骨髓增殖性肿瘤JAK2基因突变分析及临床诊断意义

目的 探讨JAK2基因突变在骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPNs)患者中的诊断价值.方法 采用扩增受阻突变PCR(amplification refractory mutation PCR,ARMS-PCR)的方法检测原发性血小板增多症(essential thromboc...     

家族性骨髓增殖性肿瘤JAK2基因突变的检测及其临床意义

目的 了解家族性骨髓增殖性肿瘤( MPN)患者及其家系成员中JAK2、c-mpl、EPOR、MPLW515 L/K、TET2基因是否存在异常,为深入探讨MPN发病机制提供依据.方法 对2例先后在我院诊治的同胞MPN患者及其家系成员(共15人)进行血常规检查,对存在异常者进行骨髓相关检查,并应用PCR、DNA测序等方法明确有关基因的表达状况.结果 2例患者中先证者为原发性血小板增多症,其胞弟为真性红细胞增多症,其余成员均无相关临床表现.根据血常规及骨髓检查确诊了第3例(胞妹)MPN患者.PCR及测序结果显示3人存在JAK2V617F突变,其中先证者为纯合型,其胞弟和父亲为杂合型.所检查的家系成员均不存在bcr-abl融合基因及c-mpl、EPOR、MPLW515L/K和TET2基因突变.对该家族JAK2基因cDNA全长测序发现:2人存在G380A杂合型突变(127位甘氨酸变为天冬氨酸),13人存在C489T突变,14人存在G2490A突变,但后两者均为同义突变.结论 JAK2V617F是诊断MPN的重要指标之一,该家族中JAK2V617F突变涉及两代人.对于初发MPN患者,建议筛查其家族成员,从而尽可能对部分家族性MPN患者做到早期诊断.JAK2基因全长测序发现存在除JAK2V617F外的基因突变.     

WT1基因在骨髓增生异常综合征患者骨髓中的表达及其临床意义

目的：探究WT1基因在骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓中的表达水平及其临床意义。方法：回顾性分析2017年1月至2021年4月在南方医科大学南方医院就诊的147例初发MDS患者的临床资料,应用实时荧光定量PCR检测骨髓WT1基因表达,根据其表达水平分为WT1+和WT1-两组,分析两组患者的临床特点和预后。结果：147例MDS患者WT1+率为82.3%。WT1+和WT1-两组患者的骨髓原始细胞比例、异常染色体核型、WHO 2016分型及IPSS-R危险分层差异均有统计学意义（均P<0.05）;MDS亚型恶性程度及IPSS-R危险分层越高,WT1表达水平越高。WT1+和WT1-两组患者中位OS、进展为白血病时间差异均无统计学意义（均P>0.05）。在未移植患者中,WT1+患者中位OS较WT1-患者显著缩短（P=0.049）。WT1+移植患者预后明显优于去甲基化治疗患者（P=0.002）,且死亡率低（P=0.005）。结论：WT1基因表达水平可用于评估MDS患者病情,与MDS患者预后密切相关。     

FSHR部分基因的真核表达质粒构建和生物信息学分析

目的克隆FSHR基因部分片段（145～330bp）（FSHRn）,构建真核表达重组质粒,预测其编码蛋白作为候选避孕疫苗的可行性。方法提取小鼠睾丸组织的总RNA,利用RT—PCR技术反转录成cDNA,按照GenBank中小鼠FSHR N-端序列设计引物,扩增基因片段并插入pcDNA3．1／myc-His（-）B载体,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定后用Vector NTI9．0软件作生物信息学分析。结果扩增片段长度为186bp,测序结果与已知序列吻合,重组真核表达质粒经PCR和双酶切鉴定获得正确重组子,生物信息学分析其编码蛋白抗原性肽段主要集中在15～20aa、22～27aa、32～36aa、42～48aa、58～67aa,与人的基因同源性为90％。结论成功克隆了FSHRn基因片段并构建了pcDNA3．1／FHSRn真核表达重组质粒;FSHRn具有良好的抗原性．FSHRn蛋白可作为良好的动物候选疫苗,为此段蛋白的深入研究和人类男性避孕疫苗的研制打下基础。     

