不同冻存复苏条件影响K562细胞的生物学特性

目的:观察不同冻存复苏条件对白血病K562细胞株生物学特性的影响,并优化培养条件与方法。方法:实验于2006-02/2006-04在吉林医药学院临床检验实验室进行。①将欲冷冻保存的细胞调整到良好的生长状态,即对数生长期。将细胞分成密度相同的4个组。离心收集后分别加入冻存保护液二甲基亚砜,其终浓度依次为5%、10%、15%、20%分装于冻存管。冻存15d后,每组取出1支复苏并接种于细胞培养板培养。培养12h后吸取少量实验细胞,加入等体积的0.1%台盼蓝染液,5min后在血球计数板上计数,被染成深蓝色的细胞为死细胞;染色很淡、边缘光滑且胞体透明的细胞为活细胞。每个标本计数500个细胞,计数2次取平均值,计算细胞的复苏率。②选择冻存条件和冻存细胞密度相同的2支冻存细胞,采用2种不同的方法进行复苏。第1组:立即将冻存管置37℃水浴中,待融化后1000r/min离心5min,吸去上清液,加入含10%小牛血清的RPMI-1640培养基,混匀后接种于细胞培养板继续培养。第2组:将冻存细胞于40℃水浴中迅速溶解后转入37℃水浴箱,融化后离心、加培养基等操作同第1组。复苏细胞培养12h后采用台盼蓝染色计算细胞的平均存活率。③用无血清RPMI-1640培养基制备3×104/mL的K562细胞悬液接种于细胞培养板中,每孔1mL,然后分别加入5%、10%、12%、15%、20%的灭活小牛血清,每种血清浓度设置4个试验孔并于培养12,24,36,48,60,72,84,96h后每种浓度各取1孔计数细胞量,绘制细胞生长曲线。结果:①5%、15%、20%二甲基亚砜组冻存K562细胞复苏率分别与10%二甲基亚砜组比较,差异显著(86.70%,82.03%,63.09%,88.13%,P均<0.01)。②传统37℃水浴方法复苏后的细胞平均存活率,与40℃溶解后37℃恒温方法比较,差异非常显著[(69.13±1.01)%,(87.50±2.24)%,P<0.01]。③在5%血清含量培养基中,K562细胞基本不生长,且有逐渐死亡的趋势;在10%血清含量培养基中K562细胞生长趋势明显,但生长速度相对较慢;在12%、15%、20%血清含量培养基中K562细胞生长迅速,但3种血清浓度之间细胞生长趋势无明显差异。结论:以10%二甲基亚砜作为K562细胞冻存保护剂并采用改良复苏方法可使细胞保持最佳生物学特性,12%血清为K562细胞常规培养的最适浓度。     

细胞培养中霉菌感染应对措施

细胞培养在科学研究中是一种常用的研究手段,而培养操作不当则容易造成污染,常见的生物污染类型有7种：细菌污染、支原体污染、真菌污染、黑胶虫污染、原虫污染、病毒污染以及非细胞污染。     

酶联免疫双抗夹心法测定Ⅳ型胶原蛋白

建立血清Ⅳ型胶原蛋白(COL Ⅳ)浓度测定的酶联免疫吸附分析法(ELISA),用以辅助诊断肝硬化。应用此法观察了30例正常人和50例肝纤维化患者,结果显示COL Ⅳ浓度在20μg/L～600μg/L之间时,工作曲线最佳,最低检出限为20μg/L,批内变异系数(CV)6.098％,批间CV4.30％,高、低浓度回收率分别为95％和98％;正常人血清COL Ⅳ平均为86.7μg/L,肝纤维化患者平均水平为260.5μg/L,可见辅助诊断肝纤维化具有较高特异性和灵敏度。     

加味升降散口服合耳穴贴压治疗Norplant皮下埋植避孕法后肥胖临床观察

加味升降散口服合耳穴贴压治疗Ｎｏｒｐｌａｎｔ皮下埋植避孕法后肥胖临床观察张鸿来，赵景明，杨金香，侯健美，郭素红，吴建平Ｎｏｒｐｌａｎｔ（左旋１８－甲基炔诺酮）皮下埋植避孕法是目前长效可复性避孕措施中可靠简便的先进避孕方法，但部分受术者术后体重增加渐而...     

