人CYP450 2E1异源性表达模型的建立及底物的表达诱导作用

目的:探讨化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)对人CYP2E1异源表达的诱导作用。方法:脂质体介导法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞,G418筛选后挑取克隆,Southernblot鉴定外源基因的整合,用不同浓度乙醇和DNP处理阳性克隆,RT-PCR和Westernblotting检测各组细胞CYP2E1表达水平。结果:获得二个具有外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆;随着乙醇和DNP处理浓度的提高,细胞CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论:DNP与乙醇能稳定诱导CYP2E1异源表达,其作用可能与其mRNA转录增强有关;DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关。     

Sorcin蛋白质高表达与胃癌细胞多药耐药的关系

目的：应用蛋白质组学技术筛选胃癌耐药相关的蛋白质。方法：以胃癌细胞SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃癌细胞SGC7901／VCR为研究对象，应用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）技术分离两种细胞的总蛋白，图像分析识别差异表达的蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）及电喷雾串联质谱（ESI-Q-TOF）对差异表达的蛋白质点进行鉴定。Western blot验证差异蛋白质的表达水平，反义核酸技术分析差异蛋白与胃癌耐药的关系。结果：可溶性耐药相关性钙结合蛋白（sorcin）在SGC7901／VCR细胞中高表达，反义核酸抑制sorcin表达可增强SGC7901／VCR对长春新碱的化疗敏感性。结论：Sorcin蛋白质高表达与胃癌细胞多药耐药密切相关。     

与肺癌呈负相关表达的cDNA序列鉴定

目的 :通过进一步鉴定mRNA差异显示获得肺癌差异表达的cDNA序列 ,为克隆肺癌相关基因打下基础。方法 :采用逆转录酶聚合酶链反应 (RT PCR)、Northern印迹杂交和Southern印迹杂交方法检测表达序列标签 (EST)LXDD1在肺癌组织和肺癌细胞系中的表达及缺失。　结果 :RT PCR、Northern印迹杂交证实LXDD1序列在肺癌及正常肺支气管粘膜组织中表达存在差异 ,Southern 印迹杂交结果显示其在肺癌组织中未见缺失。　结论 :LXDD1在肺癌组织中表达下调 ,提示其缺失可能与肺癌的发生、发展密切相关     

170例乳腺癌标本药物敏感性分析

检测１７０例原代乳腺癌细胞对常用化疗药物的体外敏感性。发现：①乳腺癌细胞对５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ），丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ），顺铂（ＤＤＰ）及泰素（ｔａｘｏｌ）的高度敏感率（ＨＳＲ）明显高于其它受试药物（Ｐ＜０．０５）；②药物敏感性与乳癌的病理分型和临床分期、以及雌激素受体（ＥＲ）和表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达状况无明显关系（Ｐ＞０．０５）；③环孢素Ａ（ＣｓＡ）能提高部分耐药乳腺癌对阿霉素（ＡＤＭ）的敏感性     

鼻咽癌中EGFR调控APP信号通路的初步研究及其意义

目的 探索鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)调控β淀粉样蛋白前体(amyloid beta A4 protein,APP)的信号通路及其临床意义.方法 采用转化生长因子(transforming growth factors-α,TGF-α)诱导CNE2细胞24 h作为研究模型,分别采用EGFR酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂PD153035,MAPK抑制剂PD98059,PI3K抑制剂Wortmannin处理2 h再用TGF-α作用24 h作为实验组,Western blot检测阻断剂APP蛋白的表达和分泌变化情况.免疫组化检测EGFR和APP蛋白在NPC与慢性鼻咽炎症上皮组织中的表达差异.结果 PD153035+TGF-α组APP蛋白表达与分泌有所下调,wortmannin+TGF-α组APP蛋白下调明显,PD98059+TGF-α组APP表达无明显变化.EGFR和APP在NPC组织中的表达高于鼻咽炎症上皮组织,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NPC中APP蛋白主要受EGFR信号通路中的PI3K调控,EGFR和APP与NPC的发生有关.     

