基因转染人羊膜细胞对颅脑创伤大鼠海马的作用

目的 观察移植转染胶质源性神经营养因子(GDNF)基因人羊膜细胞(HACs)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠海马神经元的影响.方法 采用改进Feeney法制作TBI致海马神经元损伤模型.TBI 24 h后于挫伤灶边缘移植,移植处距硬脑膜4 mm和2 mm深浅两点移植,共5μl含5×10~5个细胞.TBI+GDNF组移植转染GDNF基因HACs;TBI+eGFP组移植转染eGFP基因HACs;TBI+PBS组注射5μl PBS;假TBI组未行移植操作.移植后12 d Morris水迷宫检测结束后制片并行焦油紫染色,检测海马及移植针道靶点周围组织,取移植针道靶点周围组织行RT-PCR检测GDNFmRNA水平.结果 免疫荧光法检测转染GDNF基因HACs荧光显微镜下呈红色荧光.TBI+GDNF组大鼠学习记忆功能明显好于TBI+eGFP组和TBI+PBS组,TBI+eGFP组和TBI+PBS组大鼠损伤侧海马神经元显著缺失,胞体缩小,深染.TBI+GDNF组部分海马神经元缺失.RT-PCR检测TBI+GDNF组GDNFmRNA高水平表达.结论 移植转染GDNF基因HACs对TBI大鼠海马神经元有保护作用.     

人羊膜上皮细胞侧脑室移植治疗脑出血大鼠实验研究

目的 探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)侧脑室移植对脑出血(ICH)大鼠脑水肿与神经功能恢复的影响.方法 分离培养hAECs,用Hoechst33258和增强绿色荧光蛋白(EGFP)标记hAECs,将其移植入脑出血大鼠侧脑室中,测试大鼠28 d内的运动功能变化与脑水肿的动态变化,并行免疫组织化学观察.结果 移植hAECs沿大鼠侧脑室壁生长,细胞存活4 w以上.巢蛋白(nestin)与波形蛋白(vim)免疫组化检测呈阳性表达,病灶周围小胶质细胞OX-42染色阳性细胞减少.移植组ICH大鼠脑含水量减少,神经功能明显改善.结论 hAECs移植到ICH大鼠侧脑室可存活,表达神经元特异性抗原,并减轻ICH大鼠脑水肿,改善运动功能.     

人羊膜上皮细胞在体内外不同脑损伤环境中向神经元样细胞转化

移植细胞的存活及分化与局部的微环境关系密切。实验发现,RPMI 1640培养基与创伤性脑组织提取液构成的体外模拟创伤性脑损伤微环境下培养的人羊膜上皮细胞部分呈现锥形、三角形或不规则形,伸出类似神经元样的突起, 部分细胞突起相互交织相连,表现出神经元样形态,部分形态改变明显的人羊膜上皮细胞呈微管相关蛋白2阳性表达。人羊膜上皮细胞移植于创伤性脑损伤大鼠脑挫伤灶中心和边缘处后,可存活至少4周,且也呈微管相关蛋白2阳性表达,并使创伤性脑损伤大鼠后肢运动功能明显改善。     

青风藤对单胺类转运蛋白再摄取功能的抑制

目的提取分离青风藤不同极性部位,研究它们对单胺类神经递质转运蛋白再摄取功能的影响。方法建立表达去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)转运蛋白的中国仓鼠卵巢细胞系。在细胞中加入青风藤提取物,检测细胞对相应递质再摄取的变化,以不加药物作为阴性对照。结果青风藤提取物及其氯仿部位,特别是乙酸乙酯部位对去甲肾上腺素再摄取有显著抑制作用,100μg/ml浓度时,NE的再摄取分别为阴性对照的(51.3±5.7)%,(36.9±3.5)%和(25.3±8.0)%。结论青风藤中有某种活性物质通过对转运蛋白的抑制发挥镇痛、镇静、消炎等药理活性。