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161.
目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响,并进一步分析5-aza-2dC处理对14-3-3σ基因甲基化状态的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞,MTT实验观察细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡比例,用甲基化特异性PCR(MSP)分析14-3-3σ基因甲基化状态。结果5-aza-2dC对4株细胞均有生长抑制作用,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。5-aza-2dC处理使4株细胞凋亡率出现剂量依赖性的增加,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。经5-aza-2dC处理后,CNE1、CNE2、6-10B细胞出现不同程度的G0/G1期阻滞,而5-8F表现为G0/G1期和G2/M期双期阻滞。不经5-aza-2dC处理情况下4株细胞14-3-3σ基因均存在不同程度的甲基化,5-aza-2dC处理能够使14-3-3σ基因去甲基化。结论5-aza-2dC具有抗鼻咽癌作用,抑制作用强弱可能与鼻咽癌分化程度和转移潜能有一定关系,其机制可能与使14-3-3σ等抑瘤基因去甲基化有关。 相似文献
162.
肺癌相关基因克隆策略与进展 总被引:1,自引:0,他引:1
肺癌和其它肿瘤一样是遗传和环境等诸多因素的相互作用所致 ,涉及到大量相关基因结构和表达调控的改变。寻找肺癌致病相关基因是阐明肺癌分子发病机制的关键。基因识别的基础在于其表型 ,但对于肺癌来说 ,其表型是遗传因素与环境因素相互作用的复杂表现 ,无法运用功能克隆法来寻找其相关基因。目前大多采用的方法和策略有定位克隆法、定位候选克隆法和差异筛选法 相似文献
163.
背景与目的LCRG1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因.先前的研究显示将LCRG1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用.本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选LCRG1抑瘤作用相关的蛋白质.方法抽提稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白.考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质.结果获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1 075±43和1027±23,平均匹配率为91%.图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOF MS/MS鉴定了4个.对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质.结论建立了稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与LCRG1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究LCRG1作用的分子机制提供新的线索. 相似文献
164.
双向凝胶电泳—飞行时间质谱法分析人肺鳞细胞NCI—H520蛋白质组成分 总被引:20,自引:1,他引:20
目的:建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统,并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法:用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系NCI-H520总蛋白,银染显色,PDQuest 2DE软件分析,对部分蛋白质 点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flying mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用 PeptIdent软件查询 SWISS-PROT数据库。结果:获得了分辨 率和重复性均较好的双向电泳银染图谱,图像分析探测到3块胶的平均蛋白质点数为(1146±116),平均匹配的点 数为(851±95),匹配率达 73. 7%, 3 块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性, IEF方向的平均偏差为(1. 52± 0.22)mm,SDS-PAGE方向的平均偏差为(1.97 ± 0.13)mm。随机取60个蛋白质点进行胶内原位酶解-质谱指纹图 分析得到了54个蛋白质点的肽质指纹图,查询数据库初步鉴定了44个蛋白质,其中部分是与细胞周期有关的蛋 白,部分是与信号传导有关的蛋白,部分 相似文献
165.
目的 研究鼻咽癌细胞株14-3-3σ基因启动子甲基化状况及去甲基化处理对其表达的影响.方法 用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)和逆转录PCR方法检测鼻咽癌细胞株CNEI、CNE2、5-8F、6-10B和非肿瘤人鼻咽上皮细胞NP69细胞14-3-3σ基因启动子甲基化状况和mRNA表达水平.用不同浓度5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dC)处理鼻咽癌细胞株72 h,检测处理组和对照组14-3-3σ基因启动子甲基化状况和mRNA表达水平,并用Western-blot检测14-3-3σ蛋白表达情况.结果 NP69细胞14-3-3σ启动子未检测到甲基化,CNE1、CNE2、5-8F、6-10B细胞14-3-3σ基因启动子都存在甲基化,4株肿瘤细胞的14-3-3σ mRNA表达水平显著低于NP69细胞.5-aza-2dC处理能剂量依赖性地逆转鼻咽癌细胞14-3-3σ启动子的甲基化状态并上调其mRNA和蛋白质的表达水平,高分化细胞株(CNE1)对药物的敏感性高于低分化细胞株(CNE2、5-8F和6-10B).结论 启动子甲基化是导致鼻咽癌细胞株14-3-3σmRNA和蛋白质表达降低的直接原因,14-3-3σ启动子去甲基化可能成为鼻咽癌治疗的新靶点. 相似文献
166.
目的:探讨Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对鼻咽癌细胞增殖的影响。 方法:采用脂质体转染方法将反义RKIP核酸表达质粒pcDNA3.1(-)-asRKIP及空白载体pcDNA3.1(-)分别转染鼻咽癌细胞系6-10B细胞,用Western 印迹检测RKIP表达,建立RKIP表达下调的稳定转染细胞和对照细胞系。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术和软琼脂集落形成实验检测RKIP表达下调对鼻咽癌细胞增殖、细胞周期分布和停泊非依赖性生长的影响。结果:建立了RKIP表达下调的6-10B鼻咽癌细胞系;RKIP表达下调促进6-10B细胞增殖和停泊非依赖性生长,并加速其越过G0/G1期。结论:RKIP具有抑制鼻咽癌细胞增殖和停泊非依赖性生长的作用,可能在鼻咽癌发病中具有重要作用。 相似文献
167.