过度内质网应激在慢性环孢素A肾毒性细胞凋亡中的作用机制*

 目的：探讨过度内质网应激在慢性环孢素A(CsA)肾毒性细胞凋亡中的作用机制。方法：将Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组和慢性CsA肾毒性组,分别给予皮下注射橄榄油(1 mg·kg-1·d-1)和CsA (15 mg·kg-1·d-1)1周或4周后处死大鼠。三色染色和TUNEL染色观察肾小管间质纤维化和细胞凋亡;免疫组织化学染色和免疫印迹检测免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、 磷酸化的真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)、 生长阻滞及DNA损伤诱导蛋白153(GADD153)、caspase-12和caspase-3蛋白表达。结果：CsA注射1周观察不到肾小管间质纤维化和TUNEL阳性细胞,而给予CsA注射4周大鼠表现为明显的肾小管间质纤维化［(38.9±3.3)% vs (0.0±0.0)%, P<0.01］和大量TUNEL阳性细胞 ［(89±9)% vs (7±2)%, P<0.01］。与对照组比较,CsA组BiP和caspase-12蛋白的表达于1周达到高峰,4周后降至正常水平;反之,eIF2α和caspase-3蛋白表达呈时间依赖性增加。结论：在慢性CsA肾毒性中,过度的内质网应激耗尽分子伴侣,激活凋亡途径,从而导致肾小管上皮细胞凋亡和肾小管间质损伤。     

药物中断对慢性环孢素A肾毒性大鼠表皮生长因子表达的影响

[目的]观察停用环孢素A对慢性环孢素A肾中毒大鼠体内表皮生长因子(EGF)表达的影响.[方法]皮下注射给予SD大鼠环孢素A 5周,建立慢性环孢素A肾毒性后,停用环孢素A观察5周和10周;另设正常对照组,皮下注射给予橄榄油.检测各组大鼠体重、收缩期血压、血清肌酐及肌酐清除率;以PAS染色和三色染色观察肾组织病理改变.用免疫印迹法及免疫组织化学染色检测EGF蛋白的表达和分布.[结果]与对照组比较,慢性环孢素A肾毒性组大鼠体重明显减轻,血肌酐显著上升,肌酐清除率明显下降,入球动脉发生玻璃样病变,肾小管间质带状纤维化,EGF蛋白表达明显减少.停用环孢素A可见上述各项指标发生逆转.EGF蛋白的表达随药物中断时间发延长而呈阶梯状增加,且与肾小管间质带状纤维化程度呈负相关(r=-0.848).[结论]停用环孢素A可上调EGF的表达,且呈时间依赖性,而EGF的高表达与改善肾小管间质带状纤维化相关.     

UF-50全自动尿液细胞分析仪检测红细胞的影响因素

为探讨UF-50尿沉渣分析仪检验尿红细胞的准确性,我们对使用该分析仪检验提示有红细胞而尿潜血（±）、以及阴性的598例标本进行尿沉渣显微镜对照分析,结果报告如下。     

夏枯草等3种中药材对四氯化碳性肝损伤的影响

目的：研究覆盆子、夏枯草、阴行草对四氯化碳所致小鼠肝损伤的影响和药材本身对小鼠血清丙氨酸氨基移换酶(ALT)和血清天门冬氨酸氨基移换酶(AST)值的影响。方法：①给小鼠灌胃75％药材水提物5d后，测定ALT和AST。②给灌胃75％药材水提物4d的小鼠用CCl4染毒后，测定ALT和AST。结果：夏枯草使小鼠ALT和AST值明显升高，覆盆子 CCl4、夏枯草 CCl4及阴行草 CCl4组均较CCl4组小鼠ALT和AST值增高非常显著。结论：夏枯草有肝脏毒作用，覆盆子、夏枯草及阴行草有加重CCl4肝脏毒作用。     

活络镇痛片中欧前胡素含量的测定

目的建立活络镇痛片中欧前胡素的含量测定方法。方法采用HPLC,ODS-Hypersil色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);乙腈∶水(45∶55)为流动相;检测波长249 nm。结果平均回收率为98.4%,RSD=2.53%。结论所建方法准确,可靠,可用于该药的质量控制。     

