PCR法与直接涂片镜检法检查结核杆菌的比较

ＰＣＲ法与直接涂片镜检法检查结核杆菌的比较附属医院检验科阴晴丹阳市中医院检验科李剑英结核菌感染仍然是当今世界范围内危害人类健康的严重问题。近４０年来，我国人口成倍增长，结核病绝对患病人数呈增加趋势，而且由于人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染者的增加．全球...     

临床革兰阴性杆菌整合子携带情况及其与耐药性的相关性分析

目的研究临床分离的4种革兰阴性杆菌耐药性与整合子的关系。方法收集江苏大学附属医院2017年10月—12月临床分离的肺炎克雷伯菌56株、大肠埃希菌49株、铜绿假单胞菌45株及鲍曼不动杆菌48株,Vitek 2 Compact全自动鉴定和药敏分析仪及K-B法进行药敏试验;多重PCR法检测细菌携带Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子情况,并比较细菌耐药性与携带整合子之间的关系。结果 4种革兰阴性杆菌中共有37.37%的菌株检出Ⅰ类整合酶基因,其中鲍曼不动杆菌的阳性率为54.17%,大肠埃希菌的阳性率为46.94%,肺炎克雷伯菌的阳性率为39.29%,铜绿假单胞菌的阳性率为6.67%,所有菌株均未检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因。4种革兰阴性杆菌中,铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌携带Ⅰ类整合子菌株对部分药物的耐药率较未携带整合子菌株差异有统计学意义,而携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌的耐药率较未携带菌株差异均无统计学意义。结论Ⅰ类整合子在镇江地区临床分离革兰阴性杆菌中普遍存在,且与铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性存在一定的相关性。     

西格玛性能验证图在血液脂类项目性能评价中的应用

目的用西格玛性能验证图评价江苏大学附属医院医学检验科实验室血液脂类项目的检测性能并指导改进方向。方法采用江苏大学附属医院医学检验科实验室2016年室内质量控制数据计算变异系数;采用江苏大学附属医院医学检验科实验室2016年全国血液脂类室间质评结果计算偏倚;采用卫生和计划生育委员会室间质评中的允许总误差和卫生行业标准(WS/T 403-2012)中的允许总误差;通过6西格玛管理软件计算血液脂类项目西格玛值并绘制性能验证图,最后计算质量目标指数以指导检测项目改进方向。结果血液脂类项目中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(σ=9.85)和脂蛋白a(LPa)(σ=6.45)2个项目性能达到世界一流水平;载脂蛋白B(APOB)(σ=5.70)的性能优秀;三酰甘油(TG)(σ=4.01)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(σ=4.09)和载脂蛋白A1(APOA1)(σ=4.72)3个项目性能良好;总胆固醇(CHOL)(σ=3.30)性能处于临界;LDL-C和LPa无需改进精密度和准确度,可使用13s(N=2,R=1)质控规则满足性能要求;APOA1、APOB、TG、HDL-C需要优先改进准确度,CHOL性能处于临界需要优先改进精密度,同时选择13s22sR4S41s8x(N=4,R=2或N=2,R=4)方可进一步提升性能。结论西格玛性能验证图可以帮助实验室分析各检测项目性能水平,提供参考的质控规则以及优先改进方向。     

76株阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶的检测

目的 了解临床分离的阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC）及与耐药性的关系。方法 采用纸片表型确证法、表型筛选法与三维试验法分别检测76株临床分离阴沟肠杆菌的ESBLs和去阻遏持续高产AmpC酶,同时用K-B法检测体外药敏结果。结果 在76株阴沟肠杆菌中,纸片表型确证法检出产ESBLs菌株22株,占28．9％;表型筛选法检出产AmpC酶菌株30株,占39．5％;三维试验检出产AmpC酶菌株26株,占34．2％;同时产两种酶菌株4株,两种酶均不产菌株24株。对亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦、头孢吡肟、氨曲南的体外药物敏感率产AmpC酶菌株敏感率分别为100．0％、84．6％、84．6％、76．9％,产ESBLs菌株分别为100．0％、90．9％、54．5％、27．3％。结论 产ESBLs和AmpC酶是阴沟肠杆菌耐药的主要机制,亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦和头孢吡肟对产酶株的效果较好。     

PDCA循环在提升实验室新冠病毒检测能力中的应用

目的 应用PDCA循环提升我院新型冠状病毒核酸检测能力,提高临床、患者的满意度.方法 比较2020年2月至4月(改善前)和2020年5月至8月(改善后)的新冠病毒核酸检测报告例数及申请到报告TAT时间的数据,采用SPSS 24.0软件进行数据的统计与分析.结果 经过PDCA循环后,新冠病毒核酸报告的检测量由28例/月提...     

