先天性马蹄内翻足病因的病理研究

先天性马蹄内翻足(congenical clubfoot，CCF)发病率为0．1％～3．0％，畸形包括前足内收、跟骨内翻和踝关节马蹄，均合并有胫骨内旋。病因多为遗传、神经和肌肉病变等^[1]。在多数研究中，对其病理演变过程仍不明了，故有必要对畸形发生的时机及其病理演变过程、影响畸形严重程度的因素作深入研究。动物模型的建立为探究马蹄内翻足的动态病变过程奠定了重要基础。     

东北地区先天性马蹄内翻足病例-对照研究

目的 探讨中国东北地区（辽宁、吉林，黑龙江省）先天性马蹄内翻足（Idiopathic Talipes Equinovarus，ITEV）发生的可能危险因素。方法 以随访和问卷调查方式获得121个ITEV患者家系资料信息，同时选择220个正常者与其相匹配，进行病例-对照研究。结果 排除9例因合并其他畸形的ITEV患者后，剩余112例．男性与女性患者比为2．6：1，双侧马蹄足约占50％；在单侧发病的病例中，右侧多于左侧。夏冬季发病率明显高于春秋季节。在众多环境因素中，母亲孕前及孕期服药在对照组与病例组之间差异有统计学意义（x^2=8．64及13．49，P〈0．01）；孕期胎儿发育受限占病例组总例数的65．2％，与对照组相比差异有统计学意义（x^2=49．29，P〈0．01），是ITEV的高危因素；母亲孕期吸烟、饮酒及患病史在病例组及对照组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 母亲孕前及孕期用药、胎儿发育受限可能是ITEV的危险因素。     

多重置换扩增——一种新的全基因组扩增技术

全基因组扩增技术用于扩增大量的DNA以满足遗传检测的需要。在高通量的遗传分型中,处理有限的临床样本的基因组DNA,一直是个瓶颈问题。一种新方法—多重置换扩增,能高度忠实的复制整个基因组DNA,扩增出10–100 kb大小的片段,能提供大量均一完整的全基因组序列。MDA是一种简单、有效的方法,非常适用于遗传研究,法医学和临床诊断的需要。     

解除膜板DNA中杂质对Taq DNA聚合酶抑制作用的方法

在应用常规Kunkel法,提取甲型血友病家系成员外周血白细胞DNA为模板扩增F8C基因,进行RFLP连锁分析时,我们发现,有些DNA样品,不论是提高变性温度还是延长变性时间,都不能通过PCR扩增出恃异性产物。对这些样品,我们采取了如下处理方法:     

多重PCR法检测东北地区Dystrophin基因缺失及其应用

目的：了解东北地区Dystrophin基因缺失分析特点及进行产前基因诊断。方法：用12对引物以多重PCR法检测98例DMD／BMD患：将高危男性胎儿行缺失检测。结果：缺失检出率为53％：22例高危胎儿中9例男性胎儿为缺失型，缺失位点与先证相同。结论：首次对东北地区筛查缺失发现Dystrophin基因缺失主要分布于两个热区内，外显子8附近区域可能是该地区缺失断裂高发区；多重PCR法为检测患及产前基因诊断提供了捷径，尤其对散发家系是可行的并且有其优越性。     

Huntington舞蹈病与三核苷酸重复突变

Huntington舞蹈病是由于三核苷酸重复突变而发生,这种突变的不稳定性还与临床症状相关。通过三核苷酸重复突变的检测,便可进行临床诊断。     

脊髓性肌萎缩症的基因诊断及其应用研究

目的 对脊髓性肌萎缩症患者及携带者进行基因诊断和产前基因诊断.方法 对26例脊髓性肌萎缩症患者应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-restiction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测SMN1基因第7外显子是否缺失;对于患者的父母应用多重PCR结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的方法进行携带者诊断;而既往生产过患儿的孕妇于孕中期抽取羊水,进行产前基因诊断.结果 26例脊髓性肌萎缩症患者中查出25例存在SMN1基因第7外显子纯合缺失;患者的父母全部为SMN1基因第7外显子杂合缺失携带者;对20名既往生产过患儿的孕妇进行了产前诊断,8名存在SMN1基因第7外显子纯合缺失.结论 PCR-RFLP、多重PCR结合DHPLC技术可应用于患者及携带者基因诊断;PCR-RFLP可用于脊髓性肌萎缩症的产前基因诊断.     

