同种异体NK细胞对CD+34早期急性髓系白血病细胞的杀伤活性

目的探讨同种异体NK细胞对CD3+4早期急性髓系白血病(AML)细胞的体外杀伤活性。方法免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,以NK杀伤敏感细胞株K562作为对照,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定不同效靶比时NK细胞对CD3+4早期AML细胞KG1a的杀伤活性。结果AML细胞株KG1a中CD34抗原表达率为98.0%±1.1%,分选后的NK细胞纯度为93.2%±3.7%。不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均有杀伤活性,且随着效靶比的增高,其杀伤活性增高(P<0.05)。结论同种异体NK细胞对CD34+早期AML细胞具有一定的杀伤活性。     

BALB/c小鼠MHCI类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的　构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法　用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果　用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论　成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 ,为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础     

Tju103和CTLA4-Ig联合诱导主要组织相容复合物半相合小鼠骨髓移植耐受

目的观察吲哚亚甲基异烟腙(Tju103)和细胞毒性T淋巴细胞相关性抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)联合应用，对主要组织相容复合物(MHC)半相合小鼠骨髓移植的植入以及移植后移植物抗宿主病(GVHD)、移植物抗白血病(GVL)和抗感染的影响；探索一条既能降低GVHD能保留GVL和抗感染能力的移植途径。方法体外以受者(正常CB6F1鼠，H-2^bd)抗原为特异性免疫耐受诱导原，MHC半相合的供者(C57BL／6鼠，H-2^b)T淋巴细胞经和Tju103、CTLA4-Ig共育后，与供者骨髓细胞混合输入经预处理的受者体内。观察Tju103和CTLA4-Ig联合作用对移植后造血重建、GVHD、GVL和抗感染的影响。结果单纯照射组(A组)：全部(10只)白血病小鼠于照射后11d内死于造血功能衰竭，大部分(8只)死于照射后4～7d。环磷酰胺(CTX)治疗组(B组)：全部(10只)小鼠于接种白血病细胞后16～23d(移植后11～18d)死于白血病，但CTX治疗延长了白血病小鼠存活期。单纯移植组(C组)：全部(10只)小鼠于移植后21d内死亡，均死于GVHD。CsA预防组(D组)：4只小鼠于移植后8～22d内死亡，其中1只死于白血病，2只死于感染，1只死于GVHD；6只存活超过30d。Tju103处理组(E组)：4只小鼠于移植后9～26d内死亡，其中1只死于白血病，1只死于感染，2只死于GVHD；6只存活超过30d。CTLA4-Ig处理组(F组)：3只小鼠于移植后14～23d内死亡，其中1只死于感染，2只死于GVHD；7只存活超过30d。Tju103 CTLA4-Ig处理组(G组)：仅1只小鼠于移植后第19d死于GVHD；9只存活超过30d。结论CsA、Tju103或CTLA4-Ig单独处理均可以明显延长小鼠移植后生存期，降低GVHD的发生和程度；CTLA4-Ig有抗感染和GVL作用，而Tju103和CsA则没有此作用；CTLA4-Ig和Tju103两者联合处理供者T淋巴细胞对延长受者生存期和降低GVHD作用更明显。     

间充质干细胞在衰老大鼠体内归巢的研究

目的 探究间充质干细胞(MSCs)在衰老大鼠体内的归巢.方法 采用荧光染料CFSE标记的大鼠MSCs以3×105个尾静脉注射正常大鼠和衰老大鼠,24 h后处死大鼠,将脑、心、肝、肺、脾、肾、肠、睾丸和卵巢制作成冰冻切片及细胞悬液涂片,在荧光显微镜下观察并计数.结果 同种异体的MSCs能够归巢到衰老大鼠的脑、心、肝、肺、脾、肾、肠、睾丸和卵巢,与正常大鼠的归巢有相同趋势.结论 MSCs能够归巢到衰老大鼠的各个器官,这可能与局部血流量和组织器官结构有关.     

