自然杀伤细胞受体及抗肿瘤研究进展

自然杀伤(NK)细胞受体研究的进展对NK细胞如何选择性的识别和杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞而避免杀伤正常细胞的认识发生了革命性的变化。NK细胞表面的主要抑制性和活化性受体包括杀伤细胞免疫球蛋白样受体,C型凝集素受体家族,自然细胞毒受体等。临床资料显示,异基因骨髓移植中供受者之间杀伤细胞免疫球蛋白样受体-配体错配引发的异源反应性NK细胞活性可以防止白血病细胞复发。本文主要阐述NK细胞的受体是如何调控NK细胞的杀伤活性及调控NK受体-配体间相互作用提高抗肿瘤效应的方法。     

KIR3DS1与HLA-BBw4在广东汉族人群中的分布

目的:研究KIR3DS1与HLA-BBw4正常广东汉族人群中的分布状态.方法:对92例广东汉族干细胞移植供者以序列特异性引物扩增技术(PCR-Sequence Specific Primer)分析KIR3DS1和HLA-B表型;根据BW特异性分类,对HLA-BBw4第80位氨基酸残基为异亮氨酸者指定为HLA-BBw480ILE;依靠计算机软件进行KIR3DS1和HLA-BBw480ILE统计.结果:实验发现,在广东汉族人群中KIR3DS1、HLA-BBw4、HLA-BBw480ILE的表现频率依次为0.228,0.652,0.543;其中12.0%的个体为HLA-BBw4纯合子,14.1%的个体同时表现HLA-BBW480ILE和KIR3DS1,另外有8.70%单独表现KIR3DS1而不表现HLA-BBw480ILE.结论:在广东汉族人群中,只有14.1%的个体同时表达HLA-BBw480ILE和KIR3DS1,而单独表达2KIR3DS为18.70%.     

生物导向治疗肺癌的有效性与局限性

肺癌的发病逐年上升,能手术的病例<30％,且术后复发率又高达50％。非小细胞肺癌化疗有效率30～50％,完全缓解率<10％,长期无病生存<10％。因此期望着新的治疗方法,生物导向治疗引人注目。本文选择特异性及体内导向性较好的抗肺癌单克隆抗体为载体,携带放射性核素~(131)I,在荷人肺癌裸鼠模型上探索其用于肺癌导向治疗的可行性。 本文采用50％饱和硫酸胺和DEAE-52离子交换纯化抗人肺癌单克隆抗体ALTO4,得到单带纯IgG,用氯胺T法标记~(125)I于抗肺癌单克隆抗体ALTO4,标记率为60～70％。标记结合物比活性为85.2KBq/ug蛋白。在荷人肺腺癌(PC84045)细胞NC系裸小鼠体内定位研究表明腹腔注射~(125)I-ALTO4该免疫毒素能选择性地定位于肺癌组织。     

不同肿瘤细胞表面MICA的表达及NK细胞杀伤活性的研究

目的：观察不同肿瘤细胞表面MICA的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。方法：以体外培养的K562（人慢性髓原白血病细胞株）、MCF-7（乳腺癌细胞株）、HR-8348（直肠腺癌细胞株）、CNE-2（人鼻咽癌细胞株）、Hela（人宫颈癌细胞株）为靶细胞，流式细胞仪检测细胞表面MICA的表达，以K562细胞作为对照，应用LDH释放法检测不同效靶比情况下体外培养的NK细胞对靶细胞的杀伤活性。结果：K562、MCF-7、HR-8348、CNE-2、Hela细胞表面均表达MICA，体外杀伤试验表明NK细胞对上述肿瘤细胞均有杀伤活性，anti-MICA单抗可部分封闭NK细胞对靶细胞的杀伤活性。结论：NK细胞对K562、MCF-7、HR-8348、CNE-2、Hela细胞具有较高的杀伤活性，可作为一种生物治疗手段。     

人CD34分化抗原转录调控序列的克隆与调控表达

目的：克隆有特异调控活性的人ＣＤ３４基因５’端转录调控序列。方法：根据已知的ＣＤ３４抗原基因５’－端启动子调控序列,自行设计２对引物,用巢式－ＰＣＲ方法从染色体ＤＮＡ中成功的克隆６６１ｂｐ长度的ＣＤ３４抗原转录调控序列（ＣＤ３４ＴＲＳ,ＣＤ３４ＴＲＳ片段插入启动子报告质粒ｐＥＧＦＰ－１,观察重组质粒ｐＣＤ３４ＥＧＦＰ在造血系细胞和非造血系细胞中的调控表达作用。结果：经限制性内切酶酶切鉴定及ＤＮＡ序列分析证实,克隆的ＣＤ３４启动子序列与文献报道的顺序基本一致,能特异调探ＥＧＦＰ基因在造血细胞系细胞Ｋ５６２中表达。结论：所克隆的人ＣＤ３４分化抗原转录调控序列有特异调控真核基因表达作用,本研究为构建造血干细胞特异性表达载体奠定了基础。     