腰椎间盘突出症治疗前后血清β-内啡肤含量变化

笔者采用放免法检测了100例陈旧性腰椎间盘突出症患者,经推拿和硬膜外给药治疗前、后血清β-内啡肽(β-EP)的含量变化.结果表明β-EP在治愈时呈上升趋势,与首次治疗后比较有明显差异(P<0.05).     

新老跳伞学员在跳伞训练中抗应激能力的比较分析

本文作者对新老飞行学员在跳伞前后体温、脉搏和血糖含量进行比较分析,旨在探讨学员们在跳伞耐受训练中抗应激能力. 1对象和方法 1.1 对象将某飞行学院学员分为两组(均为男性),第一组20名,军龄为6个月,从未跳过伞,年龄18～20岁;第二组20名,军龄2～3年,均有1年以上的跳伞训练史,年龄20～23岁. 1.2方法①跳伞状况为:安二飞机,时速800 km/h,跳伞高度800 m,伞重15 kg,跳伞方式为主动跳伞(共3次).②环境气象条件测定:用通风干、湿球温度计测定气温、气湿;用黑球温度计测定黑球温度;用热球式风速仪测定风速.③标本采集及处理:每次连续跳伞后在着陆时,每人抽静脉血3 ml,肝紊抗凝,以2000 r/min离心5 min后,收集血浆,保存于-20C备用,同时测定口温和脉搏;跳伞前标本处理与此相同.④血浆中血糖含量的测定:采用美国亚培公cox全自动系列生化分析仪测定.     

人羊水间充质干细胞分离培养方法的优化

背景：目前关于人羊水间充质干细胞的体外分离培养方法不一,获得较多数量的间充质干细胞仍有困难。 目的：分离80份羊水标本,比较不同的体外培养方法,优化筛选到一种合适的培养纯化条件,为人羊水间充质干细胞的基础研究和临床广泛应用奠定基础。 方法：无菌条件下采集足月分娩和终止妊娠引产的羊水,分离羊水细胞,比较孕期、不同培养基、接种密度、首次换液时间对人羊水间充质干细胞原代培养过程的影响,通过细胞化学染色方法检测细胞代谢情况,观察人羊水间充质干细胞的生物学特性。 结果与结论：相同培养条件下,采用AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基,以5×10⁴/cm² 的密度接种,首次换液时间为6 d时,人羊水间充质干细胞原代培养成功率较高。孕期为14~20周的人羊水间充质干细胞培养成功率高于晚期妊娠(21~36周)及足月分娩(37~42周)的羊水。人羊水间充质干细胞强表达过碘酸-雪夫、酸性磷酸酶、酸性α-醋酸萘酚酯酶染色,弱表达中性粒细胞碱性磷酸酶,不表达过氧化酶、苏丹黑染色。提示,优化筛选到一种合适的人羊水间充质干细胞培养纯化条件。     

心理干预对直肠癌永久性肠造口病人生活质量的影响

[目的]观察心理干预对直肠癌永久性肠造口病人生活质量的影响.[方法]46例直肠癌永久性肠造口病人随机分为干预组和对照组,每组23例,对照组给予常规治疗、护理和健康教育,干预组在常规治疗基础上进行心理干预.1个月后比较两组病人生活质量评分情况.[结果]干预组生活质量评分均高于对照组(P<0.05).[结论]心理干预可提高直肠癌永久性肠造口病人的生活质量.     

p63基因的研究进展

p63基因是1997年被发现、克隆到的p53同族基因。随着研究的深入,发现p63基因所编码蛋白种类繁多并且生物学作用复杂,它的表达是肿瘤发生的原因还是结果尚需更进一步的研究。现将近年来有关p63基因的研究新进展综述如下。