Ki-67基因siRNA表达质粒的构建、鉴定及功能研究

目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒，研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用，探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67 siRNA对应模板DNA序列，煺火处理后克隆至pSliencer 3．1质粒，构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786—0细胞，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67 mRNA、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67 siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。     

靶向前列腺癌并携带SATB1基因shRNA溶瘤腺病毒的构建

目的:构建DD3启动子调控并携带SATB1基因shRNA溶瘤腺病毒,研究其对前列腺癌的特异抗肿瘤作用。方法:以pSilencer3.1-SATB1为模板,通过PCR扩增出SATB1-shRNA表达框并克隆至pZD55载体,构建重组质粒pZD55-SATB1-shRNA。EcoRⅤ和XbaⅠ分别酶切pZD55-SATB1-shRNA和pZXC2-DD3-E1A,将目的片段连接重组,获得质粒pDD3-ZD55-SATB1,将其与腺病毒包装质粒pBHGE3共转染293细胞。PCR鉴定正确者即为溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SATB1。扩增,纯化,测病毒滴度。结晶紫染色观察对前列腺癌细胞毒性;Western印迹检测E1A在列腺癌细胞中的表达;RT-PCR和Western印迹检测列腺癌细胞中SATB1基因沉默效果。结果:成功构建DD3启动子调控同时携带SATB1-shRNA的溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SATB1,初步证实DD3-ZD55-SATB1复制具有高度的前列腺癌靶向性和特异的SATB1基因沉默效果。结论:成功构建的溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SATB1为进一步体内外研究其对前列腺癌的治疗作用奠定基础。     

结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤阴茎及睾丸转移1例报告

结外鼻型自然杀伤细胞(natural killer,NK)/T细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤的一种独特类型,通常原发于鼻腔部位,发生阴茎转移的情况非常罕见,文献报道极少,很可能引起误诊。2018年11月徐州医科大学附属医院收治1例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤阴茎及睾丸转移的患者,现报告如下。     

次氯酸灌注液对经皮肾镜碎石术后炎症反应的疗效评估

目的:评估经皮肾镜碎石术(PCNL)术中灌注0.0001%次氯酸(HOCl)对预防术后全身炎症反应综合征(SIRS)的疗效。方法:选取2016年10月至2017年12月就诊于我院适合一期PCNL术的132例肾或输尿管上段结石患者,采用随机数字表法将患者分为两组,术中用0.0001%HOCl生理盐水灌注的63例作为观察组,术中用生理盐水常规灌注的69例作为对照组。观察两组术后2 h、1 d、2 d的血常规WBC、CRP、PCT的变化及术后SIRS发生情况。结果:观察组术后SIRS的发生率为9.52%,低于对照组的28.99%(P<0.05);结石培养阳性患者术后SIRS发生率为12.12%,低于对照组的51.42%(P<0.05);观察组术后1 d、2 d的WBC及术后2 h、1 d、2 d的CRP、PCT显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:PCNL术中灌注0.0001%HOCl生理盐水可降低术后SIRS发生风险,改善患者预后。     

多层螺旋CT血管成像在后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术中的应用

目的：评价多层螺旋CT血管成像（MSCTA）在后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术中的应用：方法：对3例术前超声诊断肾血管变异和2例未进行血管超声检查的乳糜尿患者,在后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术前行MSCTA肾血管扫描,比较MSCTA发现和术中所见,评价MSCTA检查对手术的指导意义。结果：5例MSCTA显示的血管数目、走行完全与术中所见一致。在MSCTA的指引下,2例患者肾脏的正常血管和3例患者的主要血管、变异血管被快速定位,血管周围淋巴管被顺利结扎。5例患者均顺利进行后腹腔镜手术治疗,无肾血管损伤。无血管畸形患者平均手术时间（67．5±17．7）min,肾血管畸形患者平均手术时间（91．7±22．5）min。术后乳糜尿消失。结论：MSCTA对后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术有重要的指导意义,特别是在肾血管存在变异的患者。     

