靶向性质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr-1CDglyTK的构建及转染研究

目的 构建靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK并进行转染研究。方法采用PCR、RT—PCR、融合PCR、酶切、连接等技术构建pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK表达载体,成功转染鼻咽癌CNE—2细胞,绘制细胞相对存活率曲线,初步研究该载体在前体药物干预下对CNE—2细胞生长的影响。结果 表达pcDNAA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK的CNE—2细胞在5—FC/GCV干预下生长受到抑制。结论pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK可作为鼻咽癌基因治疗的载体。     

EB（Epstein－Barr）病毒与细胞转化

ＥＢ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ）病毒与细胞转化邵细芸综述陈主初审阅湖南医科大学肿瘤研究所长沙４１００７８ＥＢ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）是ＤＮＡ肿瘤病毒，它不仅是传染性单核细胞增多症（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｓ，...     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷抗白

目的:研究甲基转移酶抑制荆5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60生长、分化、凋亡的影响,初步探讨其抗白血病作用的可能机制.方法:不同浓度和时间的5-aza-2dC处理HL-60细胞后,采用MTT比色试验检测5-aza-2dC对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞周期及分化的影响;采用Hochest33342染色和流式细胞术检测5-aza-2dC时HL-60细胞凋亡的影响;采用RT-PCR法检测药物处理对S100A8和S100A9基因mRNA表达水平的影响.结果:(1)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞的生长,并使HL-60细胞周期阻滞于G2/M期;(2)5-aza-2dC处理使HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,在低浓度(0.5 μmol/L)时其促分化作用最明显;(3)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地诱导HL-60细胞凋亡,在高浓度(5.0μmol/L)时诱导凋亡的作用最明显;(4)5-aza-2dC能明显上调S100A8和S100A9基因mRNA的表达.结论:5-aza-2dC能抑制HL-60细胞生长,阻滞HL-60细胞于G2/M期,促进HL-60细胞分化和诱导其凋亡,并能上调S100A8和S100A9基因的表达,这些作用可能是5-aza-2dC抗急性髓系白血病的重要机制.     

膀胱癌MDM2、p53基因表达的临床意义

我们运用点杂交、ＰＣＲ ＳＳＣＰ、免疫组化技术 (ＩＨＣ)分别对膀胱移行细胞癌(ＴＣＣ)组织和配对癌旁组织 ,以及非ＴＣＣ正常膀胱粘膜组织中ＭＤＭ2 基因扩增和表达 ,ｐ5 3表达和点突变情况进行对比检测 ,报告如下。材料与方法　ＴＣＣ及对应的癌旁组织标本各 2 3例 ,非ＴＣＣ正常膀胱粘膜标本 2 0例 ,ＨＥ染色诊断。按ＵＩＣＣ和ＷＨＯ标准 ,Ⅰ级 5例 ,Ⅱ～Ⅲ级 18例 ;Ｔｉｓ～Ｔ16例 ,Ｔ2 ～Ｔ4 17例。组织ＤＮＡ提取 ,测定样品浓度并判断纯度。根据ｐ5 3基因核苷酸序列 ,设计四对引物分别扩增 ｐ5 3基因第 5、6、7、8外显子。外显子包…     

鼻咽癌细胞系5-8F和6-10B的差异蛋白质组学研究

目的:比较不同转移潜能的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞系5-8F和6-10B细胞蛋白质组的差异,筛选NPC转移相关蛋白质.方法:应用二维凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)技术分离具有相同遗传背景、不同转移潜能的鼻咽癌细胞系5-8F和6-10B细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质,Western免疫印迹方法验证部分差异蛋白质在2株细胞中的表达水平.结果:建立了5-8F和6-10B细胞蛋白质的2-DE图谱,识别了65个差异表达的蛋白质点,鉴定了15个非冗余的差异表达蛋白质.Western免疫印迹分析证实了差异蛋白质膜联蛋白A1和14-3-3 protein sigma在5-8F和6-10B细胞中的差异表达水平.结论:15个非冗余的差异表达蛋白质为研究NPC转移机制提供了实验依据.     

