肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析

目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。用PCR法检测鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和主动外排泵基因,包括A类β-内酰胺酶(blaTEM、blaPER和blaCARB)、B类β-内酰胺酶(blaIMP和blaVIM)、C类β-内酰胺酶(blaADC和blaDHA)、D类β-内酰胺酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)和主动外排泵相关基因(adeB、adeJ、macB、emrB、emrA、abeS、abeM和craA)。以微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)前后,携带adeB基因鲍曼不动杆菌对亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)的变化。结果:临床分离160株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体中鲍曼不动杆菌143株(占90%),包括亚胺培南耐药株119株(占83.2%)和敏感株24株(占16.8%)。所有鲍曼不动杆菌均检出blaOXA-51基因,其中,亚胺培南耐药株中检出blaOXA-23(98.3%)、blaTEM(41.4%)、blaADC(98.3%)和blaDHA(0.7%),blaPER、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58均未检出;敏感株中未检出blaOXA-23。adeJ、macB、abeM和craA基因在143株鲍曼不动杆菌中的携带率均为100%;emrB、emrA和abeS基因携带率均超过80%。adeB基因在亚胺培南耐药株中检出117株(98.3%)。在CCCP干预试验中,携带adeB基因的鲍曼不动杆菌MIC50降低1/2。结论:呼吸内科鲍曼不动杆菌主要携带blaOXA-23和adeB主动外排泵基因,可能与亚胺培南耐药密切相关。     

AcrAB外排泵ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响

目的 探讨AcrAB外排泵调控基因ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响。方法 用喹诺酮类药敏纸片扩散法、MIC及其逆转实验和有机溶剂耐受实验测定细菌耐药表型,用PCR扩增外排泵结构基因acrA、acrB、tolC及调控基因acrR,ramA,marA,用半定量PCR 检测调控基因的转录水平。结果 泵的结构基因和调控基因均存在43株KP菌中。仅喹诺酮类耐药株与敏感株ramA转录水平存在统计学差异(P<0.05)。和对照组相比,高表达ramA的 AC-1株,其泵结构基因的转录水平增高,耐药表型也有明显改变,用泵抑制剂后,其喹诺酮类的MIC恢复对照水平。结论 ramA是KP菌耐喹诺酮类抗生素的一个重要因素。抑制ramA的表达,有助于治疗多重耐药肺炎克雷伯菌的感染。     

6对通用引物检测不同型别人乳头瘤病毒效果分析

目的: 比较6对通用引物检测9种不同型别人乳头瘤病毒（HPV）的效果,为临床提供一种快速简便的HPV检测方法。方法: 收集女性宫颈脱落细胞标本954例,使用HPV分型试剂盒进行HPV DNA检测并分型。分别使用6对通用引物（① GP5/GP6,② GP5+/GP6+,③ CP Ⅰ/CP ⅡS,④ CP I/CP ⅡG,⑤ 外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+,⑥ SPF1/GP6++）对HPV-DNA阳性标本进行PCR检测,比较6对通用引物检测9种不同类型HPV DNA效果。结果： 采用HPV分型试剂盒从954例标本中共检出263例HPV-DNA阳性标本,阳性率为27.57%。在阳性标本中,采用通用引物SPF1/GP6++检出的阳性例数为223例,检出率为84.79%;采用巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检出的阳性例数为207例,检出率为78.71%。上述两对通用引物均可以检出9种型别HPV DNA。结论： 通用引物SPF1/GP6++检测效果最佳,但引物含次黄嘌呤,成本较高;巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检测效果次之,且合成成本较低。在HPV研究中可以根据实际情况选用。     

白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中pokemon基因的定量检测

目的 建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平.方法 通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC)、人肺癌细胞株(LTEP)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(HELA)、人内皮细胞株(UEVC-304)、健康人外周血单个核细胞(PBMC)、胃癌组织中的表达水平.绘制pokemon基因real-time PCR的标准曲线.结果 急性淋巴细胞白血病(ALL)中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)及健康人PBMC(P＜0.05);SW480中的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、HELA和UEVC-304(P＜0.05);胃癌组织表达量高于胃癌旁组织,阳性率为5/7.结论 建立的测定pokemon基因表达的real-time PCR方法稳定、准确,pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的靶点,其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生的参考指标.     

烧伤科多重耐药菌患者流行特征及耐药性分析

摘要 目的 分析烧伤科多重耐药菌患者流行特征及其耐药情况,为临床制定预防控制措施提供依据。方法 采用回顾性调查方法,对某医院2012年1月~2018年11月烧伤科多重耐药菌患者临床资料进行统计分析。结果 共检出多重耐药菌患者102例,临床分离多重耐药菌147株,病原菌分布主要以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)为主,分别占54.42%和43.54%;其次为多重耐药铜绿假单胞菌(MDR-PA)占1.36%,肺炎克雷伯菌占0.68%。标本主要来源于伤口分泌物、脓液、痰、静脉置管、血以及中段尿,构成比依次为56.46%、14.97%、12.93%、7.48%、7.48%、和0.68%。药敏结果,MRSA对替加环素、万古霉素和利奈唑胺三线抗菌药物100%敏感,对利福平耐药率较低(18.84%),MRSA对检测的一线抗菌药物耐药率均>50%。MDR-AB仅对替加环素、米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低,分别为19.05%、25.81%和29.51%,对检测的其他抗菌药物耐药率>90%。结论 本地区烧伤科耐药菌分离种类较少,以MRSA、MDR-AB为主,感染部位主要来源于伤口分泌物、脓液和痰液,其中MRSA、MDR-AB对临床常见抗菌药物普遍耐药,临床科室应当合理使用抗菌药物,防止多重耐药菌进一步蔓延。     

类风湿关节炎患者血清sCD40L水平的变化及意义

采用ELISA法检测32例类风湿关节炎(RA)患者血清可溶性CD40L(sCD40L)水平,Array-360特种蛋白分析仪检测其类风湿因子(RF)和C反应蛋白(CRP)水平,魏氏法测定红细胞沉降率(ESR);并与30例健康人比较.对sCD40L水平与疾病活动性进行相关分析.结果活动期RA患者血清sCD40L、RF、CRP和ESR均明显高于非活动期RA患者及健康人,但非活动期RA患者的CRP、ESR水平均在正常范围.认为血清sCD40L水平与RA活动性有一定相关性;有作为反映RA活动性的指标.     

