应用抑制性消减杂交技术筛选XTP3的反式激活基因

目的应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减库,克隆XTP3反式激活相关基因。方法以XTP3表达质粒pcDNA3．1(-)XTP转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T／A载体连接,构建cDNA消减库,并转染大肠杆菌进行库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果库扩增后得到30个白色克隆,经菌落PCR分析,得到23个200～1000bp插入片段。对所得片段测序,并进行同源性分析,共得到20种已知基因序列和2种未知功能基因序列,可能是XTP3反式激活靶基因。结论成功构建了乙型肝炎病毒xTP3反式激活基因差异表达的cDNA消减库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定了基础。     

神经外科病原菌分布及耐药性分析

目的了解近4年来我院神经外科病原菌分布特点及对抗菌药物的耐药状况,为进一步合理使用抗生素及控制院内感染提供依据。方法利用WHONET软件对神经外科近4年来主要病原菌及耐药性进行总结性分析。结果 2010—2011年和2012—2013年度感染的主要病原菌菌种没有发生变化,由于我们加强了院感知识的培训;病室的清洁、消毒工作;呼吸道护理,减少侵入性操作;进一步严格医生、护士的无菌操作观念和无菌操作技术,及时做病原学检查,根据药敏结果调整治疗方案,使得细菌耐药率明显下降,病人感染率明显降低。结论该疗法效果显著,有较强实用性。     

比较铁剂对不同心功能分级、合并贫血的心衰患者的疗效

目的 在心衰合并贫血患者中,观察纠正贫血是否可使不同心衰分级患者均可获益.方法 在心衰合并贫血患者中,根据纽约心功能分级将患者依次分为NYHAⅡ～IV级组,在各级分组中再分为铁剂组及对照组.随访观察半年,比较观察两组患者血红蛋白(Hb)、C反应蛋白(CRP)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、左室射血分数(EF)的变化,以及比较6分钟步行试验(6 mWT)和两组患者因心衰恶化而再住院次数.结果 经过铁剂予以纠正贫血,NYHAⅡ级患者,铁剂组Hb较对照组显著升高,MDA、SOD、CRP、EF值、6 mWT等差异无统计学意义(P>0.05),再住院次数两组无差异,而在NYHAⅢ、IV级患者中,与对照组比较,EF值差异无统计学意义(P>0.05),而其余指标均比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 在心衰合并贫血患者中,通过铁剂纠正贫血,主要使NYHAⅢ、IV级心衰患者临床获益.     

小剂量聚乙二醇干扰素治疗耐核苷类药物失代偿期乙型肝炎肝硬化的效果观察

目的 观察耐核苷类药物的失代偿期乙型肝炎肝硬化患者应用聚乙二醇干扰素抗病毒治疗的效果和安全性.方法 将47例耐核苷类药物的失代偿期乙型肝炎肝硬化患者随机分为两组,对照组24例,给予拉米夫定100 mg/d联合阿德福韦酯10 mg/d治疗;干扰素组23例,在对照治疗基础上给予干扰素隔日1次,连用2周,2周后改为聚乙二醇干扰素α-2a 135 μg肌肉注射,1次/周.观察两组治疗24、48周的肝功能变化.结果 对照组患者治疗0、24、48周总胆红素(TBiL)分别为(55.4 ±22.1)、(53.4±23.1)、(51.3±21.4) μmol/L,丙氨酸氨基转移酶(ALT)分别为(149±70)、(147±75)、(139±67) U/L,天冬氨酸氨基转换酶(AST)分别为(250±87)、(247±89)、(214±73)U/L,对照组患者治疗24、48周与治疗0周比较差异均无统计学意义(P均＞ 0.05).干扰素组患者治疗0、24、48周TBiL分别为(55.6±21.1)、(54.7±20.6)、(35.2±15.1) μmol/L,ALT分别为(149±68)、(136±64)、(73±28) U/L,AST分别为(251±90)、(214±91)、(121±27) U/L,治疗24周与治疗前比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),治疗48周与治疗0周比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 耐核苷类药物的失代偿期乙型肝炎肝硬化患者应用小剂量干扰素抗病毒治疗,能抑制乙型肝炎病毒复制,同时可有效改善患者肝功能.     

