梅毒螺旋体特异性抗体检测方法在血清学诊断中的应用评估

目的对临床上常用的2种梅毒螺旋体(TP)特异性抗体检测方法进行评价。方法收集350份术前筛查样本,以梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)检测结果分组(第1组125份样本,为TPPA有反应性;第2组25份样本,为TPPA 1∶80弱反应性;第3组200份样本,为TPPA阴性),采用免疫层析法和化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)平行检测3组样本,结果不一致的样本采用免疫印迹法复核。结果第1组和第2组150份样本中,免疫层析法检出有反应性样本145份,5份未检出,敏感性为96.7%(145/150);CMIA检出有反应性样本150份,敏感性为100.0%(150/150),2种方法的敏感性差异无统计学意义(P0.05)。第3组200份样本中,免疫层析法检出弱反应性样本8份,CMIA检出有反应性样本16份。免疫层析法与TPPA有13份样本的检测结果不一致,2种方法的一致率为96.3%(337/350);CMIA与TPPA有16份样本的检测结果不一致,2种方法的一致率为95.4%(334/350);免疫层析法的特异性为98.5%(192/195),CMIA的特异性为94.4%(184/195),2种方法的特异性差异无统计学意义(P0.05)。结论免疫层析法和CMIA均具有很好的敏感性和特异性,且与TPPA一致性较好,可用于临床检测。     

人附睾蛋白4基因表达下调对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨人附睾蛋白4(HE4)基因表达下调对卵巢癌细胞增殖、黏附以及侵袭能力的影响.方法 构建含HE4 shDNA的重组质粒,并将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,RNA干扰后,通过即时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot等测定HE4表达下调情况;同时利用平板克隆形成实验、细胞黏附实验、测定稳定转染细胞的侵袭力改变等方法,比较分析HE4相关的生物学效应.结果 Western blot以及qRT-PCR结果均提示HE4干扰重组质粒构建成功,稳定转染SKOV3细胞后能显著抑制HE4基因的表达.体外实验显示,HE4表达下调的细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05),黏附率明显下降到27.3％,而增殖能力较转染前无明显变化.结论 所构建的HE4干扰重组表达载体能有效抑制HE4基因表达,而HE4表达下调对卵巢癌的细胞黏附和侵袭能力降低.     

抗菌药物专项整治活动对我院胃部及结直肠手术围术期预防用药的影响

目的:比较抗菌药物专项整治活动期间我院胃肠外科胃部手术、结直肠手术在围术期预防用药的合理性,评价抗菌药物专项整治活动对抗菌药物使用的影响。方法:整群选取整治前阶段组(2010年)、整治1阶段组(2011年)和整治2阶段组(2012年)涉及胃部手术、结直肠手术的全部出院病历,进行整治前后预防用抗菌药物合理性的对照研究,考察整治措施的有效性和可行性。结果:预防用抗菌药物综合不合理率整治2阶段为74.92%,较整治前阶段的96.40%明显降低(P<0.05)。整治1阶段初次预防给药时机较整治前明显改善(P<0.05);整治2阶段组除初次给药时机的合理率明显提高(P<0.05)外,用药疗程、术中追加、联合用药等指标合理率也明显提高(P<0.05)。整治各阶段手术部位感染率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:专项整治活动的开展和整治干预措施的出台对胃肠外科胃部及结直肠手术围术期抗菌药物的使用产生了一定影响,尤其是强有力的奖惩措施、强度指标细化控制、开展前瞻性研究等措施更是成效显著。     

1,6-二磷酸果糖三钠盐缓解小鼠体力疲劳功能的研究

目的 对1,6-二磷酸果糖三钠盐缓解体力疲劳功能进行了试验研究.方法 依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)进行1,6-二磷酸果糖三钠盐的缓解体力疲劳功能试验.结果 500mg/(kg·bw·d)组小鼠负重游泳时间长于溶剂对照组(P<0.05);500mg/(kg·bw·d)组小鼠血浆尿素水平低于溶剂对照组(...     

沉默信息调节因子过表达或谷氨酰胺剥夺对肾透明细胞癌细胞凋亡、增殖的影响

背景与目的：肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）是最常见的肾癌类型,它与代谢密切相关。探讨沉默信息调节因子4（silent information regulator 4,SIRT4）过表达或谷氨酰胺（glutamine,Gln）剥夺对ccRCC细胞增殖、凋亡的影响。方法：慢病毒构建SIRT4和突变体H161Y过表达的Caki-2细胞株,利用无Gln的培养基来构建Gln剥夺模型,并通过体外增殖活力实验［细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）］和克隆形成实验来分析两者对Caki-2细胞增殖和生长能力的影响;利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）水平进而评估Gln代谢对细胞ROS含量的影响;进一步通过线粒体膜电位检测、凋亡检测和蛋白质印迹法（Western blot）检测凋亡相关分子,分析SIRT4过表达以及Gln剥夺对Caki-2细胞凋亡的影响。结果：过表达SIRT4可抑制Gln代谢从而抑制Caki-2细胞增殖,另外还原性物质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phostate,NADPH）的生成减少能够增加细胞内ROS含量,促进细胞凋亡。而Gln剥夺抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的效果均比过表达SIRT4明显,但长期缺乏Gln将导致细胞无法生长。结论：无论是过表达SIRT4还是Gln剥夺均能抑制ccRCC细胞增殖,促进凋亡。     

