胃癌中P16、Rb蛋白表达分析

目的：研究p16和Rb基因表达产物P16、Rb蛋白与胃癌发生发展的关系及分析胃癌组织中p16、Rb基因表达的相互关系。方法：运用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶（S－P）免疫组织化学方法检测胃癌、癌前病变及正常胃粘膜组织中P16、RB蛋白的表达。结果：P16、Rb蛋白表达阳性率分别为：正常胃粘膜96．25％（77／80）、98．75％（79／80），不典型增生92．00％（46／50）、80．00％（40／50）；胃癌47．54％（58／122）、59．84％（73／122），胃癌组中P16、Rb蛋白表达低于正常胃粘膜及不典型增生（P＜0．05）；胃癌中P16、Rb蛋白的表达的相互关系；P16、Rb蛋白均为阳性15．56＄（14／90），P16、Rb蛋白 均为阴性7．78％（7／90），P17蛋白阳性、Rb蛋白阴性33．33％（30／90），P16蛋白阴性、Rb蛋白阳性43．33％（39／90），P16、Rb蛋白表达呈负相关（P＜0．05）。结论：P16、Rb蛋白表达缺失与胃癌的发生发展有关；胃癌组织中P16蛋白与Rb蛋白表达呈负相关关系。     

人MT-1E融合蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 :体外表达人源性MT 1E融合蛋白并进行纯化。方法 :采用RT PCR方法获得人MT 1E基因的编码区 ,将其克隆入原核表达载体pQE4 0 ,并在大肠杆菌M15中表达 ,对蛋白的表达形式及诱导条件进行分析 ,用Ni NTagarose亲和层析柱纯化目的蛋白。结果 :重组蛋白在原核细胞中以可溶和不可溶两种表达形式存在 ,但以不可溶性形式为主 ,表达量随诱导时间延长而增加 ,在诱导 8h时目的蛋白约占菌体总蛋白的 32 %。经亲和层析获得较高纯度的人MT 1E融合蛋白。结论 :利用基因重组原核表达技术获得较纯的人源性MT 1E融合蛋白 ,为进一步研究金属硫蛋白的功能及特异性抗体的制备奠定了基础。     

鼻咽癌癌变分子机制研究现状

鼻咽癌（NPC）是较常见的上皮源性恶性肿瘤，其发病率在我国南方、东南亚一带较欧美国家的白种人群要高出至少25倍。近年来随着分子生物学技术的发展,人们对抑癌基因、癌基因等在鼻咽癌的发病学上进行了深入研究，并在EB病毒的致癌性方面有了一些重要进展。本文结合国内外的研究结果，概述鼻咽癌癌变的分子机制。     

SH2B1调控JAK2/IRS2在肥胖症发病中的分子机制

目的：研究JAK2接头蛋白SH2B1调控JAK2/IRS2在肥胖症发病中的作用及其分子机制。方法：采用高效稳定表达瘦素受体的细胞株HEK239LRb和SH2B1基因缺失小鼠,Western 印迹、［γ-32P］-ATP体外激活分析法分析瘦素信号通路关键分子JAK2和IRS2的酪氨酸磷酸化水平;ELISA法测定小鼠血清瘦素水平;检测出生后至27周小鼠体质量。结果：在高效稳定表达瘦素受体细胞株HEK239LRb中,SH2B13显著增强瘦素刺激的JAK2激酶活性和IRS2磷酸化;在SH2B1基因缺失小鼠中,瘦素刺激JAK2激酶活性和IRS2酪氨酸磷酸化水平均显著降低;无论空腹还是随机给食,SH2B1基因缺失小鼠血清瘦素水平均升高并发展为高瘦素血症,其血清瘦素水平与同窝野生型小鼠相比分别增加3.2倍和5.1倍。5 周后,SH2B1基因缺失小鼠体质量逐渐增加,21周龄时,大约为同窝野生型小鼠2倍。结论：JAK2接头蛋白SH2B1是内源性瘦素敏感性增强子,通过瘦素JAK2/IRS2信号通路参与瘦素对体质量的调节,SH2B1基因缺失小鼠易发展为高瘦素血症及肥胖。     

