汉防己甲素对兔结膜成纤维细胞增生的影响

目的：观察汉防己甲素对培养兔结膜成纤维细胞（rabbit conjunctival fibroblasts,PCF)增生的影响。方法：在体外培养的RCF中分别加入浓度为100、20、4、0．8、0．16μg/ml的汉防己甲素，在1、3、5、7后天用细胞计数法观察RCF生长情况，袍用流式细胞仪检测4μg/ml和2μg/ml汉防己甲素所引起的RCF细胞周期的变化。结果：各种实验浓度的汉防己甲素对培养RCF均有抑制作用并有时间剂量效应；流式细胞仪分析显示RCF经4μg/ml和2μg/ml的汉防己甲素处理48小时后对细胞周期均有影响；G1期细胞分别增加了15．5％和13．3％，S期细胞分别下降了10．3％和9．55％，G2期细胞分别下降了5．55％，4．23％，结论：汉防己甲素通过对细胞周期的影响抑制成纤维细胞的增生。     

海水中腐败斯瓦尼菌毒力和伤口感染能力研究

目的:研究从海水中分离出的腐败斯瓦尼菌的致病性。方法:毒力实验组:22只二级昆白小鼠随机分为4组:实验组腹腔注射腐败斯瓦尼菌,阳性对照组注射标准金葡菌和标准大肠菌,阴性对照组注射无菌生理盐水。伤口感染组:22只SPF小鼠,腿部致伤后随机分为4组:实验组(浸泡含有细菌的人工海水)和阳性对照组(含有标准金葡菌、标准大肠菌),阴性对照组(浸泡无菌人工海水)。观察小鼠一般状况、白细胞、血培养、脏器和伤口培养及病理检查。结果:毒力实验:实验组12 h血培养阳性率28.6%;脏器阳性率42.9%。伤口感染实验:伤口感染阳性率100%,脏器培养阳性率28.6%;病理学检查伤肢肌层水肿、皮下横纹肌间弥漫大量嗜中性粒细胞。结论:自海水中分离出的腐败斯瓦尼菌在106CFU.mL-1时,具有感染能力,可致小鼠伤口、脏器感染和败血症。     

创伤弧菌溶血素基因的高效表达与鉴定

目的:构建创伤弧菌溶血素基因(vvs)的融合表达载体,并实现创伤弧菌溶血素在大肠杆菌中的高效表达.方法:用一对创伤弧菌溶血素基因特异性引物从创伤弧菌基因组DNA中钓取眦基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET-32a( )-vvc融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物行SDS-PAGE并进行West-ern Blot鉴定.结果:构建了pET-32a( )-vvc融合表达载体,DNA测序证明,获得的vvc基因长度为1311 bp,与Gen-Bank中报道的创伤弧菌溶血素基因序列完全一致.SDS-PAGE分析表明,vvc融合蛋白Mr为71×103,其表达量约占菌体总蛋白的32%.Western blot结果显示,目的蛋白可与创伤弧菌免疫后的小鼠血清特异性结合.结论:成功地实现了VVC基因在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究僦蛋白的生物学功能奠定基础.     

海洋细菌的三种保存方法比较

应用10%脱脂乳、35%甘油肉汤和鉴定卡分别在-80 ℃保存海洋细菌,在保存3个月、6个月、1 a和2 a后分别复苏菌种,进行菌种的生化鉴定和药敏测评.发现10%脱脂乳和35%的甘油肉汤对各种菌种的保存效果都很好,到2 a时复苏率和鉴定率都为100%;鉴定卡对肠杆菌、非发酵和肠球菌保存到2 a时的复苏率和鉴定率为100%,但是对弧菌的复苏率则在保存3个月和6个月时为100%,到1 a时降低为80%,到2 a时仅为30%.认为10%脱脂乳和35%甘油肉汤在海洋细菌保存中效果较好,可以长期保存;鉴定卡短期保存细菌是可行的.     

