快速检测结核分枝杆菌γpoB基因突变的研究

目的 :应用PCR SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌γpoB基因突变 ,评价此方法用于结核分枝杆菌利福平 (RFP)耐药性的意义。方法 :以结核分枝杆菌H37Rv为对照、5 0例耐RFP(单耐和多耐 )结核分枝杆菌临床分离株、12例RFP敏感菌株、35例耐RFP肺结核患者痰标本 ,采用PCR SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌γpoB基因突变。结果 :5 0例耐RFP菌株中有 45例PCR SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别 ,与药敏试验结果做对比 ,PCR SSCP检测敏感性为 90 % ,特异性为 10 0 % ;12例敏感菌株与H37Rv条带一致 ,35份肺结核病人痰标本 ,2 1份痰PCR扩增阳性 ,15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别 ,而用PCR SSCP 2 8份图谱与H37Rv有差别 ,阳性率为 80 %。结论 :PCR SSCP检测结核分枝杆菌γpoB基因突变快速、简便、易行 ,有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定 ,并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法     

rRNA扩增方法对结核分枝杆菌临床诊断作用的评估

目的 评价rRNA扩增方法 在临床应用的效果。 方法 选取到北京胸科医院、山东省胸科医院、河南疾控中心结核病防治所3个机构就诊的肺结核可疑症状者及健康志愿者的痰标本为研究对象,共纳入551例痰标本,对每例痰标本均进行涂片显微镜检查、罗氏培养、rRNA扩增试验以及实时荧光定量PCR。与罗氏培养方法 比较分析rRNA扩增方法 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值以及与实时荧光定量PCR扩增方法 的一致性。 结果rRNA扩增方法 的敏感性为98.5%,特异性为95.0%,阳性预测值为95.0%,阴性预测值为98.5%,rRNA扩增方法 在涂阳标本和涂阴标本间的敏感度和特异度差异均有统计学意义（χ²=9.60,P=0.002;χ²=79.80,P<0.01）。与PCR检测结果的一致性为93.8%,涂阳和涂阴标本中2种方法 的一致性差异有统计学意义（χ²=4.45,P=0.035）。 结论 rRNA扩增方法 的敏感度和特异度均较好,且能明显缩短诊断时间,该方法 是一种较有前景的结核病实验室诊断方法 。     

结核分枝杆菌ESAT-6 His融合蛋白的原核表达及纯化

摘要:目的 构建含有His标签结核分枝杆菌esat-6基因的原核表达质粒,并在体外进行原核表达和纯化。方法 提取结核分枝杆菌基因组DNA,对其采用聚合酶链反应技术扩增esat-6基因,并构建至表达载体pET28a上。将测序正确的载体转化大肠杆菌BL21,然后对His-ESAT6融合蛋白通过IPTG诱导进行表达,最后对重组蛋白使用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹进行分析。结果 PCR扩增出结核分枝杆菌esat-6基因,成功构建至表达载体pET28a-ESAT-6上,并在体外优化表达,产生高水平的目的蛋白表达产物。结论 成功构建并表达了含有His标签的ESAT-6融合蛋白,为临床中预防和治疗结核病提供了有效的参考。     

五种性状痰标本分枝杆菌检测结果分析

痰涂片分枝杆菌检查在发现传染源 ,确定化疗方案考核治疗效果和平价控制措施等方面具有重要意义 ,为提高涂片阳性检出率 ,在保证痰检技术质量的同时 ,痰标本的质量是提高分枝杆菌阳性检出率的关键 ,我们对 748例肺结核病人的痰标本 ,依据不同性状分为五种 ,经涂片、染色、镜检 ,将其结果进行对比分析。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　 748例肺结核病人痰标本 :选自开封市结核病防治所1998— 2 0 0 0年门诊病人 ,其中 :脓性痰 (简称Ａ) 99例 ,干酪性痰(简称Ｂ) 5 1例 ,血性痰 (简称Ｃ) 5 1例 ,粘液性痰 (简称Ｄ) 2 38例 ,水样痰 (简称Ｅ) 30 9…     