紫外分光光度法测定华法林钾片的溶出度

目的:建立测定华法林钾片溶出度的方法。方法:采用紫外分光光度法,以0.1mol·L-1盐酸为溶媒,溶媒体积900mL,转速50r·min-1,30min取样,在283nm波长处测定其溶出度。结果:华法林钾检测浓度的线性范围为5～30μg·mL-1(r=0.9999);平均回收率为100.53%(RSD=0.69%);3批样品30min溶出度均在90%以上。结论:本方法简便、准确,结果可靠,可用于该制剂的溶出度测定。     

我院113例药品不良反应综合分析

目的：了解我院药品不良反应（ADR）发生特点，促进临床合理用药。方法：采用回顾性分析方法，对我院2006年1月至2007年6月收集到的113例ADR进行汇总分析。结果：ADR的发生女性多于男性；静脉滴注药物引发的ADR占95．58％；发生ADR的前3位药品种类分别为：抗感染药物、中药制剂及循环系统用药；ADR发生频率最高的前3位药品是：头孢哌酮／舒巴坦钠、洛美沙星、掊丙酯；ADR临床表现以消化系统、皮肤及附件、神经系统症状为最常见。结论：应加强静脉抗感染药物、中药注射剂及循环系统药物的合理使用，在实际工作中应注意观察用药过程发生的ADR，加强ADR监测工作，促进安全合理用药。     

C反应蛋白与肾小管间质纤维化关系研究

[目的]探讨C反应蛋白(CRP)与慢性环孢素A(CsA)肾毒性肾小管间质纤维化的关系.[方法]给雄性Sprague-Dawley大鼠皮下注射CsA 4周,建立慢性CsA肾毒性动物模型.采用胶乳增强免疫比浊法、免疫比浊法以及免疫组织化学染色方法检测对照组及慢性CsA肾毒性组大鼠血清高敏CRP(hs-CRP)、CRP及肾内CRP的水平;采用三色染色方法观察肾小管间质纤维化程度;以直线相关分析法对CRP与肾小管间质纤维化程度间的关系进行分析.[结果]慢性CsA肾毒性组与对照组血清CRP和hs-CRP的含量水平间无显著性差异,与肾小管间质纤维化程度无相关关系;慢性CsA毒性组大鼠肾内CRP的表达显著高于对照组,与肾小管间质纤维化程度呈正相关(r=0.862).[结论]慢性CsA肾毒性肾小管间质纤维化与肾内CRP的表达水平密切相关,与血清CRP的含量无关.     

气相色谱法同时测定复方盐酸苯海拉明搽剂中2组分的含量

目的建立以气相色谱法同时测定复方盐酸苯海拉明搽剂中樟脑和薄荷脑含量的方法。方法色谱柱为DB-WAX毛细管柱,柱温采取程序升温,进样口及检测器温度为250℃,载气为氮气,流速为1ml/min,分流比为25∶1,内标为正辛醇。结果樟脑、薄荷脑检测浓度线性范围分别为0.1～1.2mg/ml(r=0.9998)、0.2～1.2mg/ml(r=0.9999),平均回收率分别为98.78%、97.88%。结论本方法简便、准确、专属性强、重现性好,可用于复方盐酸苯海拉明搽剂的质量控制。     

TLR活化参与环孢素A诱发的慢性肾小管间质损伤

目的: 探讨慢性肾小管间质损伤的免疫发生机制。方法: Sprague-Dawley大鼠皮下注射环孢素A(CsA,15 mg·kg^-1·d^-1) 4周建立慢性肾小管间质损伤模型,对照组给予皮下注射橄榄油 (1 mL·kg^-1·d^-1)。检测两组大鼠的肾功能;三色染色和免疫组织化学染色确定肾小管间质损伤程度(炎性细胞浸润和带状纤维化);荧光原位杂交技术和免疫组织化学染色分别观察肾内Toll样受体(TLR)、TLR配基-热休克蛋白70 (HSP70)及补体系统成分(C3、C4d和C9)的表达。结果: 与对照组相比,肾毒性组表现为肾功能低下、肾间质大量ED-1阳性细胞浸润、肾小管间质带状纤维化(P<0.01)。同时,肾毒性组TLR2和TLR4的mRNA 和蛋白水平明显上调;TLR 配体 HSP70 免疫活性增加;补体C3、C4d和C9的免疫活性显著增加。这些高表达的免疫成份主要位于肾小管间质受损部位。结论: 激活的肾内天然免疫与CsA引起的慢性肾小管间质损伤有关。