激光捕获显微切割技术纯化的肺鳞癌原发灶与 淋巴结转移灶肿瘤细胞的比较蛋白质组学

目的：筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。 方法：采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质;图像分析识别差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点,Western印迹验证差异蛋白Rho-GDIα在LCM纯化的肺鳞癌原发灶肿瘤细胞（lung primary tumor cells, LPTC）和匹配的淋巴结转移灶肿瘤细胞（lymph node metastatic tumor cells, LNMTC）中的表达。结果：建立了LCM纯化的LPTC和匹配的LNMTC的2-DE图谱,质谱鉴定了22个差异蛋白质,与LPTC相比,8个蛋白质在LNMTC中表达明显增高。结论：22个差异蛋白可能与肺鳞癌淋巴结转移有关,为筛选肺鳞癌转移标志物奠定了基础。     

激光捕获显微切割技术纯化的肺鳞癌原发灶与淋巴结转移灶肿瘤细胞的比较蛋白质组学

目的：筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。方法：采用激光捕获显微切割技术（lasercapture microdissection,LCM）分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）分离LCM纯化细胞的蛋白质;图像分析识别差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点,Western印迹验证差异蛋白Rho-GDIα在LCM纯化的肺鳞癌原发灶肿瘤细胞（lung primary tumor cells,LPTC）和匹配的淋巴结转移灶肿瘤细胞（lymph node metastatic tumor cells,LNMTC）中的表达。结果：建立了LCM纯化的LPTC和匹配的LNMTC的2-DE图谱,质谱鉴定了22个差异蛋白质,与LPTC相比,8个蛋白质在LNMTC中表达明显增高。结论：22个差异蛋白可能与肺鳞癌淋巴结转移有关,为筛选肺鳞癌转移标志物奠定了基础。     

人Endostatin cDNA的克隆及其在HT1080细胞中的表达

目的 :构建能表达人Endostatin的真核表达质粒。方法 :设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到EndostatincDNA ,并在 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(- )中。将携带基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后用G4 18筛选获得克隆 ,采用RT PCR和West ern blot检测Endostatin的表达。结果 :测序结果表明克隆的人EndostatincDNA完全正确 ,并且在其 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ;RT PCR显示转染后的HT10 80细胞可以有效地转录EndostatinmRNA ;Western blot检测到转染后的HT10 80细胞上清有相应的蛋白质 ,大小为 2 0kD左右。结论 :含有人胰岛素信号肽序列的人EndostatincDNA重组质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后可以有效的表达目的蛋白并能分泌到细胞外 ,本研究为Endostatin的功能研究及应用于基因治疗提供基础     

乳腺癌耐受蛋白介导的5-氟尿嘧啶耐受及机制

目的筛选乳腺癌耐受蛋白(BCRP)介导的耐受药物,探讨BCRP介导抗肿瘤药物耐受的机制,优化以BCRP表达检测结果为评价指标,为肿瘤临床化疗方案提供有价值的资料。方法不同浓度的抗肿瘤药物分别处理BCRP呈不同程度表达的PA317/Teton/TREBCRP细胞,经MTT法筛选出BCRP介导的耐受药物。高效液相色谱仪检测耐受药物在细胞内的相对剂量。采用核DNA染料Hochest33258荧光染色技术和流式细胞术检测耐受药物诱导的细胞凋亡。结果随着细胞BCRP表达的增高,PA317/Teton/TREBCRP细胞对5氟尿嘧啶(5Fu)、甲氨蝶呤、多柔比星、吡柔比星、依托泊苷、米托蒽醌等药物的耐药指数增高(P<0.05),而对如紫杉醇、顺铂、长春碱、丝裂霉素、长春地辛等药物均敏感。细胞的BCRP表达量与胞内5Fu浓度具有负相关性(r=-0.885,P<0.05)。随着细胞BCRP表达的增高,经5Fu处理后细胞凋亡率随之降低(P<0.05),而Ko143能显著提高BCRP表达细胞的凋亡率(P<0.05)。结论BCRP能增强细胞对5Fu所致的凋亡耐受。     

用BrdU作探针检测RA对HL-60细胞的诱导分化作用

用溴脱氧尿嘧啶核苷(Erdu)作探针标记人早幼粒白血病细胞株HL-60,并用抗Brdu的单克隆抗体(Anti-Brdu)和免疫组化法追踪观察HL-60细胞在全反式维甲酸(RetinoiolAcid,RA)作用下走向分化成熟的可能性。实验发现,经RA处理前,Brdu标记细胞均为早幼粒细胞,经RA处理5天后,Brdu标记细胞中有21％以上分化成熟为杆状核,分叶核粒细胞。由于这些细胞已处于终末分化期,不再进行DNA合成,故细胞中的Brdu是在细胞分化早期掺入的,从而直接证明HL-60细胞可在RA作用下走向分化成熟。