Ion Torrent PGMTM测序在急性髓系白血病检测中的应用

目的探讨Ion Torrent PGMTM测序平台用于急性髓系白血病(AML)患者基因突变检测的可行性。方法提取27例AML患者初次治疗前的骨髓DNA,用Ion Torrent PGMTM测序仪对50个常见的肿瘤基因热点突变区进行检测,同时用Sanger测序法检测FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)和核仁磷蛋白1(NPM1)基因的突变情况以进行验证。结果 50个目标基因中检出17个基因共29个突变位点,单个基因有多种突变方式,以单碱基替换为主。突变频率最高的是NPM1(22.2%)和FLT3(18.5%)。用Sanger测序法验证,NPM1两种方法检测的吻合度为100%,在FLT3验证中,其中有1例Sanger测序为阳性,而Ion Torrent PGMTM检测为阴性。结论 Ion Torrent PGMTM能够在短时间内得到AML患者的基因突变谱,但其在检测长片段插入/缺失中的缺陷仍需改进。     

T315I基因突变的慢性髓性白血病临床特征及泊那替尼疗效

目的分析伴T315I突变的慢性髓系白血病（CML）的临床特征及不同治疗方法的疗效。方法回顾性分析19例行BCRABLKD突变检测T315I突变的CML患者的临床资料及不同治疗的预后,通过直接测序分析获得用于RTQ-PCR样品的BCRABLKD突变。用Sanger测序法对BCR-ABL KD突变进行测序。复发标准包括血液学复发、细胞遗传学复发和分子生物学复发。结果19例CML-T315I患者,初诊时73.7%（14/19例）患者处于慢性期（CP）,Sokal评分中高危患者占81.2%（13/16例）。19例患者初诊后均行酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗,病程中78.9%（15/19例）患者有附加染色体畸变,52.6%（10/19例）患者存在多重突变。68.4%（13/19 例）的患者在疾病进展后（加速期/急变期）检测出T315I 突变,从初诊到检测出T315I 突变的中位期为40 m（5~120 m）。突变后12例行泊那替尼治疗（A组）,7例选择传统化疗方案（B组）。A、B两组3年总生存率分别是83.3%和14.2%（P=0.001）。结论小样本回顾性研究发现对TKI耐药的CML患者易检出T315I 突变,进展期检出率明显高于慢性期。此类患者往往合并附加染色体和多重基因突变,预后较差,即行异基因造血干细胞移植,复发率仍较高。泊纳替尼长期维持治疗,可能会改善预后,延长生存期。     

伴Fms样酪氨酸激酶3内部串联重复的急性髓系白血病临床特点及预后分析

目的 探讨Fms样酪氨酸激酶3内部串联重复(FLT3-ITD)的急性髓系白血病(AML)患者的临床特点及预后.方法 回顾性分析2011年6月至2014年3月收治的39例FLT3-ITD的AML患者临床资料.结果 FLT3-ITD突变的发生率为11.6％(39/337),39例FLT3-ITD AML患者中,M5所占比例最高(43.6％,17/39),其次为M2(28.2％,11/39);外周血白细胞计数平均为88.63×109/L,其中12例(30.8％)大于100×109/L;骨髓原始细胞比例平均为82.53％,其中33例(84.6％)大于50.00％.13例发生髓外浸润;17例核型正常,9例核型异常,3例未见核分裂象;13例患者伴随NPM1突变,2例伴有KIT突变,3例伴有DNMT3突变.37例接受治疗的患者中,第1个疗程获完全缓解(CR)16例(43.2％),第2个疗程获CR 4例(10.8％),2个疗程累积CR率为54.0％,诱导治疗相关病死率为21.6％ (8/37),死亡原因主要为感染及出血.中位随访时间12个月,20例CR患者的复发率为50.0％(10/20),无复发生存(RFS)率为45.0％(9/20);移植组17例患者的总生存及RFS均优于单纯化疗组的20例患者(P=0.004、0.020).结论 FLT3-ITD AML具有初发时外周血白细胞计数及骨髓原始细胞比例高、与M5亚型高度伴随的临床特点,异基因造血干细胞移植能明显提高患者总生存期及无复发生存期.