膜联蛋白A1基因甲基化对鼻咽癌淋巴结转移的影响

 目的 检测鼻咽癌组织膜联蛋白A1基因（annexin A1）甲基化状态,并初步探讨其在鼻咽癌中的意义。 方法 收集75例鼻咽癌原发肿瘤活检组织和25例慢性鼻咽炎鼻咽黏膜活检组织,采用甲基化特异性聚合酶链式反应检测annexin A1甲基化状态,半定量逆转录聚合酶链式反应检测annexin A1 mRNA表达水平,免疫组织化学染色检测膜联蛋白A1(ANNEXIN A1)表达强度。对annexin A1甲基化状态和ANNEXIN A1表达强度与鼻咽癌患者的性别、年龄、肿瘤分期进行相关性分析。 结果 75例鼻咽癌组织annexin A1完全甲基化、不完全甲基化和未甲基化例数分别为7例、62例和6例,慢性鼻咽炎鼻咽黏膜组织不完全甲基化和未甲基化的例数分别为3例和22例,鼻咽癌annexin A1甲基化频率显著高于慢性鼻咽炎鼻咽黏膜组织（92% vs. 12%,χ2=60;P<0.05）。annexin A1基因完全甲基化的组织样本不表达annexin A1 mRNA和ANNEXIN A1,不完全甲基化的组织样本annexin A1 mRNA和ANNEXIN A1表达显著降低。相关分析结果显示annexin A1甲基化和蛋白质表达强度与鼻咽癌患者的性别、年龄、原发肿瘤分期、临床分期无相关性,与鼻咽癌淋巴结转移相关。结论 鼻咽癌组织annexin A1高频甲基化,甲基化导致ANNEXIN A1表达降低或缺失,促进肿瘤淋巴结转移。     

肺癌候选抑瘤基因HLCDG1片段的验证及全长序列的克隆

目的： 对肺癌候选抑瘤基因HLCDG1片段（已知序列）进行验证,并克隆其全长cDNA序列。方法: 采用RT-PCR和末端快速扩增技术(RACE),对正常人肺组织中HLCDG1基因片段进行验证和克隆其全长cDNA序列,登录基因数据库进行比对分析。结果: 从正常人肺组织中钓取到HLCDG1基因未知的3’端和5’端序列分别为1 304 bp和1 548 bp。HLCDG1基因与人酪蛋白激酶Ⅰα（CSNK1A1）基因2号转录变体相似性达99%,score=5 544,E=0。结论: HLCDG1基因为已知的CSNK1A1基因的2号转录变体,可能参与肺癌发生发展。     

一个新的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体的克隆及鉴定

目的:克隆并鉴定NPCEDRG基因mRNA剪接变异体.方法:利用5’-RACE、3’-RACE在CNE2细胞中对NPCEDRG基因mRNA剪接变异体进行扩增,T/A克隆入pMD20载体,所获得的阳性重组子经测序证实.结果:成功克隆得到一种新的NPCEDRG基因的mRNA剪接变异体V2,其TSS位于-23 nt处,其CD...     

大鼠鼻咽癌癌前变、癌变及化学性预防的实验研究

本文描述了二亚硝基哌嗪(DNP)诱发大鼠鼻咽癌的某些形态学特点,着重对比了癌前变和早期癌变的“标记”变化;同时就维生素A和单核苷酸钠盐对化学性预防的实验结果进行了分析。结果表明维生素A可阻断二亚硝基哌嗪引起的异型增生向癌变发展;单核苷酸对异型性有抑制作用但对癌变似有促进作用。     

骨髓基质干细胞豚鼠内耳移植初步观察

目的建立骨髓基质干细胞(marrow stromal cell，MSC)内耳移植技术，研究内耳细胞移植的可行性。方法将豚鼠骨髓基质干细胞分离培养，用4，6-联脒-2-苯基吲哚(4，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)荧光标记，采用显微注射技术在耳蜗底周鼓阶钻孔，通过钻孔处缓缓注入细胞，术后14天处死，行耳蜗石腊切片，荧光显微镜及HE染色观察移植细胞成活情况。结果骨髓基质干细胞内耳移植成活，并贴壁生长。结论成功地建立了骨髓基质干细胞内耳移植技术，为进一步研究MSC在内耳的分化和表达奠定了重要的基础。     

靶向性质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr-1CDglyTK的构建及转染研究

目的 构建靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK并进行转染研究。方法采用PCR、RT—PCR、融合PCR、酶切、连接等技术构建pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK表达载体,成功转染鼻咽癌CNE—2细胞,绘制细胞相对存活率曲线,初步研究该载体在前体药物干预下对CNE—2细胞生长的影响。结果 表达pcDNAA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK的CNE—2细胞在5—FC/GCV干预下生长受到抑制。结论pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK可作为鼻咽癌基因治疗的载体。