联合检测甲胎蛋白和癌胚抗原的胶体金免疫层析试剂的研制及性能评价

目的 建立一种新型的联合检测甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA).方法 G4和C2为一对抗AFP单克隆抗体(McAb),A1和C9为另一对抗CEA McAb,G4和A1分别以直线形式平行包被于固相硝酸纤维素(NC)膜上,C2和C9分别与胶体金结合后固定于结合物垫,制备成GICA试剂条.膜上另包被2 mg/mL兔抗鼠IgG抗体,用于检测有效性.结果 利用双抗体夹心原理,建立了可同时检测血清中AFP和CEA的GICA.本法经AFP和CEA标准液测定,试剂的敏感性为AFP (30 μg/L)、CEA (10 μg/L),与血红蛋白、人白蛋白、人球蛋白等无交叉反应,稳定性试验表明试剂可以在室温保存6个月以上.86份经化学发光免疫分析仪定量测定AFP、CEA浓度的临床血清标本用于本法的对比测定,符合性良好.结论 联合检测AFP和CEA的GICA试剂具有结果 可靠、方法 简便、快速等优点,与化学发光法测定结果 符合性良好.     

MR-1S融合蛋白的表达、纯化与保存及其抗血清的制备

目的通过人肌纤生成调节因子1(hMR-1S)基因重组表达获得MR-1S-His融合蛋白,纯化后制备抗MR-1S抗血清;同时确定该蛋白保存的稳定体系,为研究MR-1S蛋白理化性质及其功能提供关键的原料。方法利用原核表达载体pET21a(+),构建pET21a-MR-1S重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导MR-1S-His融合蛋白表达,亲和纯化后Western blot鉴定;进一步用该融合蛋白免疫新西兰兔,制备抗MR-1S的多克隆抗体。同时通过在不同温度条件下,对4种不同的稳定体系中保存后蛋白活性测定进行比较,确定最合适的稳定保存体系及条件。结果构建了重组质粒pET21a-MR-1S,并在BL21中进行可溶性表达,经Western blot鉴定确认;免疫新西兰兔获得了抗MR-1S抗血清;确定了合适的稳定体系及保存条件。结论在非变性条件下实现了可溶性MR-1S融合蛋白的表达和稳定保存,进一步制备的抗MR-1S抗血清为研究MR-1S的性质及功能奠定了基础。     

带血管蒂骨瓣转移治疗双侧股骨头缺血性坏死的疗效分析

背景：非创伤性股骨头缺血性坏死（ONFH）常双侧发病,治疗更加困难,采用保留股骨头的治疗方法较为理想。目前,采用带血管蒂骨瓣转移治疗双侧ONFH疗效的报道甚少。 目的：探讨应用带血管蒂髂骨瓣转移治疗双侧ONFH的早中期临床疗效。 方法：2009年1月至2010年12月共收治双侧ONFH患者22例44髋,男10例,女12例;年龄22~41岁,平均32.6岁;体重指数（BMI）16.5~30,平均23.9。按ARCO分期标准分为：Ⅱb期9髋,Ⅱc期14髋,Ⅲa期8髋,Ⅲb期5髋,Ⅲc期8髋。术中所取血管蒂均为旋股外侧血管升支髂棘支骨瓣转移术。双髋分两次进行手术,手术间隔12~16个月,平均14个月。 结果：随访时间为36~47个月,平均40.3个月,单髋术中失血量200~500 ml,平均358 ml。双侧髋关节术后6个月、12个月的Harris髋关节评分（HHS）均较各自术前有明显提高;双侧髋关节术后相同时间点的HHS评分比较无统计学差异。初次手术侧1髋术后出现切口脂肪液化经换药痊愈,其余均无围手术期并发症。术后根据ARCO分期标准2髋由Ⅲb期病变进展至Ⅲc期;1髋由Ⅲc期进展至Ⅳ期,并于术后14个月进行人工关节置换手术。 结论：应用带血管蒂髂骨瓣转移分两次手术治疗双侧ONFH,合适的手术间隔对初次手术侧功能恢复影响较小,双侧髋关节术后早期临床功能评价较高,是治疗双侧ARCOⅡ~Ⅲ期ONFH的有效方法。     

关节镜下陈旧性胫骨髁间棘骨折治疗

目的探讨关节镜辅助下陈旧性胫骨髁间棘骨折的治疗。方法对2001年1月~2004年12月10例陈旧性胫骨髁间棘骨折进行回顾性分析。成人骨折8例,儿童骨折2例,按Meyers-Mckeever骨折分型:Ⅱ型1例,Ⅲ型8例,ZaricznylⅣ型1例。固定方法:单枚空心拉力螺钉固定6例,交叉克氏针固定3例,其中2例为儿童,交叉韧带重建1例。随访时间:10~36个月。结果骨折平均临床愈合时间6周。术后3个月Lysholm膝关节功能评分:90.7±2.1,术后6个月评分:93.4±2.6,所有患膝恢复健侧活动度。结论陈旧性胫骨棘骨折多由新鲜骨折治疗不及时或治疗不当演变而来;对伴有轻度前叉韧带挛缩或松弛的骨折可以复位固定。