mpl/G-CSFR融合受体缺失体与突变体的构建

目的：构建mpl／G-CSF融合受体胞内区不同功能域缺失体以及酪氨酸点突变体，并获取稳定转染细胞株，用以研究受体不同区域以及不同酪氨酸的功能。方法：用普通PCR法扩增融合受体短截体，用重叠延伸PCR法和QickChange定点突变法获得融合受体酪氨酸点突变体，并将mpl／G-CSFR全长融合受体转染BaF3细胞。结果与结论：获得mpl／G-CSF融合受体3个短截体和4个点突变体，并筛选到全长融合受体的稳定转染细胞株，为深入研究受体的功能奠定了基础。     

造血因子治疗急性辐射损伤的应用依据和原则的实验研究

随着核能技术在肿瘤和骨髓移植病人的医疗性照射、同位素示踪、辐照加工及核电等领域的广泛应用,辐射事故的发生也随之增加。此外,平时核设施遭到破坏或战争时期的核袭击,均可发生大量的急性辐射损伤(尤其是骨髓造血功能的损伤)病人。近十多年来,应用细胞因子来改善辐射造血损伤获得良好的疗效。然而,细胞因子的用药对象、     

小鼠胎肝造血基质细胞株无血清培养上清中造血负调控物质的初步研究

采用离子交换层析和凝胶过滤层析方法，从小鼠胎肝造血基质细胞株（ＭＦＬＳＣ株）无血清培养上清中纯化出一个对红系及粒系造血祖细胞生长表现抑制作用的组分。此抑制活性组分的分子量约为６０－７０ｋＤａ，高热和蛋白酶处理可使之灭活。文中讨论了该组分的可能本质及与胎肝造血调控的关系．     

人、犬和小鼠骨髓基质细胞的细胞骨架观察

本文观察了人、犬和小鼠体外培养骨髓基质细胞细胞骨架之异同.实验结果表明,应用Coomassie blue染色可清晰显示细胞骨架结构.人和犬的骨髓基质细胞以成纤维样细胞为多.胞体呈梭形,胞浆内有粗大的细胞骨架.其纤维丝走向与细胞长轴一致.小鼠的骨髓基质细胞由成纤维样细胞、类巨噬细胞和类网状细胞混杂组成.后两类细胞中缺乏明显的细胞骨架结构.     

脐血清对小鼠骨髓成纤维系祖细胞产率影响

目的　观察脐血清对小鼠骨髓成纤维系祖细胞 (CFU F)产率影响。方法　采用体外长期液体培养(LTC)法观察CFU F产率 ,噻唑蓝 (MTT)比色法观察基质上清液造血活性。结果　 1.脐血清可促进CFU F增殖与分化 ,加脐血清组CUU F产率为 (36 .0 0± 2 6 .6 9)集落 /1× 10 6细胞 ,显著高于成人血清组 [(7.0 0± 4 .2 4 )集落 /1× 10 6细胞 ]和对照组 (马血清 ) [(8.6 7± 2 .31)集落 /1× 10 6]细胞 (P均 <0 .0 5 ) ;2 .脐血清诱导小鼠基质细胞产生集落刺激活性 (CSA)能力低于成人血清 ,培养 3周后上清液造血活性A值分别为 0 .2 2 2± 0 .0 13和 0 .30 7± 0 .0 89,对照组 (马血清 )为 0 .2 86± 0 .0 4 9,脐血清与成人血清相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　脐血清中可能存在一些有利于小鼠CFU F增殖与分化的因素 ,而诱导基质细胞产生CSA能力低可能与脐血清白细胞介素 (IL 1)水平低有关     

过钒酸钠对60Coγ射线照射后BET-2细胞增殖反应的影响研究

目的:观察酪氨酸磷酸酶(PTP)特异性抑制剂过钒酸钠(sodiumpervanadate Per)对60Coγ射线照射后造血细胞增殖反应的影响。方法:BET2细胞经60Coγ射线照射0、1、3、5、7和10Gy后,分为Per处理组和无Per组,用MTT法测定BEL2细胞对EPO的增殖反应性。结果:60Coγ射线照射后,BET2细胞对EPO增殖反应性显著降低,并与照射剂量相关;适当浓度Per(1～31.25mmol/L)能促进BET2细胞在无EPO状态下经一定剂量60Coγ射线照射后的细胞存活和增殖。结论:60Coγ射线照射后造血细胞的损伤可能伴有造血因子受体信号转导障碍,调控造血细胞受体信号通路中PTP活性对60Coγ射线照射引发的造血细胞损伤有一定的保护作用。     

小鼠胎肝造血基质细胞株的建立及生物学特性和功能研究

小鼠胎肝造血基质细胞经原代和传代培养并克隆成细胞株。该细胞株单层贴壁生长,核分裂相较多,有丝分裂指数较高,生长有赖于马血清的存在,有密度依赖抑制现象,染色体众数4n近80者常见。在半固体培养中无集落形成,ConA凝集试验阴性。该细胞株能双向调控红系和粒系造血,其刺激性影响主要由体液因子介导,其抑制性作用尚含细胞间短距离的调节因素。其培养上清液包括无血清培养上清液具有支持红系和粒系造血祖细胞增殖分化的活性,文中讨论了实验结果与胎肝临床疗效间的可能关系。     

骨髓基质细胞的超微结构研究及其辐射血液学意义

CFU-f（colony forming unit-fibrob-lastoid）或FCFC（fibroblast colony for-ming cell）是造血组织中具有相当增殖潜能,在维持细胞池自身恒定的同时,尚可不断分化生成各类基质细胞的原始阶段细胞。     

过钒酸钠对照射后NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响

目的　为了解酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用 ,深化对造血细胞辐射损伤分子机理的认识。方法　应用MTT法观察了酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠对照射和未照射细胞增殖的影响。结果　过钒酸钠对细胞增殖的影响因培养基中G CSF浓度的不同而表现出相异的作用 :当G CSF浓度偏低时 ,一定浓度的过钒酸钠的加入可促进细胞增殖 ,而当G CSF浓度过高时 ,过钒酸钠的加入则抑制细胞生长 ;与未照射细胞相比 ,过钒酸钠对 3Gy照射细胞的促增殖作用明显加强 ,生长抑制作用相对减弱。结论　酪氨酸磷酸酶可能参与了细胞增殖的不同调控过程 ,而照射可能加强了细胞酪氨酸磷酸酶的增殖抑制作用。     

人脐血清造血刺激活性的检测

通过半固体培养法(甲基纤维素法和琼脂培养法)和液体长期培养等方法,观察了脐血清和成人血清对正常小鼠骨髓细胞的影响。结果表明:①脐血清EPO活性高于成人血清,红系祖细胞产率分别为23.2±5.4/1×10~5细胞和3.0±1.3/1×10~5细胞,差异非常显著;对PHA刺激的小鼠脾细胞培养液的活性,脐血清抑制作用较低;②以脐血清作为外源性刺激因子,可形成粒单系祖细胞21.7±16.8集落和丛/1×10~5细胞,用成人血清仅见个别小丛1.1±1.2丛/1×10~5细胞;③脐血清可促进成纤维系祖细胞(CFU-F)增殖与分化,其产率为36.0±29.7/1×10~6细胞,明显高于成人血清。提示:脐血清不仅含有丰富的红系、粒单系、巨核系祖细胞,而且造血活性也高于成人血清,因而脐血输注和移植将有广阔前景。