用BrdU作探针检测RA对HL-60细胞的诱导分化作用

用溴脱氧尿嘧啶核苷(Erdu)作探针标记人早幼粒白血病细胞株HL-60,并用抗Brdu的单克隆抗体(Anti-Brdu)和免疫组化法追踪观察HL-60细胞在全反式维甲酸(RetinoiolAcid,RA)作用下走向分化成熟的可能性。实验发现,经RA处理前,Brdu标记细胞均为早幼粒细胞,经RA处理5天后,Brdu标记细胞中有21％以上分化成熟为杆状核,分叶核粒细胞。由于这些细胞已处于终末分化期,不再进行DNA合成,故细胞中的Brdu是在细胞分化早期掺入的,从而直接证明HL-60细胞可在RA作用下走向分化成熟。     

体外培养人胚鼻咽上皮的生物学特性观察——Ⅴ.生长动力学研究

本文报告用测定生长曲线和氚胸腺嘧啶核甙两次标记法研究人胚鼻咽上皮原代培养物的生长特性。培养物群体倍增时间为2.43±0.16天,DNA合成期为4.93±0.61 小时,标记指数为12.41±1.43％,细胞周期时间为1.75±0.23天。本文就这些细胞动力学参数的意义作了分析讨论。     

染色体3p14.2区域一个与鼻咽癌呈负相关EST的鉴定

目的：寻找染色体３Ｐ１４．２区域与鼻咽癌相关的表达序列标记,为筛选鼻咽癌候选基因打下基础。方法：运用生物信息学同生比较筛选ＥＳＴ的策略,结合Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和逆转录ＰＣＲ方法,检测３ｐ１４．２区域的相关ＥＳＴＳ在鼻咽癌和正常鼻咽组织中的表达。结果：在３Ｐ１４．２区域筛选到一个在鼻咽癌中低表达的ＥＳＴＷ２３３１２,与正常鼻咽上上以组织相比较,在鼻咽癌细胞株及１３例鼻咽癌活检组织中的５便其表达下调     

肾细胞癌中FHIT基因的研究

目的 :探讨肾细胞癌中FHIT基因的改变及意义。方法 :用RT PCR及Southern印迹杂交法检测肾细胞癌及其细胞系中FHIT基因转录本 ,并观察其基因组的改变。结果 :约 8 3% (2 / 2 4)肾细胞癌有异常转录本 ;其中一株细胞系cDNA在用外引物扩增时 ,只有一个变小的FHIT基因异常转录本 ;用内引物扩增时 ,FHIT基因转录本完全缺失。约 2 0 % (5 / 2 4)肾细胞癌FHIT基因区域的基因组DNA出现重排。结论 :部分肾细胞癌存在FHIT基因转录本及基因组异常 ;FHIT基因的改变在肾细胞癌的发生、发展中可能起一定作用。     

人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE-2的稳定表达

目的 :为进一步研究人细胞色素P45 0E1 (cytochromeP45 0 2E1 ,CYP2E1 )蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)变中的作用机制提供体外模型。方法 :应用基因重组技术构建人CYP2E1cDNA真核表达载体pcDNA3 .1 - 2E1 ,并经脂质体介导转入CNE2细胞 ,通过G41 8筛选后挑选若干抗性细胞克隆扩大培养。结果 :经Southernblot和Westernblot对一系列抗性克隆细胞进行检测 ,获得 2个具有外源CYP2E1cDNA基因稳定整合和表达的细胞克隆CNE2 - 2E1 - 1及CNE2 - 2E1 - 2。结论 :建立了可供CYP2E1代谢相关的化学致癌物筛选及CYP2E1在NPC癌变中作用机制研究的体外模型。     

关于亚硝胺类化合物特1,4二亚硝基哌嗪器官亲和性的研究进展概况

亚硝胺类致癌物有相对器官亲和性已早有报道。本文着重介绍有关二亚硝基哌嗪(简称二亚)对鼻粘膜上皮细胞的亲和性问题的研究进展,报道了包括大鼠和人胚鼻咽上皮细胞对二亚的活化导致癌变及细胞转化等问题的研究,并着重指出鼻咽粘膜本身具有活化二亚的能力。     

从科研管理角度谈科研选题

科学研究中第一个重要的内容就是确定科研主攻方向,选好课题。实践表明：选题恰当与否对科学研究工作进展的速度,成效的大小,人力、物力、财力的节约和浪费,成功与失败都有直接影响。因此,选题是每一项科研工作的起点,是科研工作的第一个决策,科研课题是贯穿于全部...     

乳腺癌耐受蛋白介导的5-氟尿嘧啶耐受及机制

目的筛选乳腺癌耐受蛋白(BCRP)介导的耐受药物,探讨BCRP介导抗肿瘤药物耐受的机制,优化以BCRP表达检测结果为评价指标,为肿瘤临床化疗方案提供有价值的资料。方法不同浓度的抗肿瘤药物分别处理BCRP呈不同程度表达的PA317/Teton/TREBCRP细胞,经MTT法筛选出BCRP介导的耐受药物。高效液相色谱仪检测耐受药物在细胞内的相对剂量。采用核DNA染料Hochest33258荧光染色技术和流式细胞术检测耐受药物诱导的细胞凋亡。结果随着细胞BCRP表达的增高,PA317/Teton/TREBCRP细胞对5氟尿嘧啶(5Fu)、甲氨蝶呤、多柔比星、吡柔比星、依托泊苷、米托蒽醌等药物的耐药指数增高(P<0.05),而对如紫杉醇、顺铂、长春碱、丝裂霉素、长春地辛等药物均敏感。细胞的BCRP表达量与胞内5Fu浓度具有负相关性(r=-0.885,P<0.05)。随着细胞BCRP表达的增高,经5Fu处理后细胞凋亡率随之降低(P<0.05),而Ko143能显著提高BCRP表达细胞的凋亡率(P<0.05)。结论BCRP能增强细胞对5Fu所致的凋亡耐受。     

家兔MT-Ⅰ基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与分离

采用RT-PCR方法扩增镉诱导后的家兔肝脏金属硫蛋白-Ⅰ(Metallothionein-Ⅰ,MT-Ⅰ)基因的cDNA全长,克隆入原核融合表达载体pQE40,转化大肠杆菌M15.菌落印迹法检测阳性菌株;Western blotting 分析重组融合蛋白的表达方式;经SDS-PAGE电泳后,ImageMaster VDS software 分析融合蛋白诱导表达条件;并采用Ni-NTA agarose纯化融合蛋白.结果发现,重组融合蛋白在原核细胞中表达存在可溶和不可溶(包涵体)两种形式,表达量随IPTG诱导时间延长而增加,9 h达高峰(占菌体不溶性蛋白总量的57.4%),经Ni-NTA亲合层析纯化得到重组融合蛋白,为进一步分离目的蛋白单体并研制和开发这一产品提供了可靠依据.     

人CYP450 2E1异源性表达模型的建立及底物的表达诱导作用

目的:探讨化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)对人CYP2E1异源表达的诱导作用。方法:脂质体介导法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞,G418筛选后挑取克隆,Southernblot鉴定外源基因的整合,用不同浓度乙醇和DNP处理阳性克隆,RT-PCR和Westernblotting检测各组细胞CYP2E1表达水平。结果:获得二个具有外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆;随着乙醇和DNP处理浓度的提高,细胞CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论:DNP与乙醇能稳定诱导CYP2E1异源表达,其作用可能与其mRNA转录增强有关;DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关。