去甲斑蝥素增强IL-15活化的PBMC对白血病KG1a细胞的杀伤作用

目的：探讨去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）是否能增强IL-15活化的人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）对人急性髓系白血病KG1a细胞的杀伤作用及其可能机制。方法：锥虫蓝拒染法、CCK-8法检测NCTD对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测NCTD对KG1a细胞周期的影响,LDH释放法检测IL-15活化的PBMC（IL-15-PBMC）对NCTD处理后KG1a细胞的细胞毒活性,流式细胞术检测KG1a细胞表面NKG2D（natural killer group 2 member D）配体的表达。结果：NCTD有效抑制白血病KG1a细胞的增殖,呈时间（r=0.398,P=0.000）和剂量依赖性（r=0.861,P=0000）,并阻滞KG1a细胞周期于G2/M期;4 μg/ml 以下的NCTD对IL-15-PBMC没有明显的增殖抑制作用（P>0.05）。当效靶比为10 ∶1和20 ∶1时,IL-15-PBMC对0.125 μg/ml NCTD处理后KG1a细胞的杀伤率较对照组明显增加\[志愿者A：（37.44±5.78）% vs （9.33±1.69） %, （38.33±3.07）% vs （16.75±1.20）%;P<0.05\]。NCTD不影响KG1a细胞表面NKG2D配体蛋白的表达（P>0.05）。结论：NCTD能增强IL-15-PBMC对白血病KG1a细胞的杀伤作用,可能与抑制细胞增殖、阻滞细胞周期于G2/M期有关。     

人间充质干细胞对裸鼠体内造血重建影响的实验研究

间充质干细胞 (MSC)是骨髓中除造血干细胞和内皮祖细胞以外的另一种成体干细胞 ,有广泛的分化潜能 ,近年来其体内造血支持作用日益受到重视 ,我们对此进行了研究。材料和方法1　主要材料与仪器　骨髓取自胸科切除的非血液病患者肋骨。低糖DMEM干粉培养基为Gibco公司产品 ,胎牛血清为杭州四季青公司产品 ,BALB/c裸鼠购自广州南方医科大学动物中心 ,6～ 8周龄 ,雌雄不限 ,体重 18～ 2 3g,无病原菌条件下饲养。脐血取自广州南方医科大学附属珠江医院妇产科足月产妇 ,产前检测排除HIV、肝炎病毒等感染。CFU Mix甲基纤维素集落培养基Meth…     

异烟腙类衍生物TJU 103体外对人T细胞增殖和细胞毒活性的影响

目的 :探讨异烟腙类衍生物TJU 10 3体外对人T淋巴细胞增殖和细胞毒活性的影响。方法 :体外建立HLA半相合供、受者间单向混合淋巴细胞反应 (MLR)体系 ,利用MTT法检测TJU 10 3应用前后对淋巴细胞增殖和细胞毒活性的影响。结果 :不同浓度的TJU 10 3均能够不同程度地降低HLA半相合供、受者间混合淋巴细胞增殖反应 ,5 0mg/L为最佳反应浓度 ,增殖抑制率达 60 % ,且不影响供者淋巴细胞对原代白血病细胞的杀伤活性 (P >0 0 5 )。结论 :TJU 10 3能够特异性地与CD4 T淋巴细胞结合 ,阻断CD4 T淋巴细胞激活的抗原信号通路 ,在明显降低T淋巴细胞增殖反应的同时 ,不影响其细胞毒作用的发挥 ,有望用于临床HLA半相合移植过程移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病 (GVL)效应的免疫调节。     

过继免疫细胞治疗进展

恶性肿瘤已成为危害人类健康的主要疾病，由于传统手术、化疗和放疗的疗效不尽人意，人们期盼着更加有效的治疗方法。生物治疗作为第4种治疗手段，在肿瘤综合治疗中发挥着越来越大的作用，有望成为最终攻克肿瘤的方法。我们就当前开展及前沿的过继免疫细胞输注治疗做一简要的总结。     

HLA半相合异基因外周血和骨髓造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病急变一例

患者 ,女 ,17岁 ,2 0 0 1年 11月在福建医科大学附属协和医院诊断为慢性粒细胞白血病 (CML)慢性期 ,Ph染色体阳性(p2 10 ) ,予羟基脲、干扰素联合治疗后达血液学缓解 ,WBC维持在 10× 10 9 L左右。 2 0 0 2年 8月复查WBC升至 30× 10 9/L ,原始细胞达 0 .14 ,骨髓检查示急粒变 ,给予口服格列卫 6 0 0mg d治疗 ,2周后外周血细胞分类正常 ,减量至 4 0 0mg d维持。 2 0 0 3年 3月出现双下肢酸痛 ,脾肿大 ,WBC 34.9× 10 9 L ,原始细胞 0 .12 ,骨髓原始细胞 早幼细胞占 0 .2 30 ,给予联合化疗 ,亚砷酸和格列卫治疗后无好转 ,遂进行异基…     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肾脏辐射损伤

