重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr-细胞中的高效表达

目的：使重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）在ＣＨＯ细胞中获得高效表达。方法：利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素ｃＤＮＡ重组表达质粒ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ，分别用ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，作瞬时高表达，选ｐＥＦ－ＥＰＯ用磷酸钙共沉淀法转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，加入氨甲喋呤（ＭＴＸ）扩增、选择，作稳定性高表达。结果：ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＯＳ７细胞后７２ｈ表达量分别为１７．８和２１．０ｎｇ／ｍｌ，ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，随着ＭＴＸ浓度的增加，ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＋的克隆数减少，而混合克隆的ＥＰＯ表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达ｒｈＥＰＯ的细胞株，其３ｄ表达量为１６μｇ／ｍｌ。结论：ｒｈＥＰＯ在ＣＨＯ细胞中获得了高表达     

恶性疟原虫FCC1/HN株MSA1抗原部分保守区基因的序列测定

P190是恶性疟原虫裂殖子表面抗原1(MSA1),是很有希望的疟疾疫苗候选抗原。根据该基因现有序列,我们设计了3对引物,在5′端引物和3′端引物前分别设有BamHI和xbal酶切位点序列,在每个酶切位点前设有保护性碱基GC,用固相亚磷酸酰胺法在AB1391型DNA自动合成仪上自动合成引物,合成的引物氨解、冷冻干燥后经HPLC纯化。采用聚合酶链反应(PCR)方法亚克隆了恶性疟原虫FCC1/HN株P190第3、4保守区和第2保守区部分序列的基因片段,分别定名为P190CR3、P190CR4和P190cR2-2,各片段均定     

恶性疟原虫FCC1/HN株MSA1抗原Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ保守区基因的亚克隆及序列分析

P190系恶性疟原虫裂殖子表面抗原1(MSA1),是很有希望的疟疾疫苗候选抗原。根据该基因现有序列,我们设计了3对引物,在5′端引物和3′端引物前分别设有BamHI和XbaI酶切位点序列,在每个酶切位点前设有保护性碱基GC,用固相亚磷酸酰胺法在ABI391型DNA自动合成仪上自动合成引物,合成的引物氨解、冷冻干燥后经HPLC纯化。采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增了恶性疤原虫FCC1/HN株P190第3、4保守区和第2保守区部分序列的基因片段,分别定名为P190CR3、P190CR4和P190CR2-2,各片段均连接到pUC18载体上,用双脱氧末端终止法测定了克隆片段的DNA序列,结果表明这3个区域的DNA序列与MAD20(采自巴布亚-新几内亚)、Wellcome(采自西非)、K1(采自泰国)及CAMP(采自马尔加什)株恶性疟原虫P190相应区域比较也是高度保守的。在该基因第2保守区核苷酸第81位(相当于MAD20的732位)发生了碱基替换,由T替代了C,但未发生氨基酸的改变。     

Ribozyme对癌基因Ki-rasG12V mRNA的剪切及其特异性

目的：设计切割ｋｉ－ｒａｓ＾Ｇ１２Ｖ ｍＲＮＡ的特异性ｒｉｂｏｚｙｍｅ（Ｒｚ２１７）,明确其对癌基因ｋｉ－ｒａｓ＾Ｇ１２ＶｍＲＮＡ的细胞内外切割活性,为以ｋｉ－ｒａｓ＾Ｇ１２ＶｍＲＮＡ为特异性靶分子的基因治疗及癌基因ｋｉ－ｒａｓ的功能研究提供一种新的途径。方法：依Ｓｙｍｏｎｓ总结的“锤头结构”原理,设计一种能特异性切割ｋｉ－ｒａｓ＾Ｇ１２ＶｍＲＮＡ的ｒｉｂｏｚｙｍｅ,利用ＤＮＡ重组技术构建ｋｉ－ｒａｓ＾Ｇ１２Ｖ外显子１ｍＲＮＡ,在含Ｍｇ＾２＋溶液中ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｒｚ２１７对其靶ＲＮＡ分子进行切割。以ＲＴ－ＰＣＲ对感染ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｒｚ２１７真核表达质粒的细胞ｋｉｒａｓ＾Ｇ１２Ｖ ｍＲＮＡ进行半定量分析。结果：ｋｉ－ｒａｓ＾Ｇ１２Ｖ外显子１体外转录ｍＲＮＡ分子,能被ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｒｚ２１７定点切割而野     

Pharmacodynamic study of recombinant human erythropoietin on a renal anemia model induced by gentamycin in rats

ＰｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｔｕｄｙｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎｏｎａｒｅｎａｌａｎｅｍｉａｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｇｅｎｔａｍｙｃｉｎｉｎｒａｔｓＣａｏＺｈｉｆａｎｇ（曹之舫）；ＪｉａＬｉｎ（贾林）；Ｊｉ...     

Analysis of gene expression in HIMeg cells before and after induced differentiation: Application of mRNA differential display

Drug-induceddifferentiationhasbeenem-ployedintheclinicaltreatmentofleukemiaandseensatisfactoryeffectsofar.Themolecularmechanismsinitializinganddrivingforwardthedifferentiationprocedureareintensivelystudiedinthefieldsofhematologyandoncology.However,becausetherearefewermegakaryocyticleukemiacellmodelsavailable,mostattentionhasbeencon-centratedongranulocytic,erythroidandmonocyticlineage,relativelylessonmegakaryocyticseries.Recently,thissituationbeginstochange,asmoremegakaryocyticleukemiacellshave…     

Site-specific cleavage of oncogene Ki-ras mRNA by ribozyme in vitro

Rasisaprotooncogeneencodingguaninenucleotidebindingprotein,ras--p21islocatedinthe.innerplasmamembraneandtransductssignalfromreceptortyrosinekinasetoraff.Ras--pZIproteinparticipatesintheregulationofcellgrowthanddifferentiation[lj.Mutationofras,Ki--rasinparticular,playsanimportantroleincellmalignanttransforming.ThemutantrateofKi--rasinhumanpancreaticadenocarcinomaisashighas95%['].So,blockingrasexpressionshouldbeapotentialmethodforcancertherapy.RibozymeisasmallcatalyticRNAmolecule.Recently,it…     

重组γ－干扰素抑瘤疗效的病理学观察

本文作者研究了自制重组γ－干扰素对裸鼠人肝癌移植瘤的抑瘤效应。结果提示重组γ－干扰素确有一定的抑瘤作用。给药后，带瘤小鼠的血清ＡＦＰ含量明显降低，与对照动物比较，差异非常显著（Ｐ＜０．０１），且与其给药剂量呈正相关系（Ｐ〈０．０５）。腹腔给药与肌肉注射的抑瘤作用有别，后者荷瘤裸鼠的肿瘤体积的增长速度远低于对照动物（Ｐ＜０．０５），作者推测可能与药物在体内滞留作用时间相对较长有关。     

抗磺化DNA化学探针血清的制备

同位素标记的DNA探针敏感性高、使用不便,但耗费大、程序繁、要求条件高,不易推广使用已为人们所了解。近来国外有报道,以制备抗DNA中经磺化的胞嘧啶决定簇的McAb,再以酶标记抗小鼠血清的二抗,对未知DNA进行酶联测定,不仅敏感性高,而且经济、快速、简便,易制成药盒便于推广使用。化学探针国内尚未见报道。