Ki67反义多肽核酸抑制肾癌生长的体外及动物实验研究

为研究肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(AS-PNAs)对人肾癌细胞的体内外抑制作用.将AS-PNAs(10.0μmol/L)转染人肾癌786-0细胞,采用免疫组化、Western印迹技术检测Ki67表达;3H-TdR掺入试验检测细胞增殖;免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。裸鼠移植瘤内注射AS-PNAs(10.0μmol/L)连续4d后,第3、6、12天处死小鼠,取瘤组织检测肿瘤体积、Ki67表达、细胞凋亡。结果发现,AS-PNAs处理组786-0细胞Ki67表达明显降低,3H-TdR掺入率明显降低,细胞凋亡率明显增加,与随机PNAs对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。动物实验AS-PNAs处理组小鼠肿瘤体积明显缩小,Ki-67抗原表达明显降低,细胞凋亡明显增加,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。Ki67基囚AS-PNAs在体外及动物体内均有抑制增殖、促进凋亡作用,是一种有前途的反义治疗药物。     

亲属活体供肾移植14例分析

目的总结14例亲属肾移植的经验,探讨活体供肾的临床效果。方法13例为血缘亲属供肾,1例为非血缘亲属供肾,血型相同,淋巴毒试验阴性,4例HLA配型中,全配1例,单配体相同3例。4例取供者右肾,10例取供者左肾,13例经开放手术取肾,1例经腹腔镜取肾。术后采用环孢素、霉酚酸酯或硫唑嘌呤及泼尼松预防排斥反应。结果供者术后1周出院,随访1个月-1年肾功能正常。受者14例中13例至今存活,肾功能良好,1例肾失功。术后发生急性排斥反应1例,经抗淋巴细胞球蛋白冲击治疗逆转。2例发生肾功延迟恢复,分别于1周及3周肾功能恢复正常,其余12例术后3天肾功能正常,无外科并发症。结论亲属活体供肾移植组织配型好,缺血时间短,排斥反应发生率低,免疫抑制剂用量少。     

中国商环包皮环切术两种术式临床比较

目的对比内环置于包皮外板法与内环置于包皮腔内法中国商环包皮环切术的临床疗效及手术并发症.方法按单双号分组,将患者分为内环置于包皮外板法组(内环外板法组)与内环置于包皮腔内法组(内环腔内法组),每组25例.对比分析2组在手术时间、术时及术后24 h疼痛评分、失血量、创口愈合时间、术后并发症、术后外观满意率等方面的差别.结果2组手术时间、术时及术后24 h疼痛评分、失血量比较差异无统计学意义.但内环外板法组较内环腔内法组术后感染率(4%vs.32%,χ2=4.88,P<0.05)及水肿发生率(0 vs.24%,χ2=4.73,P<0.05)明显降低、创口愈合时间明显缩短﹝(12.60±1.58)d vs.(14.28±2.84)d,t=2.59,P<0.05﹞、外观满意率明显增高(100%vs.76%,χ2=4.73,P<0.05).结论内环置于包皮外板法比内环置于包皮腔内法具有操作简单、并发症发生率低、术后愈合时间短、外观满意率高等优点.     

后腹腔镜下重复肾病肾和输尿管切除术的策略

目的:探讨腹腔镜下重复肾病肾切除术的手术技巧及其疗效。方法:对19例重复肾患者进行了后腹腔镜下重复肾病肾和输尿管切除术。19例均为上位重复肾伴完全型重复输尿管畸形,其中左侧8例,右侧11例。结果:19例患者手术均顺利在后腹腔镜下完成,术中、术后均未出现明显并发症。手术时间平均110(80~180)min,出血量平均80(50~200)ml,术后住院时间平均6.6(5~9)d。术后随访3~48个月,下位健肾功能良好。结论:后腹腔镜下重复肾病肾和输尿管切除术具有创伤小、术后恢复快等优点,可作为治疗重复肾、输尿管畸形的可靠方法之一。但操作难度较大,对于初学者来说应慎重。     

膀胱小细胞癌的诊治分析及文献复习

膀胱小细胞癌(Small cell carcinoma of the urinary bladder,SCBC),是一种罕见的尿路上皮癌的病理类型,其发病率较低,占膀胱恶性肿瘤的0.5%以下,也有