磷酸氯喹诱导U937细胞凋亡机制的研究

目的 将磷酸氯喹作用于白血病细胞株U937,观察其对白血病细胞凋亡的影响;并研究磷酸氯喹是否通过逆转凋亡相关基因PNAS-2蛋白在白血病细胞中异常的亚细胞定位,从而促进细胞凋亡的机制。方法 将不同剂量的磷酸氯喹加入体外培养至对数生长期的白血病细胞株U937培养液中。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡,同时观察磷酸氯喹对U937细胞中PNAS-2蛋白亚细胞定位的影响。结果 50 μg /mL磷酸氯喹可显著促进U937细胞发生凋亡,并使白血病细胞中PNAS-2蛋白的异常亚细胞定位发生改变。结论 磷酸氯喹对白血病细胞株U937有促进凋亡的作用,其凋亡机制可能是使PNAS-2蛋白在白血病细胞中异常的亚细胞定位恢复正常,对于临床治疗白血病的具有潜在的应用价值。     

异常剪接组织因子在急性髓系白血病细胞株中的表达研究

急性白血病的出凝血异常和组织因子(tissue factor,TF)的高表达有关.循环血流中的TF主要表达于细胞、微粒(microparticle,MP)和异常剪接TF(altematively spliced human tissue factor,asHTF)中.为探究asHTF在急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML.)出凝血异常中的作用,本研究选用了6种常见的AML细胞株NB4、BL-60、Kasumi-1、U937、K562和THP-1,在RNA水平进行了RT-PCR检测.结果发现,在6种细胞株中仅NB4、U937细胞存在全长TF和asHTF的RNA水平基线表达并经测序验证,对上述2种细胞在蛋白质水平进行了流式细胞仪及TF活性、杭原检测发现,asHTF仅有极少量TF抗原表达且基本无TF活性,而MP相关TF(microparticle associated tissue factor,MP-TF)的抗原和活性显著高于asHTF.结论:在NB4、U937细胞中asHTF基本无促凝作用,而MP-TF有凝血活性且在肿瘤细胞释放TF中占主导地位.     

凋亡相关基因pnas-2的表达与白血病关系

本研究旨在探讨凋亡相关基因pnas-2与白血病的关系。应用RT-PCR技术检测硫化砷作用前后NB4、K562、U937细胞pnas-2基因的表达及急性白血病病人治疗前后pnas-2基因表达的变化。结果显示：NB4细胞在硫化砷作用后pnas-2表达有明显下调,并呈时间依赖性;而K562及U937细胞在硫化砷作用后pnas-2基因的表达无明显变化。急性白血病病人治疗前pnas-2基因表达阳性率为100%,显著高于正常对照组;经非硫化砷诱导化疗后,完全缓解病人pnas-2基因的表达全部转为阴性;而未达到缓解的病例pnas-2基因的表达仍为阳性,较化疗前无明显变化。结论：pnas-2基因可能与硫化砷诱导APL细胞凋亡密切相关,同时其表达有可能作为急性白血病分子生物学缓解的指标之一。     

预激方案CAG治疗急性髓细胞白血病的疗效及作用机制

目的 观察含粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的预激方案在治疗初治急性髓细胞白血病(AML)中的疗效,并进一步研究其作用机制.方法 13例初治AML患者予以含G-CSF、低剂量阿糖胞苷(Ara-C)和阿克拉霉素(ACR)的CAG方案.以U937细胞株为体外实验模型,流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记Annexin V以及进行细胞周期分析.结果 一疗程完全缓解率为46.2%(6/13),部分缓解率为38.5%(5/13),总有效率84.7%(11/13);二疗程完全缓解率为76.9%(10/13).体外实验中,经CAG处理后,早期凋亡标记Annexin V明显升高(P<0.01).细胞周期检测显示,CAG处理24 h后,S期细胞比例明显升高(P<0.05).结论 G-CSF可增加化疗药物对AML的疗效,其作用机制主要是通过G-CSF促使G0期白血病细胞进入细胞增殖周期,增加细胞周期特异性化疗药物的细胞毒性,诱导细胞凋亡是主要途径.     

阿糖胞苷诱导HL-60细胞端粒酶各组分基因mRNA水平变化的研究

背景与目的阿糖胞苷(Ara-C)是治疗急性非淋巴细胞白血病常用而有效的药物之一。端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白复合物,在肿瘤的发生、发展中起着重要作用。本研究以Ara-C为诱导剂,检测了不同浓度、不同时间Ara-C作用HL-60细胞端粒酶各组分基因mRNA水平的变化,试图为临床阿糖胞苷的用药和评判化疗药效提供一些理论上的依据和指导。方法采用不同浓度Ara-C作用相同时间、同一浓度Ara-C作用不同时间来处理HL-60细胞,通过流式细胞仪观察其凋亡和坏死细胞比例,RT-PCR方法检测端粒酶各组分基因hTERT、hTR和hTP1的mRNA水平变化。结果①体外小剂量0~0.2μg/ml的Ara-C诱导HL-60细胞12h,端粒酶各组分基因在mRNA水平上无变化;②2μg/ml和10μg/mlAra-C组,端粒酶hTERTmRNA水平由0.80±0.07分别下调至0.50±0.04和0.39±0.03而hTR、hTP1mRNA无变化;③10μg/ml浓度的Ara-C作用HL-60细胞不同时间,随时间推移,细胞凋亡比例增加,12h处达到最大值(18.16±4.25)%,随后降低;而细胞坏死比率一直随时间的延长而增加,48h处的坏死比例在本实验的时间段处最大,为(57.94±12.03)%,同时hTERT基因mRNA水平也随着时间的延长而逐渐降低,48h处达最低值0.18±0.03,而hTR、hTP1mRNA水平不随时间的延长而改变。结论①阿糖胞苷下调hTERT基因的mRNA水平,且有浓度和时间依赖性,而对hTR基因、hTP1基因的mRNA水平无影响;②阿糖胞苷下调hTERT基因mRNA水平可能与阿糖胞苷诱导细胞坏死有关,而与诱导细胞凋亡无关。     

