人血小板生成素cDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的：克隆人血小板生成素（ｈＴＰＯ）ｃＤＮＡ，并研究其在ＣＯＳ－７细胞中的表达。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ法获得ｈＴＰＯ ｃＤＮＡ，测序后克隆到真核表达载体ｐＥＤ上，以ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，巨核细胞集落形成培养法测表达产物活性。结果和结论：获得的ｈＴＰＯ ｃＤＮＡ和献报道的序列一致。转染细胞ＲＮＡ斑点杂交结果显示ＴＰＯ ｃＤＮＡ获得转录，转染后４８和７２ｈ的细胞上清均可测到Ｔ     

庆大霉素诱导大鼠肾性贫血模型的建立及基因重组人红细胞生成素的药效学研究

用庆大霉素诱导建立大鼠肾性贫血模型并以此观察本所研制的基因组人红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）对肾性贫血的治疗效应。连续１６ｄ给大鼠皮下注射庆大霉素，病理学研究证实大鼠肾脏组织学结构已发生破坏；实验室指标显示血清尿素氮、肌酐升高，红系各指标显著降低；ＥＬＩＳＡ法不能测出血清中的红细胞生成素（ＥＰＯ），表明大鼠已发生功能衰竭和肾性贫血。经连续５ｄ皮下注射ｒｈＥＰＯ，血清ＥＰＯ水平上升，网织红细胞（Ｒｃ）、红细胞计数、血红蛋白和红细胞比容等指标迅速好转，其中以Ｒｃ最为敏感，提示经ＥＰＯ刺激后人鼠骨髓造血功能增强，其效应强弱与ｒｈＥＰＯ用量相关。实验结果证实ｒｈＥＰＯ对肾性贫血有较好的疗效。     

人巨核白血病细胞诱导分化后差异表达基因的mRNA差别显示和克隆

目的：克隆巨核白血病细胞诱导分化后表达变化的mRNA，从中寻找对诱导分化起关键作用的基因，最终揭示巨核白血病细胞诱导分化的分子机制。方法：人巨核白血病细胞HIMeg经13-顺式维甲酸处理4 d后，收集细胞总RNA，进行mRNA差别显示、cDNA片段克隆和序列分析。结果：获得5个差示cDNA片段，经RNA点杂交分析后发现其中3个为假阳性，1个因没有杂交信号而无法确定，只有1个cDNA片段得到证实，其对应的mRNA在诱导分化后表达下降。该cDNA片段的核苷酸序列已在GenBank中登录，登录号为AF026526。结论：克隆到一个未知基因的cDNA片段，其全长cDNA序列、基因结构及生物功能有待进一步研究。     

重组γ—干扰素抑瘤疗效的病理学观察

本文作者研究了自制重组γ－干扰素对裸鼠人肝癌移植瘤的抑瘤效应。结果提示重组γ－干扰素确有一定的抑瘤作用。给 药后，带瘤小鼠的血清ＡＦＰ含量明显降低，与对照动物比较，差异非常显著（Ｐ＜０．０１），且与其给药剂量呈正相关第（Ｐ＜０．０５）。腹腔给药与肌肉注射的抑瘤作用有别，后者荷瘤裸鼠的肿瘤体积的增长速度远低于对照动物（Ｐ＜０．０５），作者推测可能与药物在体内滞留作用时间相对较长有关。     

rhG-CSF cDNA高表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

目的：构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的重组质粒。方法：利用化学合成引物，进行ＰＣＲ，对人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ５＇ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后，重组入表达载体ｐＥＤ，构建成质粒ｐＥＤ－ＧＣＳＦ，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，ＥＬＩＳＡ法定量测定ｒｈＧ－ＣＳＦ表达水平。结果：转染ＣＯＳ７细胞后４８ｈ收集的上清ｒｈＧ－ＣＳＦ表达量为５２ｎｇ／ｍｌ，７２ｈ为２３０ｎｇ／ｍｌ，显示ｒｈＧ－ＣＳＦ获得了暂时性高表达。结论：ｐＥＤ－ＧＣＳＦ是一个能在哺乳动物细胞中高效表达ｒｈＧ－ＣＳＦ的真核表达质粒。     

Cloning and high-level expression of human interferon alpha-8 in E.coli

Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｐｈａ－８ｉｎＥ．ｃｏｌｉＺｈａｎｇＰｉｎｇｗｕ（张平武）；ＷａｎｇＹｉｌｕｎ（王易伦）；ＬｕＤｅｒｕ（陆德如）；ＬｉＹｕｙａｎｇ（李育阳）（Ｉｎｓｔｉ...     

A study on the integration of adeno－associated virus inverted terminal repeat fold structure in eukaryotic chromosome in vitr

Ａｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔｆｏｌｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｎｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｉｎｖｉｔｒｏＧｕｏＢａｏｙｕ（郭葆玉）；Ｈｕ...     

增强化学发光法标记的DNA探针诊断恶性疟疾

采用增强化学发光法（ＥＣＬ）标记的ＤＮＡ探针诊断恶性疟疾。结果显示，ＥＣＬ标记的探针能检出２５ｐｇ纯化的恶性疟ＤＮＡ或原虫率为０．００１％体外培养的恶性疟原虫血，并且和人白细胞ＤＮＡ无交叉反应。对１４６份疟疾病人血样进行检测，ＤＮＡ探钉法和常规镜检法有较好的相关性。对于镜检中确诊的９９例恶性疟，ＥＣＬ法检出９３例；对于４７例间日疟血样，ＥＣＬ法仅和１例有阳性反应；该探针和４８例正常人血均无交叉反应。结果表明，ＥＣＬ标记的探针具有较好的特异性和敏感性，可用于恶性疟疾的特异性诊断和大规模流行病学调查。     

重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr-细胞中的高效表达

目的：使重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）在ＣＨＯ细胞中获得高效表达。方法：利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素ｃＤＮＡ重组表达质粒ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ，分别用ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，作瞬时高表达，选ｐＥＦ－ＥＰＯ用磷酸钙共沉淀法转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，加入氨甲喋呤（ＭＴＸ）扩增、选择，作稳定性高表达。结果：ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＯＳ７细胞后７２ｈ表达量分别为１７．８和２１．０ｎｇ／ｍｌ，ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，随着ＭＴＸ浓度的增加，ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＋的克隆数减少，而混合克隆的ＥＰＯ表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达ｒｈＥＰＯ的细胞株，其３ｄ表达量为１６μｇ／ｍｌ。结论：ｒｈＥＰＯ在ＣＨＯ细胞中获得了高表达