脊髓性肌萎缩症的基因诊断及其应用研究

目的 对脊髓性肌萎缩症患者及携带者进行基因诊断和产前基因诊断.方法 对26例脊髓性肌萎缩症患者应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-restiction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测SMN1基因第7外显子是否缺失;对于患者的父母应用多重PCR结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的方法进行携带者诊断;而既往生产过患儿的孕妇于孕中期抽取羊水,进行产前基因诊断.结果 26例脊髓性肌萎缩症患者中查出25例存在SMN1基因第7外显子纯合缺失;患者的父母全部为SMN1基因第7外显子杂合缺失携带者;对20名既往生产过患儿的孕妇进行了产前诊断,8名存在SMN1基因第7外显子纯合缺失.结论 PCR-RFLP、多重PCR结合DHPLC技术可应用于患者及携带者基因诊断;PCR-RFLP可用于脊髓性肌萎缩症的产前基因诊断.     

马蹄内翻足大鼠模型踝部骨骼、组织及脊髓蛋白质组学分析

目的应用全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱发Wistar大鼠马蹄内翻足模型为实验材料,应用蛋白质学技术探讨先天性马蹄内翻足发病机理。方法按135mg/kg体重经口给予孕10天Wistar大鼠ATRA,孕21天剖检胎鼠,提取畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部组织(去除皮肤)及踝部骨骼总蛋白,双向电泳分离蛋白,考马斯亮蓝染色,PDQuest软件、质谱及生物信息学分析差异蛋白。应用半定量逆转录PCR检测马蹄内翻足畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织xiap、col2α1、tnnt1和ngfr基因表达。应用免疫组化染色检测Xiap蛋白表达。应用TUNEL法进行脊髓、踝部骨骼细胞凋亡检测。结果经双向电泳发现马蹄内翻足模型胎鼠多种蛋白质表达存在差异,质谱及生物信息学进一步分析发现Ⅱ型胶原蛋白等16种蛋白表达发生改变。逆转录PCR检测进一步证实xiap、col2α1在脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调,tnnt1在踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调,ngfr在以上组织表达无异常。免疫组化染色进一步证实Xiap蛋白表达下调。神经、骨骼细胞凋亡发生率是对照组细胞凋亡发生率的5.4和10倍。结论马蹄内翻足大鼠模型踝部组织(去除皮肤)、踝部骨骼及脊髓多种蛋白质存在表达差异。Xiap、Col2α1和sTnT与马蹄内翻足相关,Ngfr与马蹄内翻足无关。ATRA可以诱导脊髓、骨骼凋亡发生率升高,与Xiap表达下调有关,在马蹄内翻足发生过程中发挥重要作用。     

东北地区正常人群St14(DXS52)位点VNTR多态分布及在甲型血友病基因诊断中的应用

目的探讨中国正常人群Ｓｔ１４（ＤＸＳ５２）位点ＶＮＴＲ多态分布，为甲型血友病基因诊断提供依据。方法应用ＰＣＲ方法检测东北地区遗传上无相关的正常汉族个体６０人，男１２人，女４８人，总计１０８条Ｘ染色体。结果共检出８种等位基因片段，最短片段为０．７ｋｂ（Ａ），依次为１．３（Ｂ），１．３９（Ｃ），１．５７（Ｄ），１．６３（Ｅ），１．６９（Ｅ），２．１（Ｇ），２．４ｋｂ（Ｈ）等不同长度的等位片段，其等位基因频率为Ａ０．３９，Ｂ０．０４６，Ｃ０．０８３，Ｄ０．２３２，Ｅ０．１１１，Ｆ０．１３０，Ｇ０．００９，Ｈ０．００９等，其ＰＩＣ为７６．３６％。利用此ＶＮＴＲ多态作为遗传标记，对３个甲型血友病家系进行连锁分析，在一个家系中确定了一名女性为正常人，而非携带者；在另两个家系中各检出一名男性胎儿患者。结论Ｓｔ１４（ＤＸＳ５２）位点ＶＮＴＲ多态是对甲型血友病基因诊断很有应用价值的遗传标记。