MHC半相合骨髓移植后慢性GVHD小鼠模型的建立

目的建立MHC半相合异基因骨髓移植(allo-BMT)后慢性GVHD小鼠模型。方法以(Balb/c×C57BL/6)F1H-2d/b(CB6F1)雌性小鼠为受者,预处理条件为不同剂量的全身照射(TBI,60Co照射),输注MHC半相合Balb/cH-2d雄性小鼠骨髓细胞与不同数量脾细胞,观察移植后小鼠体质量变化,靶器官病理变化,血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体。结果在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠至实验结束(移植后100d)全部存活,体质量减轻与对照组和其它实验组相比差异显著(P<0.05)。血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体较对照组和其它实验组显著升高(P<0.05)。该组皮肤、肝脏等病理改变明显。结论在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠成功诱导出半相合allo-BMT慢性GVHD,为进一步研究慢性GVHD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。     

γ射线照射预防供者淋巴细胞输注相关移植物抗宿主病的实验研究

作者通过观察６０Ｃｏγ射线照射对小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖活性的影响,借助于动物模型证实了γ射线照射对供者淋巴细胞输注（ＤＬＩ）相关ＧＶＨＤ的预防作用,试图探索γ射线照射能够最大程度地去除Ｔ细胞增殖活性,避免移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）发生而不损害ＤＬＩ抗白血病作用的适宜剂量和方法。材料和方法：（１）动物：近交系Ｂａｌｂ／Ｃ（Ｈ２ｄ）,８～９周龄及出生４８～７２小时的６１５Ｈ２Ｋ／Ｂａｌｂ／ＣＨ－２ｄＦ１小鼠。（２）ＧＶＨＤ动物模型：参照孟玉茹等（中华血液学杂志,１９９３,１４：５６４）方法,稍作改…     

人类G6PD cDNA逆转录病毒载体构建及表达

本实验将人类正常G6PD cDNA与逆转录病毒载体pLXSN重组获得表达载体pLG6PDSN,通过脂质体介导法转染红白血病细胞系K562,G418筛选阳性克隆细胞并测G6PD表达.该表达载体的构建成功为严重G6PD缺陷症的基因治疗奠定了基础.     

自体外周血干细胞移植联合异体淋巴细胞输注治疗恶性血液病2例

我们用自体外周血干细胞移植联合异体淋巴细胞输注治疗急性非淋巴细胞白血病 (M2 )及 1例多发骨髓瘤患者 ,取得长期缓解 ,现报告如下。1　病例报告例 1　男 ,1 9岁。因高热、头昏、乏力 1周入院。既往无特殊。体检 :体温 39.8℃ ,脉搏 1 0 0次 / min,呼吸 2 6次 / min,血压 1 2 0 / 68mm Hg(1 mm Hg=0 .1 33k Pa) ,中度贫血貌。全身皮肤和粘膜苍白 ,可见散在出血点 ,浅表淋巴结不肿大。口腔内有 3个散在浅表溃疡 ,约 0 .3cm× 0 .3cm大小 ,咽部充血。双肺呼吸音增粗 ,未闻及干湿音。心率 1 0 0次/ min,各瓣膜区未闻及杂音。实验室检查血…     

巢式聚合酶链反应对231例白血病融合基因的检测

目的:探讨巢式逆转录聚合酶链反应(巢式RT-PCR)动态检测白血病bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因在白血病诊断、治疗、预后判断的价值。方法:应用巢式PCR法对231例急慢性白血病患者bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因作检测,同时结合患者细胞形态学及临床转归予以分析。结果:94例慢性粒细胞白血病患者中,79例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为84.0%;55例急性淋巴细胞白血病患者中,20例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为36.4%;50例急性早幼粒细胞白血病患者中,29例PML/RARa融合基因阳性,阳性率为58.0%;32例急性粒细胞白血病M2患者中,9例AML/ETO融合基因阳性,阳性率为28.2%。结论:巢式PCR是一种快速、敏感而准确的检测方法,可为白血病患者提供分子生物学的诊断依据,并可作为微小残留病的监测指标之一。