细胞移植及其在耳蜗疾病中的应用

本文综述了近年来体细胞移植技术在心脏、中枢神经系统、内分泌系统、肝脏疾病中应用,阐述了内耳体细胞移植技术的可行性与存在的问题,提出了细胞移植技术对耳聋防治可能具有广阔的应用前景.     

基于生物质谱的定量蛋白质组学分析策略

生物质谱技术作为蛋白质组学研究的关键技术 ,在定量蛋白质组学分析中起着十分重要的作用。目前基于生物质谱的定量蛋白质组学分析策略主要有 :荧光染色差异显示双向电泳、同位素代谢标记、同位素亲和标记 ,氨基酸化学标记和肽质图谱差异比较等     

蛋白质组阵列技术的现状与展望

蛋白质组就是展示一个细胞或组织或机体的全部蛋白质。目前双向凝胶电泳特别是固相 p H梯度等电聚焦的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,是分离阵列蛋白质组成分的核心技术 ,但仍存在诸多不足 ,通过改善蛋白溶解、阵列策略和蛋白斑点的探测技术 ,使蛋白质组阵列技术取得了进展     

喉癌相关基因 LCRG1蛋白的细胞亚定位及生物学特性研究

目的：研究我们实验室最近克隆的喉癌相关基因LCRG1编码蛋白的细胞定位以及其是否具有抑瘤功能。方法：采用绿色荧光蛋白（GFP）荧光定位的方法,研究该基因编码蛋白的细胞亚定位;通过绘制细胞生长曲线,以及运用转染细胞软琼脂集落形成试验和裸鼠致瘤试验,研究喉癌相关基因LCRG1在喉癌细胞系Hep-2中的生物学特性。结果：喉癌相关基因LCRG1编码的蛋白定位在细胞核内;将CLRG1cDNA导入到不表达该基因的喉癌细胞系Hep-2中,观察到明显的生长抑制作用,表现为抑制Hep－2细胞的停泊非依赖性生长和抑制裸鼠致瘤性。结论 ：喉癌相关基因LCRG1具有一定的抑瘤功能。     

喉部相关基因LCRG1的鉴定和功能初步研究

喉癌是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤。选用在mRNA差异显示研究中获得的喉癌组织中表达显著下调且代表新基因的EST之一（AF10056）,设计引物进行cDNA文库筛选,得到一全长为3448bp的cDNA序列,其开放读码框编码288个氨基酸,与已知蛋白无明显同源性,属一新发现的基因,GenBank接受号为AF268387。与GenBank数据库匹配分析,发现该基因包含6个外显子,基因组DNA跨越60多kb, 定位于染色体17q12-21.1上,为喉癌等许多肿瘤的高频杂合性质丢失区域。MTN膜杂交显示该基因在多组织中表达。差异RT－PCR显示有40A％（12／30）的喉癌组织表达下调,RT－PCR显示有54．5％（6／11）其他肿瘤细胞系表达缺失。通过GFP荧光定位的方法,发现该基因编码的蛋白定位在核内。把该基因命名为喉癌相关基因（LaryngeaI Carcinonm Related Gene 1,LCRG1)。将LCRG1cDNA导入到此基因不表达的喉癌细胞系Hep-2中,观察到明显的生长抑制;抑制Hep-2细胞的停泊非依赖性生长和抑制裸鼠致瘤性。上述结果提示：喉癌相关基因LCRG1与喉癌的发生发展密切相关。     

92. 喉癌相关基因LCRG1的鉴定和功能初步研究

喉癌是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤。选用在mRNA差异显示研究中获得的在喉癌组织中表达显著下调且代表新基因的EST之一（AF10056）,设计引物进行cDNA文库筛选,得到一全长为3448bp的cDNA序列,其开放读码框编码288个氨基酸,与已知蛋白无明显同源性,属一新发现的基因,GenBank接受号为AF268387。与GenBank数据库匹配分析,发现该基因包含6个外显子,基因组DNA跨越60多kb,定位于染色体17q12～21.1上,为喉癌等许多肿瘤的高频杂合性丢失区域。MTN膜杂交显示该基因在多组织中表达。差异RT-PCR显示有40％（12／30）的喉癌组织表达下调,RT-PCR显示有54.5％（6／11）其他肿瘤细胞系表达缺失。通过GFP荧光定位的方法,发现该基因编码的蛋白定位在核内。把该基因命名为喉癌相关基因（LaryngeaI Carcinoma Related Gene 1,LCRG1）。将LCRG1 cDNA导入到此基因不表达的喉癌细胞系Hep-2中,观察到明显的生长抑制;抑制Hep-2细胞的停泊非依赖性生长和抑制裸鼠致瘤性。上述结果提示：喉癌相关基因LCRG1与喉癌的发生发展密切相关。     