重症监护病房鲍曼不动杆菌感染调查及泛耐药情况分析

目的 了解该市某医院近3年来重症监护病房(ICU)鲍曼不动杆菌感染现状,分析其耐药谱变迁及泛耐药情况,金属酶产生情况,为临床了解及防治院内感染提供依据.方法 对该院ICU2005～2007年分离的鲍曼不动杆菌分布及耐药情况进行回顾性分析.细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK-32细菌鉴定仅,常规药敏试验采用K-B纸片法,采用头孢他啶和2-巯基丙酸的双纸片琼脂扩散表型协同试验筛选产金属酶菌株.结果 3年间共分离到鲍曼不动杆菌358株,其中2005年87株,2006年102株,2007年169株,其中通过呼吸道感染占82.12%.泛耐药菌株感染率呈现出逐年上升趋势,2005年3株(占3.45%),2006年8株(占7.84%),2007年有21株(占12.43%),且泛耐药菌株感染的发生率与住院时间相关.金属酶表型阳性株共检测出5株,阳性率为15.63%,其中2006年2株,2007年3株.结论 鲍曼不动杆菌感染呈逐年上升趋势,以呼吸道感染方式为主,其泛耐药菌株感染率呈上升趋势,金属酶产生率低,不是主要耐药机制.患者住院时间越长感染泛耐药菌株的几率越高.应加强ICU病房环境和人员消毒,加强抗生素的合理使用,控制鲍曼不动杆菌在医院内的定值和播散,重视泛耐药鲍曼不动杆菌监测.     

2012年江苏地区12家医院细菌耐药监测评价

摘要：生物信息学(bioinformatics)是基于分子生物学理论,并与生物学、数学、计算机科学、信息学融合而成的交叉复合学科。收集、整理、解析生物学实验数据是生物信息学的主要任务。本文扼要介绍了该技术在与细菌耐药相关基因分析中的应用。包括可将测得序列与数据库比对,测得的变异基因序列翻译成氨基酸序列委托Swiss Model Workspace作三维结构同源建模,进行可视化分析与分子对接分析。将测序所得细菌全基因组序列上传至基因自动注释网站,可获得编码基因序列和相应的蛋白质序列;上传至日本京都基因和基因组百科全书(KEGG)在线注释工具KAAS,可获得细菌代谢途径示意图。利用基因组数据库也可进行全基因组数据分析。     

建立实时荧光LAMPA法检测肺炎支原体

目的:建立实时荧光环介导等温扩增(LAMP)法检测肺炎支原体。方法:在LAMP体系中添加适量荧光染料SYTO-9,通过实时定量PCR仪监测LAMP反应结果。以肺炎支原体P1基因重组质粒制备一系列浓度标准品,分别使用实时荧光LAMP法和SYBR GreenⅠ染料LAMP法检测,比较2种方法的检出限。肺炎支原体M129标准株菌液以10倍梯度稀释,分别以实时荧光LAMP法和肺炎支原体荧光PCR试剂盒检测,比较2种方法灵敏度。以实时荧光LAMP法检测常见呼吸道感染病原体肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌基因组DNA,评估该方法特异性。采集疑似肺炎支原体感染患儿咽拭子标本,分别以实时荧光LAMP法和荧光PCR法检测,比较2种方法检出率差异。结果:实时荧光LAMP法可以检出P1基因最低限为103 copies/μL,当基因拷贝数大于104 copies/μL时,反应30 min样本组即可出现明显荧光信号。SYBR GreenⅠ染料LAMP法可以检出P1基因最低限为104 copies/μL,反应需1 h才可获得足够产物用于显色。实时荧光LAMP法灵敏度高于实时定量PCR法100倍,且对常见呼吸道病原体DNA无扩增。实时荧光LAMP法和荧光PCR法检测疑似肺炎支原体感染咽拭子标本的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:实时荧光LAMP法可以有效避免因开盖检测造成的气溶胶污染,反应时间短,灵敏度高,适于在基层医院中推广使用。     

髓系白血病干细胞培养及其特征鉴定

目的对急性髓系白血病(AML)骨髓单个核细胞进行体外培养,获得白血病干细胞并进行特征鉴定。方法体外培养AML患者的骨髓单个核细胞,观察其形态学特征、长期存活及增殖特性,用染色体分析和流式细胞分析技术研究其核型和细胞表面标志,用RT-PCR技术分析其nucleostemin、Bmi-1、ABCG2、prominin1、OCT4、Nanog等干细胞相关基因的表达。结果培养的白血病细胞呈集落样悬浮生长,在体外能存活12个月以上并保持增殖特性。染色体核型呈亚四倍体。表达上述干细胞相关基因。细胞表面表达CD38、CD29、CD44和HLA-DR,弱表达CD19和CD71,不表达CD34、CD13、CD2和CD105。结论经培养获得的白血病细胞,具备肿瘤干细胞的一些特征,提示为白血病干细胞。