背景：研究发现骨髓间充质干细胞可向包括肾脏系膜细胞在内的肾实质细胞分化,且肾损伤后骨髓间充质干细胞具有修复肾脏结构和功能的作用。 目的：观察肾脏辐射损伤大鼠模型接受骨髓间充质干细胞移植后肾脏组织学及功能学变化。 设计、时间及地点：细胞学体外实验,于2009-01/10在珠江医院血液科实验室完成。 材料：清洁级雄性SD大鼠35只,20只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余15只随机分为正常对照组、模型组、细胞移植组,5只/组。 方法：全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,细胞达90%融合时胰酶消化传代。模型组、细胞移植组大鼠建立辐射损伤模型,接受X射线全身照射,剂量率为500 cGy/min,距靶源100 cm,每次剂量6 Gy,1次/周,连续3周。接受照射完毕后24 h,取处于对数生长期的第3代骨髓间充质干细胞,细胞移植组大鼠经尾静脉注射1 mL细胞悬液,含3×106个细胞,共3次;正常对照组、模型组大鼠尾静脉注射同等体积的生理盐水。 主要观察指标：肾脏组织学苏木精-伊红染色结果,血清和肾脏组织中超氧化物歧化酶及丙二醛的表达,血清中肌酐和尿素氮的表达。 结果：①肾脏组织病理显示,模型组肾皮质变薄,间质增多;肾小体分布不均匀;肾小球结构紊乱,肾小球血管及出、入球血管变窄,肾小囊腔部分消失;可见部分肾小球变性硬化表现。细胞移植组肾皮质较模型组明显增厚,结构较清晰,间质充血水肿明显减轻;可见较多完整的肾小体;部分肾小球仍存在变性、硬化表现,可见明显的肾小囊腔。②氧自由基检测结果显示,与模型组比较,细胞移植组大鼠血清和肾脏组织中超氧化物歧化酶的活性均明显升高(P < 0.05),丙二醛水平均明显降低(P < 0.05)。③肾功能检测结果显示与模型组比较,细胞移植组大鼠血清中肌酐和尿素氮浓度明显降低(P < 0.05)。 结论：骨髓间充质干细胞移植具有对抗和修复辐射损伤大鼠肾脏的作用,能够有效改善肾脏功能。     

自然杀伤细胞对高与低表达ABCG2的人耐药鼻咽癌细胞杀伤作用

目的:探讨自然杀伤(NK)细胞对高与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的杀伤活性差异.方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2High及ABCG2LowCNE2/DDP细胞、NK细胞,LDH释放测定法检测NK细胞对K562细胞、ABCG2High<及ABCG2LowCNE2/DDP细胞的杀伤活性,流式细胞技术(FCM)检测两种靶细胞NKG2D配体表达率及杀伤后靶细胞凋亡率.结果:ABCG2High、AB-CG2Low CNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率分别为(91.40±2.32)%、(1.70 ±0.24)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,LDH释放测定法检测结果显示,在效靶比为10 vs 1、20 vs 1时,NK细胞对ABCG2Low细胞、ABCG2High细胞及K562细胞的杀伤率以ABCG2High曲细胞最高,凋亡率检测结果显示ABCG2HighCNE2/DDP细胞的凋亡率为(12.90±1.51)%,ABCG2LowCNE2/DDP细胞的凋亡相率为(6.13±0.85)%,NKG2D配体表达率检测结果显示AB.CG2High CNE2/DDP细胞5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达率高于ABCG2LowCNE2/DDP细胞.结论:ABCG2HighCNE2/DDP细胞比ABCG2LowCNE2/DDP细胞更容易被NK细胞杀伤,其初步的机制是ABCG2HighCNE2/DDP细胞NKG2D配体表达率高于ABCG2LowCNE2/DDP细胞,导致了ABCG2HighCNE2/DDP细胞对NK的杀伤敏感性增强.     

白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a白血病细胞对人外周血单个核细胞的杀伤敏感性

目的:研究白藜芦醇(Resveratrol)作用前后CD34+CD38-KG1a白血病细胞对IL-15介导的人外周血单个核细胞(PBMC)杀伤敏感性的变化及机制的初步探讨.方法:应用CCK-8法检测白藜芦醇对白血病细胞的IC50值,以此量的白藜芦醇作用于白血病细胞.,并用LDH释放法检测白藜芦醇作用前后,效靶比分别为5∶1、10∶1、20∶1的IL-15介导的PBMC对CD34+CD38-KG1a细胞杀伤能力.流式细胞仪(FACS)检测IL-15介导前后PBMC表面NKG2D的表达.流式细胞仪(FACS)检测作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达.结果:白藜芦醇作用前后在不同效靶比时对IL-15介导的PBMC杀伤敏感性差异有统计学意义(P＜0.05).IL-15介导PBMC前后表面NKG2D的表达有显著变化,差异有统计学意义.白藜芦醇作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D各配体中MICA、MICB无显著变化(P＞0.05),ULBP1、ULBP2、ULBP3有显著变化,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:白藜芦醇可以提高CD34+CD38-KG1a细胞对IL-15介导PBMC的杀伤敏感性,其机制可能与白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关.     

急性髓系白血病细胞系中白血病干细胞样亚群的分离和鉴定

白血病干细胞是造成白血病发生、治疗中耐药和白血病复发的根本原因,白血病干细胞的发现为提高白血病治愈率找到了明确治疗的靶标~([1]).大多数白血病干细胞处于CD34~+CD38~-CD123~+发育阶段,可以根据其表面抗原进行分离纯化~([2]).