γ射线照射单倍型供者淋巴细胞输注抗白血病作用的实验研究

目的　探讨 7.5Gyγ射线照射单倍型供者淋巴细胞输注 (DLI)的体内抗白血病作用。方法　荷L61 5白血病 61 5(H 2 k) /BALB/c(H 2 d)F1小鼠 ,于接种L61 5白血病细胞后第 3天接受环磷酰胺(CTX ,2 0 0mg/kg)化疗 ,分别于化疗后第 3 ,5,7天输注 1× 1 0 7经 7.5Gyγ射线照射的亲代BALB/c(H 2 d)小鼠脾淋巴细胞 ,观察抗白血病作用。结果　单倍型供鼠脾淋巴细胞体外经 7.5Gyγ射线照射后 ,增殖能力趋于消失 ,而细胞毒活性增强。输注给荷瘤L61 5CF1小鼠后 ,受鼠的生存期延长为 (1 5.4± 1 .2 )d ,与CTX化疗对照组比较 ,差异具有显著的统计学意义 (t=1 0 .0 3 ,P <0 .0 0 1 ) ,且无严重移植物抗宿主病 (GVHD)发生。结论　 7.5Gyγ射线照射单倍型供者淋巴细胞输注能够在减轻GVHD发生的同时 ,保留抗白血病作用 ,为延迟或预防白血病复发提供一种简便易行的方法。     

HLA半相合骨髓/外周血干细胞移植

HLA完全相合的异基因骨髓 /外周血干细胞移植( allo- BMT/ PBSCT)是治疗恶性血液病的有效手段。但人类主要组织相容性抗原 ,HLA完全相合的骨髓外周血干细胞供源的 ,限制了其应用。据统计 ,在美国30 %需接受该治疗的患者可以找到 HL A完全相合的亲缘供者 ,30 %的患者可以在 30 0     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。     

3’-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾细胞增殖、凋亡及生物功能的调节

背景：靛玉红及其衍生物具有抗炎、抗肿瘤作用，可用于自身免疫性疾病的治疗，但其对正常免疫细胞的作用尚鲜见报道。目的：观察3’-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾淋巴细胞增殖及生物功能影响的调节。设计、时间及地点：随机对照实验，于2007-07，2008—02在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成。材料：清洁级BALB/c，C57BL/6以及F1代杂交鼠，均雄性，6～8周龄，体质量（20±2）g，由第一军医大学实验动物中心提供。3’-甲异靛玉红由美国Sigma公司提供。方法：取BALB＆，C57BL/6以及F1代杂交鼠脾组织研磨过滤为单个核细胞悬液，以5、10、15、20和25μmol／L3’-甲异靛玉红处理各种系小鼠脾细胞，以未处理的为空白对照，以刀豆蛋白A处理组为阳性对照。主要观察指标：MTT法测定各种系小鼠脾淋巴细胞增殖情况；ELISA法测定淋巴细胞培养上清白细胞介素12活性；流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率、细胞内活性氧浓度变化；RT-PCR检测细胞Bcl-2和CDK2基因mRNA水平；荧光显微镜检测细胞Bcl-2、Bax和CDK2蛋白表达率。结果：MTT检测显示，15、20和25μmol／L3’．甲异靛玉红作用24h便可明显抑制3种小鼠脾淋巴细胞增殖俨〈0．05），此效应呈量效、时效依赖性。将25μmol／L3’-甲异靛玉红处理72h后的细胞离心后撤除3’-甲异靛玉红干预继续培养，椎虫蓝记数发现细胞恢复增殖。ELISA检测显示，各浓度3’-甲异靛玉红抑制各种系小鼠脾细胞分泌白细胞介素12，各种系间差异不显著。RT-PCR检测显示，15μmol／L3’-甲异靛玉红处理12h后脾细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平明显降低。流式细胞仪检测细胞凋亡率及死亡率表明，15umol／L的3’-甲异靛玉红可降低各种系小鼠脾淋巴细胞凋亡相关蛋白Bcl，2水平，升高Bax蛋白水平，下调Bcl-2／Bax比例，降低CDK2表达，不同种系     

全身热疗系统治疗恶性血液病15例：加温、测温和控温技术的安全、顺应及有效性观察

目的：探讨恶性血液病患者对于全身加温治疗的耐受性，验证全身加温治疗的顺应性、安全性及有效性。 方法：实验于2005—04／2005—07在南方医科大学珠江医院血液科完成。选择恶性血液病患者15例，均自愿参加观察。应用广东威尔医学科技股份有限公司开发研制的WELLRAY光子热疗智能系统，对患者进行全身加温治疗。治疗前保留导尿，外周静脉插管，联接心电监护，固定体表等温度感受器，关舱加温至直肠内温度40～41℃，保持恒温2h，同时监测多部位体表、空气、治疗床的温度变化，同时行心电监护，加温治疗前及治疗24h后行血液常规和生化等各项指标检查。于全身热疗前及治疗24h后分别应用Kamofsky（KPS）评分评价患者的生活质量，评分范围0～100分，100分正常，无症状及体征；10分病危，临近死亡；0分死亡。 结果：纳入患者15例，全部进入结果分析，无脱落。①15例恶性血液病患者均能耐受40℃，120min的加热过程，具有良好的顺应性。②全身加温治疗24h后，患者的临床症状、体征明显好转，KPS评分平均提高10分。③全身加温治疗前及治疗24h后，患者的血常规和生化等检查指标比较差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：全身热疗系统可以用于恶性血液病的全身加热治疗，治疗过程是安全的，值得在临床上进一步推广应用；而且能显著提高恶性血液病患者的生活质量及临床症状体征，初步显示其有效性，但长期疗效评价正在进行中。