CAG方案对HL-60细胞及耐药株作用机理的研究

目的研究小剂量阿糖胞苷和阿克拉霉素联合G-CSF（CAG方案）对HL-60细胞及其耐药株HL-60／A的作用机理。方法以白血病细胞株HL-60及其耐药株HL-60／A为实验模型，模拟临床给药方式，体外加入Ara-C、ACR、G-CSF三药，作用24、48小时后收集细胞，分别进行细胞计数，细胞形态观察，MTr法检测不同药物对两种细胞株的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记Anncxin V，细胞分化抗原CD11h以及进行细胞周期分析。结果经CAG作用48h后，两种细胞株数量明显减少，形态显示凋亡小体增多；早期凋亡标记Annexin V明显增高，CD11b表达轻度升高，与CA组比较，结果有显著差异（P〈0．05）。细胞周期分析显示，CAG作用24h后，与CA组比较，S期细胞比例增高（P〈0．05）；48h后比例下降，结果未见明显差异（P〉0．05）。HL-60细胞与HL-60／A细胞比较，两种白血病细胞株经CAG作用48h后，在细胞数量、细胞形态、凋亡细胞比例、CD11b表达及S期细胞比例的改变方面未见明显差异。结论CAG方案对白血病细胞株HL-60、HL-60／A的作用机制主要是通过GCSF促使白血病细胞进入细胞周期S期，增加小剂量Ara-C、ACR对自血病细胞的细胞毒性，以诱导细胞凋亡为主，轻度诱导分化。     

阿糖胞苷耐药细胞株的建立及其相关生物学检测

蒽环类药物的应用可以导致多药耐药基因的产生，而阿糖胞苷(Ara—C)作为白血病治疗的常用药，阻碍其疗效发挥的重要原因也是耐药问题，Ara—C的应用是否会导致耐药的产生，耐药细胞的生物学特点是否变化以及参与耐药的主要机制是什么目前都不完全明确：我们利用逐渐增加浓度的方法建立了Ara—C的耐药细胞株，并且对其生物学特点和耐药机制进行了系统的探讨。     

糖皮质激素受体在白血病CYP3A5耐药中的信号转导作用

目的 探讨糖皮质激素受体在白血病CYP3A5耐药中的信号转导作用. 方法 采用DNA重组技术构建ptracer-hGR重组质粒,并用报告基因检测方法研究糖皮质激素受体对CYP3A5药物代谢酶转录、表达调控中的信号转导作用. 结果 菌落PCR及测序证实成功构建ptracer-hGR重组质粒.经阿糖胞苷、甲氨蝶呤和长春新碱三种化疗药物加药后共转染ptracer-hGR质粒的实验组荧光素酶相对活性显著高于单纯转染CYP3A5报告基因质粒的对照组,差异具有统计学意义(P=0.0362、0.0034和0.0164);而卡铂和米托蒽醌加药后,荧光素酶相对活性无明显增高趋势. 结论 阿糖胞苷、甲氨蝶呤和长春新碱三种化疗药物可能通过激活糖皮质激素受体这一信号途径而上调CYP3A5 mRNA的转录.     

免疫球蛋白重链和T细胞受体基因重排与急性髓细胞白血病的关系

目的:探讨急性髄细胞白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者的免疫球蛋白重链(IgH)、T细胞受体(TCR)基因重排对疾病预后的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR)方法检测IgH、TCR基因重排。结果:38例患者中12例发生IgH基因重排(31.6%),8例TCR基因重排(21.1%)。阳性病例完全缓解率低;缓解期长的病例阳性率低;初发或复发时阳性率高。结论:IgH、TCR基因重排提示AML患者预后不良,需密切随访。     

全反式维甲酸和柔红霉素对NB4和HL-60细胞株VEGF表达及分泌的影响

目的　探讨在全反式维甲酸 (ATRA)和柔红霉素 (DNR)的分别作用下 ,白血病细胞株NB4和HL 6 0VEGFmRNA表达及VEGF蛋白分泌的变化。方法　应用RT PCR法和ELISA方法研究ATRA和DNR分别对NB4和HL 6 0细胞VEGFmRNA表达及VEGF蛋白分泌的影响。结果　NB4和HL 6 0细胞中均有VEGFmRNA的表达和VEGF蛋白的分泌。ATRA(10 - 5～ 10 - 8mol L)及DNR(0 .0 1～2 .0 0 μmol L)在体外能分别下调NB4及HL 6 0细胞VEGFmRNA的表达和VEGF蛋白的分泌 ,并呈时间(3～ 72h)和剂量依赖性 (r值均为 - 1.0 0 ,P值均 <0 .0 1)。结论　这两种化疗药物除了可以诱导白血病细胞分化或抑制白血病细胞生长外 ,还可以通过抑制促血管新生 ,使新生血管减少 ,以发挥抗白血病的效应。