创伤弧菌实验室诊断的研究进展

创伤弧菌自然存在于近海和海湾的海水和海底沉积物中，属弧菌属，为低度嗜盐菌。流行病学和微生物学研究显示，海水温度超过20℃持续2周以上，海水可污染大量创伤弧菌。人通过进食生的牡蛎，经胃肠道黏膜或破损的皮肤接触海水而感染创伤弧菌。临床主要表现为原发性败血症、下肢创伤感染，出现大疱性皮肤损害、皮肤淤斑坏死、蜂窝组织炎等，同时伴高热、低血压、休克。病情进展迅速，最终发展为感染性休克、多器官衰竭甚至死亡，死亡率高达70％。     

EB病毒感染的核酸检测:标本类型的选择

近年来的研究表明,EB病毒(epstein-barr virus,EBV)感染与多种疾病的发生有密切的关系.由于EB病毒独特的感染方式,其实验室诊断特别是核酸检测显得尤为重要.本文就EB病毒的生物学特性、感染方式、抗体产生,特别是核酸检测中标本类型的选择、标准化以及未来的检测方向等问题进行了述评和展望,以期为EB病毒感染相关疾病的诊断和预后评判提供更准确的核酸检测结果.     

抗河流弧菌单克隆抗体的建立及初步鉴定

目的 制备高效、特异的抗河流弧菌单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),为海洋致病细菌的快速免疫诊断提供技术支持.方法 选用雌性BALB/c小鼠(8周龄)制备成为灭活河流弧菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗河流弧菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选其与河流弧菌及其他重要海洋细菌的交叉反应特异性.结果 共获得4株抗河流弧菌mAb,均符合杂交瘤细胞染色体特点,具有良好的特异性和免疫反应性,分别命名为01H10,02F12,05F3和03G10.结论 本研究制备、筛选出抗河流弧菌的mAb,有助于建立抗河流弧菌快速免疫检测试剂盒.     

155例血培养金黄色葡萄球菌耐药分析

目的了解2003-2011年血培养中金黄色葡萄球菌的耐药性变迁,为临床治疗提供依据。方法采用北京伯泰技术开发中心血培养瓶采样,BacT/ALERT 3D全自动血培养仪进行培养,VITEK微生物仪进行鉴定,BIOMIC仪进行药敏测试,WHONET5.4软件进行耐药性分析。结果 2003年1月-2011年12月从临床送检的血培养标本分离出金葡菌155株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA）110株,MRSA在金葡菌中平均发生率为70.9%;9年间金葡菌对万古霉素、利奈唑胺未发现耐药株;对呋喃妥因、复方新诺明敏感性尚好,耐药率〈30%;对四环素、左氧氟沙星、克林霉素、环丙沙星、头孢唑啉、阿齐霉素、红霉素、青霉素耐药率均达50%以上,且表现为多药耐药,最高七重耐药（21.6%）;MRSA最高以八重耐药（34.6%）。结论血培养中金葡菌存在严重耐药,MRSA多药耐药性高,应加强MRSA耐药性监测。     

蓖麻毒素快速ELISA检测法的建立

目的:建立蓖麻毒素快速ELISA检测方法。方法:从8株抗蓖麻毒素的杂交瘤细胞中,筛选亲和力较高的单克隆抗体,用Westernblot和ELISA鉴定、ProteinA纯化、HRP标记,经交叉配伍筛选最佳的抗体组合。结果:建立了蓖麻毒素的快速ELISA检测方法,对蓖麻毒素的最低检出浓度为175ng/L,目视检测最低浓度为625ng/L,整个实验不需仪器可在40min内完成检测。结论:蓖麻毒素快速ELISA检测法为蓖麻毒素生物战剂的快速侦检提供了有效手段。     

004 Th细胞的活化与树突状细胞

树突状细胞(dendritic，DC)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞(APC)，具有很强的抗原呈递能力，并能有效激发T细胞应答。DC在免疫学及肿瘤学乃至其它各学科中的作用也日益受到重视。选择性激活Th1和Th2是许多免疫反应发生的关键，而Th的分化由DC所控制，本文就免疫应答中DC和T细胞相互作用方面的最新研究作一综述。