河南省5县市2007年耐药结核病及危险因素研究

[目的]确定2007年河南省5个县市的结核病耐药率及其危险因素。[方法]5个县市结核病防治中心所有痰涂片阳性病人按顺序入选,痰涂片用萋-尼氏染色法镜检,培养用罗杰氏培养基,对4种一线抗结核药物异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇采用比例法进行药敏试验。病人资料由经过培训的医生通过调查问卷获得。[结果]338例肺结核病人中,269例(79.6%)为新病人,69例为(20.4%)复治病人。新病人中任一耐药率和耐多药(MDR)率分别为17.5%和3.0%,复治病人分别为39.1%和21.7%。复治病人首次治疗超过6个月是任一耐药的危险因素(AOR=3.45,95%CI(1.25～9.09),P=0.017),复治病人(AOR=9.06,95%CI(3.62～22.67),P=0.000)以及曾经在其他地方居住1年以上(AOR=2.71,95%CI(1.10～6.69),P=0.030)是MDR的独立危险因素。[结论]河南省5个县市结核病任一耐药率和MDR率仍然很高,是实施DOTS策略和结核病控制面临的一个主要挑战。首次抗结核治疗6个月以上是任一耐药的危险因素,而复治病人以及在其他地方居住超过1年是MDR-TB的两个独立危险因素。全面实施MDR-TB控制以及提高DOTS质量是河南省结核病控制工作的当务之急。     

828例痰标本两种染色方法检测分枝杆菌结果对比

结核病是危害人类健康的一种慢性传染病,分枝杆菌检验在结核病诊治和治疗中成为重要指标,目前抗酸杆菌检验最常见的方法是直接涂片,即萋－纳Ｚｉｅｈｌ－Ｎｅｅｌｓｅｎ氏染色法,已有一百多年的历史,荧光法在国外已被广泛应用,成为结核病诊断的重要指标之一,国内也正在迅速推广和普及。我们对８２８份痰标本同时进行荧光法和萋－纳氏染色作对比,具体方法如下：１材料和方法１．１实验材料：１．１．１标本来源：取自门诊及住院结核病患者晨痰８２８份。１．１．２试剂： 荧光染液： ①０,１％金胺Ｏ液;②３％ＨＣＩ酒精液;③０．…     

吖啶橙一金胺O染色法临床应用研究

对结核杆菌采用吖啶橙——金胺O染色法．可把活菌染成绿色，死菌染成红色。对50例痰阳肺结核病入抗痨治疗对应用吖啶橙——金胺O染色观察痰菌的染色情况，并与常规痰培养、病人症状悻征改变、X线影像学变化同步观察对比，结果显示痰涂片结核菌染色与临床疗效基本一致。表明该染色法对于快速判断肺结核病的临床治疗效果具有较高应用价值。     

痰标本多种DNA提取方法检测结核杆菌的对比分析

本文应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌，选择具有代表性的痰标本前处理方法，即方法Ｉ（ＮａＯＨ－ＳＤＳ标准裂解法）、方法Ⅱ（水煮法）、方法Ⅲ（ＮａＯＨ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００沸水浴裂解法）、方法Ⅳ（ＮａＯＨ－ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００裂解法）。选取３０例结核病患者痰标本，同时进行以上４种方法作对比，结果表明方法Ｉ、Ⅱ、Ⅳ分别比方法Ⅲ有显著性差异，而方法Ⅳ从灵敏度和特异性等方面又优于方法Ｉ、Ⅱ。提示取痰     

结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的研究

目的 了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇（EMB）分离株embB基因突变情况,研究其应用价值。方法 通过聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP)、CPR－限制性片段长度多态性（RFLP）和PCR－直接测序技术分析102株结核分枝杆菌临床分离株embB基因。结果 以H37Rv标准株为对照,102株结核分枝杆菌临床分离株的162rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。41株药物敏感株的embB基因SSCP均泳动正常,RFLP和测序分析与对照株相同。61株耐EMB分离株可,23株（37．7％）embB基因SSCP泳动异常;8株RFLP分析异常;测序分析23株均为306位密码子突变,其EMB MICs均≥20μg/ml,其中8株为ATG→ATA或ATT突变,13株为ATG→GTG或CTG突变,后者EMB MICs均≥30μg/ml。结论 部分结核分枝杆菌耐EMB是由于其embB基因突变所致,PCR－SSCP技术可能成为测定部分结核分枝杆菌EMB耐药基因型,简便、快速的方法。