性激素结合蛋白（SHBG）较治疗前明显上升,且观察组高于对照组（P＜0．05）。观察组排卵率显著高于对照组（P＜0．05）。结论：达英-35与二甲双胍联合治疗多囊卵巢综合征具有显著效果,显著提高患者排卵率,值得临床借鉴和推广。     

不同层次医学检验学生检验科实习教学浅谈

我国医学检验人员应同发达国家一样,基本可分为技师系列与医师系列。检验技师的职能是负责实验室的技术操作、质量控制及网络化管理。检验医师的职能主要是与临床沟通,参与临床查房及会诊,对检验项目的临床意义进行解释并提出建议,以完善实验室医学的诊断功能。因此,在医学检验学生实习阶段就应该为未来工作需要进行定向培训,     

SM耐药结核杆菌rpsL88codon突变发夹探针检测研究

目的：应用发夹DNA探针检测结核杆菌耐链霉素（SM）rpsL88codon点突变,并对照测序结果。方法：运用软件Beacon designer设计rpsL88codon的发夹DNA探针,建立其扩增体系及发夹DNA探针芯片检测方法;比较相应扩增产物测序结果。结果：通过ScanArray Express观测到标准株及耐SM-PCR产物与发夹DNA探针杂交后信号区别明显;耐SM组rpsL88codon突变检出率为60％,发夹DNA探针检测方法与测序法符合率85％。结论：rpsL88codon突变是结核杆菌耐链霉素的主要原因之一,发夹DNA探针技术是一种高灵敏的核酸点突变检测技术,并与测序结果有较好的检测符合率。     

乙型肝炎病毒靶序列浓度对新型肽核酸压电基因传感器阵列的影响

目的探索乙型肝炎病毒(HBV)靶序列浓度值对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响.方法压电基因传感器阵列表面先固定上1.5μmol/L的bis-PNA探针,观察终浓度为1pg/L至100μg/L的HBV DNA与探针,进行杂交所引起的频率变化及反应所需时间.并对频率下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果靶序列浓度为1pg/L时,传感器未能检测出任何频率的改变.随着浓度从10 pg/L增加到100μg/L,杂交反应引起的频率下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以10μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势.在10pg/L到10μg/L的浓度范围内,浓度与频率下降值的线性回归方程为lgC=-2.7455 0.0691×△F,相关系数r=0.9923.结论随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的频率下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为10pg/L～10μg/L.     

压电石英晶体凝血酶时间检测传感器的构建及初步研究

采用AT切向、基频10MHz的银膜石英晶体为压电元件,建立一种检测血浆凝血酶时间（TT）的压电石英晶体传感器.加入凝血酶启动凝血反应后,晶体振荡频率呈阶梯状快速下降,终点附近频率瞬时上升,然后缓慢降低达到平稳,频率下降的起点为血浆凝集反应的起始点,频率从快速上升变为下降的转折点为凝集反应终点,两点之间的时间差即为TT.该方法检测重复性较好,批内变异系数（CV）为2.26%,批间CV为7.53%,临床检测结果与STAGO检测法的相关性好（相关系数γ=0.964）.压电石英晶体传感器检测TT,凝集反应起点和终点判断方便、可靠,检测成本低廉,结果准确,是一种敏感性高、重复性好的TT检测新方法,具有推广应用价值.     

EmbB303codon突变检测的液相荧光观测研究

目的设计针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB303codon的分子信标,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子信标与embB303codon扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacondesigner设计embB基因包含303codon的分子信标,应用荧光分光光度计检测embB303codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐乙胺丁醇embB303codonPCR产物与分子信标杂交后荧光信号存在显著差异;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB303codon突变检出率为6％,测序法突变检出率为6％。结论embB303codon点突变不是结核杆菌耐乙胺丁醇的主要原因;应用荧光分光光度计直接检测液相杂交荧光具有简单、灵敏等优点;分子信标技术可以有效检测单碱基靶点突变。