鼻咽癌FRA3B脆性部位的微卫星不稳定性分析

目的 探讨鼻咽癌染色体脆性部位FRA3B区域的微卫星不稳定性（Microsatellite Instability,MSI）。方法 选择FRA3B区域附近的6个微卫星多态标记对30例鼻咽癌进行MSI分析。结果 MSI的发生率为63．33％（19／30）,其中复制错误（Replication Errors,RER)阳性率为36．67％（11／30）。MSI频率较高的3个位点为D3S1547（30．8％）、D3S1313（34．6％）和D3S1300（37．5％）。临床Ⅰ－Ⅱ期患者MSI频率高于Ⅲ－Ⅳ期（P＜0．05）。结论 提示FRA3B脆性部位的MSI为鼻咽癌形成过程中的早期分子事件,可能参与了鼻咽癌的发病。     

鼻咽癌成纤维细胞分泌性蛋白质的变化分析

目的 建立细胞分泌性蛋白质组学研究方法,分析鼻咽癌形成过程中成纤维细胞分泌蛋白的变化特征.方法 分别收集5份鼻咽癌和正常鼻咽组织标本,无血清培养成纤维细胞,收集细胞上清液,超滤法脱盐并浓缩上清液中分泌性蛋白,运用双向凝胶电泳(2-DE)技术建立分泌性蛋白表达图谱;并用比较蛋白质组学方法分析2组成纤维细胞分泌蛋白的差异,基质辅助激光解析飞行时间质谱分析鉴定差异蛋白;ELISA分析2组细胞上清液中半乳糖凝集素1的表达.结果 用自建细胞分泌性蛋白2-DE图谱,从2组细胞上清液中筛查出表达差异大于2倍的蛋白质点18个,质谱分析鉴定出11个分泌性蛋白;其中半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、补体组分Cls前体、不均一性核糖核蛋白Al在鼻咽癌间质成纤维细胞(CAFs)上清液中表达下调,而其余8个包括半乳糖凝集素1、14-3-3sigma蛋白、组织蛋白酶L等分泌性蛋白在CAFs上清液中表达上调;2组细胞上清液中半乳糖凝集索1分别为(4.95±0.76)ng/ml、(9.90±0.36)ng//ml(CAFs组),二者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 鼻咽癌形成过程中成纤维细胞分泌性蛋白的变化涉及细胞信号转导、蛋白合成与降解等途径,CAFs可能通过上述途径调控肿瘤微环境,影响鼻咽癌的发生、发展、侵袭转移;这为今后分泌组学研究奠定了实验基础.     

癌基因与化学致癌研究

自Miller等对化学致癌进行深入研究以来,多数人认为:致癌物经代谢活化为终致癌物、作用于靶细胞,形成致癌剂-DNA加合物,引起DNA损伤和生物特性改变,导致细胞突变和癌变;病毒学者们则强调病毒的致癌作用,提出了“前病毒”、“瘤基因”、“原生病毒”学说;二者之间未能取得共同可接受的观点。随后人们采用DNA重组、分子克隆和基因转移等技术,找到了长期以来臆测的致癌基因,从而有可能使二者殊途同归。如癌变分激发和促进二阶段,最初是由化学致癌研究者阐明的,近来亦被病毒学者尤为持癌基因观点的人们所接受。从此癌基因学说受到普遍重视,成为细胞癌变原理研究中十分活跃的理论。为此本文先扼要介绍癌基因的生物特性,再重点探讨化学致癌与癌基因的关系。     

亚细胞蛋白质组学研究

在蛋白质组学研究中首先要应用各种分离技术如双向电泳等将蛋白分离纯化,然后结合质谱技术、生物信息学方法对蛋白质进行鉴定。但细胞内的蛋白质种类繁多,性质多样．丰度差异大,常规蛋白质组学方法不能做到分离和检测细胞中的全部蛋白质。亚细胞蛋白质组学研究的着眼点在蛋白质组的特定成分,而非整个蛋白质组,能够有效弥补目前蛋白质组