鲍曼不动杆菌荚膜通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进鼠巨噬细胞自噬和凋亡

[Abstract\]Objective: To study the capability of Acinetobacter baumannii with different thickness capsules induce Raw 264.7 cell autophagy and apoptosis, and its potential mechanisms. Methods: A baumannii was isolated from the sputum of patients with pneumonia. The bacterial capsule was stained by Congo red staining, and the bacterial strains with significantly different capsule thickness were selected for subsequent study. Raw 264.7 cells were infected with thick capsular strain (Ab H strain) or thin capsular strain (Ab B strain), and the cells were harvested at 1 h, 3 h and 6 h after infection. The expression of autophagy related proteins LC 3 and Beclin 1, as well as the phosphorylation levels of PI3K, Akt and mTOR were determined by Western blotting. Flow cytometry was used to determine the reactive oxygen species(ROS) production and apoptosis rate. Results: After A. baumannii was stained with Congo red, the cells were shown purple black, the background was red, and the capsule was not stained. The bacterial capsule thickness was clearly judged. Two strains with significant differences in capsular thickness were grouped, namely thick capsular strain (Ab H strain) and thin capsular strain (Ab B strain). The expression of autophagy related protein Beclin 1 of Raw 264.7 cells induced by Ab H strain were significantly higher than that of Ab B strain (P<0.05), and the apoptosis rate of Raw 264.7 cells induced by Ab H strain was also significantly higher than that of Ab B strain (P<0.05). Two strains of A. baumannii could induce a significant increase in the production of ROS in Raw 264.7 cells (P<0.05), and the ability of Ab H strain to induce ROS production was significantly higher than that of Ab B strains (P<0.05). After Raw 264.7 cells were infected with two strains respectively, the phosphorylation levels of PI3K, Akt and mTOR were significantly inhibited, and the inhibition increased when the time prolonged (P<0.05). Conclusion: A. baumannii could induce autophagy and apoptosis of Raw 264.7 cells, and the induction ability is positively correlated with bacterial capsule thickness. A. baumannii with thick capsule has a stronger ability to induce ROS production in Raw 264.7 cells and inhibit the activation of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, which ultimately enhances autophagy and apoptosis of Raw 264.7 cells.     

临床分离鲍氏不动杆菌生物膜形成能力与耐药性关系研究

目的研究鲍氏不动杆菌生物膜形成能力与耐药性的关系。方法收集2016年7月-2018年2月临床分离的85株鲍氏不动杆菌菌株,检测其药敏及生物膜形成能力,采用PCR技术检测鲍氏不动杆菌生物膜相关基因bap、abaI、bfs、bfmS、bfmR、csuA、csuE、csuAB。结果 85株鲍氏不动杆菌对替加环素、米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为11.76%、23.53%、25.88%,耐药率最高的为环丙沙星和头孢吡肟,均为71.76%,其中耐药组(包括多重耐药和泛耐药菌)58株占68.24%,敏感组27株占31.76%;所有实验菌株均能形成生物膜,敏感组鲍氏不动杆菌生物膜形成能力强于耐药组细菌(Z=-6.391,P0.001);85株鲍氏不动杆菌生物膜相关基因bfmS、bfmR、bfs、csuE、csuA、csuAB、abaI、bap的检出率分别为98.82%、98.82%、95.29%、90.59%、89.41%、89.41%、87.06%、78.82%,耐药组基因bap、abaI、bfs的检出率高于敏感组(P0.05),其他基因在两组间检出率无差异。结论鲍氏不动杆菌耐药现象严重,敏感组细菌生物膜形成能力强于耐药组,多种基因参与细菌生物膜的形成。     

镇江医院感染革兰阴性杆菌耐药性与整合子关系研究*

目的 研究江苏大学附属医院分离的4种革兰阴性杆菌耐药性与携带整合子的关系。方法 收集江苏大学附属医院2017年10~12月临床分离的肺炎克雷伯菌56株、铜绿假单胞菌45株、大肠埃希菌49株及鲍曼不动杆菌48株,对其进行药敏试验；采用多重PCR法检测细菌携带Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子情况,并比较细菌耐药性与携带整合子之间的关系。结果 4种革兰阴性杆菌中共有37.4%的菌株检出Ⅰ类整合酶基因,其中鲍曼不动杆菌的阳性率为54.17%,铜绿假单胞菌的阳性率为6.67%,大肠埃希菌的阳性率为46.94%,肺炎克雷伯杆菌的阳性率为39.29%,所有菌株均未检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因。4种革兰阴性杆菌中,铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌携带Ⅰ类整合子细菌耐药性均较未携带菌株有显著性差异,而携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌较未携带菌株耐药性无显著差异。结论 Ⅰ类整合子在镇江地区临床分离革兰阴性杆菌中普遍存在,与上述细菌耐药性存在不同程度联系。