广东汉族人群HLA-Cw多态性及单体型分析

目的 检测广东汉族人群HLA-Cw及HLA-A、B、DRB1基因频率,分析该人群HLA-Cw等位基因多态性及其单体型特点。方法 骨髓移植供者185例,抗凝血提取DNA,半量全自动PCR-RSSO分型检测HLA-A、B、Cw、DRB1基因型。结果 在分辨水平检出Cw等位基因11个,其中分布频率较高的依次为Cw^*03(0.2580)、Cw^*07(0.1887)、Cw^*01(0.1732)、Cw^*08(0.1070)。统计分析呈现显著连锁不平衡的HLA-Cw-A单体型7个,HLA-Cw-B单体型20个,HLA-Cw-DRB1单体型10个。结论 广东汉族群体HLA-Cw基因具有较为丰富的多态性,其与HLA-A、B、DRB1间连锁不平衡单体型具有地区性遗传特征。     

广东汉族人群杀伤免疫球蛋白样受体基因的表达频率

目的 检测杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)基因在广东汉族人群中的分布。方法 对96例广东汉族以SSP法检测其KIR表型,统计不同KIR基因在人群中的表现频率,并与白种人、北印度人、日本人比较。结果 不同KIR的表现表率分别为:2DL1(0.85)、2DL2(0.12)、2DL3(0.58)、2DL4(1)、2DL5(0.24)、3DL1(0.96)、3DL2(1)、3DL3(1)、2DP1(0.97)、2DP2(0.98)、2DS1(0.10)、2DS2(0.30)、2DS3(0.02)、2DS4(0.28)、1D(0.65)、2DS5(0.19)、3DS1(0.23)。比较同一HLA配体相应的KIR,抑制性KIR频率均高于活化性KIR。与白种人和北印度人相比,除KIR2DS4外,广东汉族人群的活化性KIR频率均较低。结论 不同KIR基因在广东汉族人中有不同的表达频率。与其他人种比较,KIR基因的分布有着明显的种族差异。     

小鼠非清髓性半相合骨髓移植造血的重建

目的：探讨在非清髓性预处理条件下,纯化的供鼠NK细胞对MHC半相合小鼠骨髓移植（BMT）造血重建的影响。 方法：以CB6F₁^H-2d/b（BALB/c^H-2d×C57BL／6^H-2b）小鼠为受者,C57BL／6^H-2b小鼠为供者。60只受者小鼠根据不同照射剂量及不同NK细胞输注量随机分为10组,每组6只,经9.0、7.0、6.0 Gy 3个剂量⁶⁰Co照射。经9.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅰ）、半相合BMT组（Ⅱ）。经7.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅲ）、半相合BMT组（Ⅳ）、NK细胞移植1组（Ⅴ）和NK细胞移植2组（Ⅵ）。经6.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅶ）、半相合BMT组（Ⅷ）、NK细胞移植1组（Ⅸ）和NK细胞移植2组（X）。在照射后4 h移植供鼠骨髓细胞,其中NK细胞移植1组（Ⅴ、Ⅸ）每只受鼠移植前输注纯化供鼠NK细胞1×106,NK细胞移植2组（Ⅵ、X）每只受鼠移植前输注供鼠NK细胞5×10⁵。以血常规、体重、生存期等变化为指标,观察60 d。 结果：①生存期：Ⅰ组为（5.83±0.98）d,其他组小鼠生存期均大于60 d。②移植后第10天时白细胞及血小板计数：Ⅴ、Ⅵ组WBC和PLT分别为（1.05±0.30）×10⁹•L^-1、（53.50±12.11）×10⁹•L^-1及（0.95±0.26）×10⁹•L^-1、（47.17±11.82）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅲ、Ⅳ组（P<0.01）;Ⅸ、X组WBC和PLT分别为（0.98±0.34）×10⁹•L^-1、（50.67±12.58）×10⁹•L^-1及（0.88±0.29）×10⁹•L^-1、（45.33±14.36）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅶ、Ⅷ组（P<0.05）。 结论：MHC半相合BMT小鼠移植前输注纯化的供鼠NK细胞促进其造血重建。     

广东汉族人群HLA-Cw多态性及单体型分析

目的检测广东汉族人群HLA．Cw及HLA-A、B、DRB1基因频率，分析该人群HLA-Cw等位基因多态性及其单体型特点。方法骨髓移植供者185例，抗凝血提取DNA，半量全自动PCR-RSSO分型检测HLA-A、B、Cw、DRB1基因型。结果在分辨水平检出Cw等位基因11个，其中分布频率较高的依次为：Cw*03(0．2580)、Cw*07(0．1887)、Cw*01(0．1732)、Cw*08(0．1070)。统计分析呈现显著连锁不平衡的HLA-Cw．A单体型7个，HLA-Cw-B单体型20个，HLA—Cw．DRB1单体型10个。结论广东汉族群体HLA-Cw基因具有较为丰富的多态性，其与HLA-A、B、DRB1间连锁不平衡单体型具有地区性遗传特征。     

