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三维与二维培养肝癌HepG2细胞的药物敏感性及生物学特性比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察肝癌HepG2细胞株在不同培养模式下的生物学性质、耐药性.方法:采用琼脂糖预铺底法建立体外三维细胞模型,通过倒置显微镜、扫描电镜等方法证实三维细胞模型的成功建立;采用透射电镜、流式细胞术等技术方法,比较二维培养及三维培养细胞中细胞间连接、细胞周期、细胞凋亡的差异;采用MTT法获得不同培养模式下药物5-FU、DDP作用的细胞抑制率.结果:三维培养HepG2细胞第7天可形成直径160μm左右的多细胞球,悬浮生长;二维培养的HepG2细胞贴壁生长.三维培养与二维培养相比,存在细胞周期阻滞:G1期细胞增多[(59.23±1.28)%vs(39.45±1.21)%],G2期细胞减少[(12.47±0.14)%vs(36.15±1.09)%],早期自发凋亡细胞比例减少[(1.62±0.50)%vs(6.29±1.61)%],具有统计学差异(P<0.05);S期细胞比例变化不大[(28.30±0.93)%vs(24.40±0.96)%,P>0.05],晚期自发凋亡坏死细胞比例变化不大[(0.65±0.17)%vs(0.66±0.29)%,P>0.05].二维培养细胞间连接少见,三维培养细胞连接结构丰富,可见桥粒连接、中间连接及紧密连接结构;三维培养下5-FU、DDP药物的细胞抑制率明显降低(与二维培养相比).结论:经倒置显微镜和扫描电镜观察证实肝癌HepG2细胞体外三维培养模型成功建立,在三维培养条件下HepG2细胞对5-FU、DDP表现出多细胞耐药;与二维培养相比,三维培养的细胞间的相互作用有明显增强,且多细胞球生物学特性主要表现为细胞周期阻滞和早期凋亡减少,推测其可能与多细胞耐药有关. 相似文献
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目的:探讨COX-2和VEGF在肝癌多细胞球体(MCS)中的表达与肝癌群集耐药的关系.方法:以liquid overlay技术获得肝癌HepG2多细胞球体为模型,采用透射电镜和扫描电镜比较单层细胞与MCS的形态学差异;采用MTT法和流式细胞技术比较ADM和5-FU对单层细胞和MCS的生长抑制率和细胞凋亡率;采用免疫组化和图像分析技术比较COX-2和VEGF在单层细胞和多细胞球体表达的差异.结果:与单层细胞相比,多细胞球体细胞间黏附广泛而紧密,可见中间连接和桥粒连接. 不同浓度的ADM和5-FU作用48 h,MCS细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均低于单层细胞,差异有统计学意义(P<0.05). 免疫组化结果显示,COX-2和VEGF在MCS上高表达(P<0.05).结论:肝癌MCS具有群集耐药性,可能与其高表达COX-2和VEGF有关. 相似文献
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目的:探讨养正消积胶囊通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导肺腺癌细胞凋亡和自噬的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台对养正消积胶囊重要的4个组分进行分析,筛选有效化合物及与肺腺癌相关基因,并对作用通路进行预测;使用DMSO法对养正消积胶囊成分进行提取后标记为DME25,取对数生长期肺腺癌A549细胞,依据不同DME25浓度分为空白对照组、DME25高(1∶200)、中(1∶1 000)、低浓度组(1∶5 000)。经药物干预48 h后,Western blot法检测细胞凋亡、自噬及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平变化。结果:与正常对照组相比,DME25低、中、高浓度组中A549细胞增殖能力、迁移、侵袭能力减弱,凋亡率均增高,且呈剂量依赖性。Western blot结果显示,A549细胞经DME25干预24 h后,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1表达水平升高,同时促进LC3I向ILC3II转化(P<0.01)。与对照组对比,经DME25干预的各组A549细胞中的p-PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白含量均降低,加入PI3K激活... 相似文献