NR4A1 DNA 结合域的表达纯化

目的：寻求一种核受体家族蛋白NR4A1 DNA结合域(NR4A1 DNA binding domain,NR4A1-DBD)表达纯化的 方法。方法：构建融合蛋白PET28a-NR4A1-DBD表达载体,分别通过镍亲和层析、阳离子交换层析及凝胶过滤的方法 对目的蛋白进行纯化。结果：PET28a-NR4A1-DBD蛋白在低温诱导(24 ℃)时多以可溶性形式存在,通过此纯化,可达 到每升培养基产生2~3 mg蛋白,纯度高达95%以上。结论：镍亲和层析是一种可靠、实用的蛋白表达纯化方法,后续 使用阳离子交换层析及凝胶过滤可以进一步提高蛋白纯度。     

反义四环素转录激活子表达细胞系的构建及鉴定

目的:构建反义四环素转录激活子(reverse Tc-controlled transactivator,rtTA)表达细胞系。方法:将RevTet-On基因表达系统中调控载体pRevTet-On转染NIH3T3细胞,经G418筛选及RT-PCR鉴定。结果:获得7个rtTA不同表达水平的细胞克隆。结论:成功构建rtTA表达细胞模型,为进一步研究特定外源基因的功能提供一个理想实验平台。     

170例乳腺癌标本药物敏感性分析

检测１７０例原代乳腺癌细胞对常用化疗药物的体外敏感性。发现：①乳腺癌细胞对５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ），丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ），顺铂（ＤＤＰ）及泰素（ｔａｘｏｌ）的高度敏感率（ＨＳＲ）明显高于其它受试药物（Ｐ＜０．０５）；②药物敏感性与乳癌的病理分型和临床分期、以及雌激素受体（ＥＲ）和表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达状况无明显关系（Ｐ＞０．０５）；③环孢素Ａ（ＣｓＡ）能提高部分耐药乳腺癌对阿霉素（ＡＤＭ）的敏感性     

人Endostatin cDNA的克隆及其在HT1080细胞中的表达

目的 :构建能表达人Endostatin的真核表达质粒。方法 :设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到EndostatincDNA ,并在 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(- )中。将携带基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后用G4 18筛选获得克隆 ,采用RT PCR和West ern blot检测Endostatin的表达。结果 :测序结果表明克隆的人EndostatincDNA完全正确 ,并且在其 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ;RT PCR显示转染后的HT10 80细胞可以有效地转录EndostatinmRNA ;Western blot检测到转染后的HT10 80细胞上清有相应的蛋白质 ,大小为 2 0kD左右。结论 :含有人胰岛素信号肽序列的人EndostatincDNA重组质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后可以有效的表达目的蛋白并能分泌到细胞外 ,本研究为Endostatin的功能研究及应用于基因治疗提供基础     

TGF-α对鼻咽癌CNE2细胞作用的蛋白质组学分析

目的通过蛋白质组学方法观察转化生长因子α（transforming growth factor α，TGF—α）对鼻咽癌细胞系CNE2蛋白质表达谱的影响，从而解析表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor，EGFR）在鼻咽癌中的作用信号途径。方法以TGF—α作为配体，激活EGFR信号通道，采用无血清细胞培养法，将鼻咽癌CNE2细胞在有或没有TGF-α作用下培养24h，收集2组细胞总蛋白，通过比较蛋白质组学方法分析蛋白表达谱的变化，质谱鉴定差异蛋白质。结果鉴定了16个差异蛋白，包括EF—Tu precursor、triosephosphate isomerase、nucleoside—diphosphate kinase、annexin A1、hemoglobin beta chain、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H等，它们广泛参与了信号转导、细胞凋亡与侵袭转移等重要生理过程。结论EGFR可能通过上述差异蛋白所介导的信号转导途径而发挥作用，为鼻咽癌细胞EGFR信号通路的深入研究提供了依据。