《传染病学》教学中案例的选择

在临床医学课程教学中适当引用案例,并将其同理论知识的讲授有机结合,将有助于活跃课堂气氛,提高学生的专注性,增强教学效果.本文结合《传染病学》教学实践中的经验,总结教学案例选择的一般原则及其应用技巧.     

乙型肝炎病毒基因型与临床关系的研究

[目的]研究乙型肝炎病毒（HBV）基因型与临床的关系。[方法]采用型特异性引物聚合酶链式反应PCR法对183例乙型肝炎患者的HBV进行基因分型，并对基因型与临床诊断、丙氨酸转移酶（ALT）、血清总胆红素（TBIL）、HBV DNA、T细胞亚群（CD4、CD8）水平及HBeAg、抗-HBe的关系进行了比较，应用SPSS 10.0 for windows软件整理分析数据。[结果]183例乙型肝炎患者中，急性乙型肝炎22（12.1％）例，慢性乙型肝炎81（43.0％）例，乙型肝炎后肝硬化57（31.8％）例，肝癌23（13.1％）例，其中B型41（19.2％）例，C型104（48.6％）例，B、C混合型38（17.8％）例。B、C、B＋C 3种基因型的患者ALT、TBIL以及CD4、CD8的水平进行比较，结果无显著性差异（P〉0.05）；而HBV DNA含量（对数值）比较有明显的差异（P〈0.05）；C基因型的HBeAg阳性率为75％，明显高于其他基因型（P〈0.05）。[结论]HBV基因型与乙型肝炎的临床进展有一定的相关性，急性乙型肝炎以B、C混合型为主，B型次之，慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌均以C型为主。基因型与ALT、TBIL、CD4、CD8的水平无关，但与HBV DNA水平有相关性，C基因型HBV DNA复制水平和HBeAg阳性率明显高于B基因型，预示C基因型可能与较严重的肝病发生有关。     

丙型肝炎病毒干扰素敏感决定区聚合酶链反应检测方法的建立及应用

目的:建立一种以丙型肝炎病毒(HCV)干扰素敏感决定区(ISDR)特异性引物为基础的聚合酶链反应(PCR)方法,对HCVISDR进行序列测定.方法:根据GenBank中6株HCV全序列核苷酸序列,设计共同的外引物及三组ISDR型特异性内引物.建立了HCVISDRPCR检测方法,对27例HCV基因型1b的慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA进行测定,并对PCR阳性标本的产物进行多位点分析.结果:A组PCR结果阳性率为37%(10/27),A-B组为30%(8/27),A-C组为4%(1/27),A-B-C组为22%(6/27),三组均阳性者有5例为使用IFN治疗6-12mo后定性PCR检测HCVRNA转阴,停药3mo后PCR检测HCVRNA结果仍为阴性.结论:以ISDR特异性引物为基础的PCR法可靠、简便,可用于丙型病毒性肝炎患者对HCV进行敏感决定区的测定,用于以NS5A-ISDR突变数量来预测HCV基因型1b感染的患者对IFN的持续应答.     

第001例——脾大并腹水及肝功能异常待查

1病例摘要患者女,20岁,主因发现肝功能异常4年,间断腹胀、双下肢水肿9个月,加重10天于2008年3月24日入我院。患者于2004年体检时发现肝功能异常,ALT108.8U/L、AST79.8U/L,无乙型肝炎病毒感染。当时患者无不适,未予检查治疗。2006年10月,患者自觉腹围增加,有腹部坠胀感,无恶心、呕吐,未检查及处理,症状无明显加重。至2007年5月,患者感腹胀逐渐加重,逐渐     

应用巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术检测乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异-rtN236T变异

目的 建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒（HBV）阿德福韦（ADV）耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法。方法 根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物，使野生株（rt236N）PCR产物中含有DraⅠ酶切位点（5’TITAAA3’），而变异株（rt236T）无此限制性酶切位点。选取4份应用ADV治疗1年以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清，经PCR扩增、DraⅠ酶切、3％琼脂糖凝胶电泳，进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析。并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各1例进行HBV RT区基因序列分析。结果 自4份血清标本中检测到1例rtN236T变异。所建立的ntPCR-RFLP方法灵敏度高，可以检测到10^3copies／L的HBV DNA；特异性强，其RFLP分析结果与DNA测序结果一致。结论 应用ntPCR-RFLP方法检测rtN236T变异具有灵敏、特异、简便的优点，适用于ADV耐药变异的临床监测工作。