造血干细胞移植中HLA-DP不相合对移植物抗宿主病的影响

【目的】探讨HLA DP座位免疫基因与造血干细胞移植 (HSCT)中移植物抗宿主病 (GVHD)发生程度的相关性。【方法】采用PCR SSP HLA DPB1基因分型方法和Thomas分度标准对已知HLA A、B、DR全相同的 12例同胞 (SiblingDonor,SD)、4例无关供者 (Unrelat edDonor,UD)和 1例父亲 (FatherDonor ,FD)捐髓的HSCT进行回顾性的调查。【结果】 12例SD中GVHD 0～Ⅲ°,HLA DPB1不相吻合率约为 4% ( 1/2 4) ,其中DP相同者的受者发生GVHD最强达到Ⅱ°。DP不同者仅为Ⅰ°,4例UD中GVHDⅡ°～Ⅳ°,HLA DPB不吻合率约为 37%( 3/8) ,其中 1例仅有DP不相同和DP相同受者的GVHD均为Ⅱ° ;而DP不相同基础上 ,1例CW 亦不相同为Ⅲ° ,另 1例DR低分辨率相同但高分辨率不相同 ( 0 40 4∶0 40 5 )和DQ不相同则发生Ⅳ°。父亲捐髓的受者GVHD为Ⅰ°,HLA DP为半相合。【结论】 17例造血干细胞移植回顾性分析显示 ,在HLA A、B、DR全相同的条件下 ,SD HLA DP配合与否与GVHD之间无相关性 ,UD HLA DP配合与GVHD显著关联 ;HLA非全相同的亲缘捐髓和无关捐髓的供受者应做HLA DPB1基因配型以准确预测和预防GVHD。     

BALB/c小鼠MHCI类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的　构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法　用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果　用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论　成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 ,为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础     

BALB/c小鼠MHCⅠ类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的：构建BALB/c小鼠MHCⅠ类分子的逆转录病毒表达载体。研究：用RT－PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCⅠ类分子H－2Dd的编码基因，克隆于载体pGEM-T中。经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后，亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV，构建pMSCV-H2Dd4重组逆转录病毒表达质粒，并进行酶切和序列测定鉴定。结果：用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定证实，H－2Dd基因正确插入载体pMSCV,H-2Dd的编码基因经序列测定证实，与文献报道完全一致，阅读框架与设计相符。结论：成功构建BALB/c小鼠MHCⅠ类分子编码基因的逆转录病毒载体，为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础。     

Bmi-1基因及其编码蛋白在SKM-1细胞系中的表达

目的探讨人类Blymphoma Mo-MLVinsertion region(Bmi-1)基因及其编码蛋白在骨髓增生异常综合征(myelodysplasia syndrome,MDS)发病中的地位和作用。方法以正常骨髓和白血病细胞系K562为对照,利用半定量RT-PCR和Western Blot研究MDS细胞系SKM-1中Bmi-1基因在mRNA和蛋白水平的改变。结果SKM-1中Bmi-1在mRNA和蛋白水平均较正常组织有明显表达(P<0.05),二者表达水平与K562细胞系无显著差异(P>0.05)。结论Bmi-1基因在MDS亚型RAEB细胞系SKM-1中有明显表达,其在RAEB发病中可能具有重要意义。     

免疫吸附联合非清髓性CD34+细胞自身移植治疗难治性SLE三例

目的 观察免疫吸附联合非清髓性化疗结合CD34+细胞分选的自体外周血干细胞移植治疗难治性SLE的疗效。方法 难治性SLE 3例，均经肾活检确诊为狼疮性肾炎Ⅳ型，狼疮处于活动期，病情进展，常规治疗无效；应用以葡萄球菌A蛋白作为免疫吸附剂的吸附柱进行免疫吸附，一个疗程共6次，每次吸附血浆3 L；随后采用异环磷酰胺加重组人粒细胞集落刺激因子动员、Baxter CS-3000血细胞分离机采集外周血，获取单一核细胞，通过CD34+细胞分选仪分别得到2.6 × 106/kg、2.1 × 106/kg、2.4 × 106/kg CD34+细胞，采集物中分别含3 × 105/kg、2.1 × 105/kg、2.0 × 105/kg CD3+细胞，预处理为回输前6 d，每日应用氟达拉滨50 mg/d 共5 d，回输前3 d始每日应用抗胸腺细胞球蛋白90 mg/kg共5 d。 结果 ①3例患者吸附后血浆中抗dsDNA、ANA抗体、IgG均明显下降，补体C3明显上升。②3例患者均于移植后2 ~ 3 d获得造血重建。③移植后3例患者临床症状均明显缓解，SLEDAI评分均 < 3分。④移植后6个月，患者血浆中抗dsDNA、ANA抗体均转阴性，补体C3升至正常，尿蛋白转阴性，肾功能恢复正常。结论 移植治疗难治性SLE近期疗效满意。     

APO—1／Fas（CD95）分子研究进展

ＡＰＯ－１／Ｆａｓ为Ｉ型跨膜糖蛋白，分子量４５ＫＤ，属于ＮＧＦ／ＴＮＦ受体家族，广泛分布于多种组织中，与之结合的配体及单克隆抗体均可诱导凋亡，已发现ＡＰＯ－１／Ｆａｓ参与了胸腺细胞选择、ＣＴＬ效应、免疫应答调节等多项生理活动，与自身免疫疾病的发生联系密切，与肿瘤的生长和转移也潜在相关，提示ＡＰＯ－１／Ｆａｓ和相庆配体的相互综合利用能是机体维持自身稳定的一条重要途径，第五届国际白细胞抗原会议命名ＡＰ