乙型肝炎病毒核心启动子缺失变异对病毒抗原表达的影响

目的为研究乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(CP)20/21bp部分缺失(nt1748/1747至nt1767)及同时存在的A1896点变异对病毒抗原表达的影响。方法利用前期构建的HBV全基因的重组载体转染HepG2细胞后,对病毒抗原进行ELISA检测及Western-blotting分析。结果变异株分泌到细胞外的HBsAg、HBeAg及细胞内的HBcAg表达量较野毒株均明显减少。结论HBVCP20/21bp部分缺失株及同时存在的A1896点变异株的病毒抗原表达较野毒株显著下降。     

乙型肝炎病毒核心启动子部分缺失真核表达载体的构建及对病毒抗原表达的影响

乙型肝炎病毒核心启动子 (ＣＰ)部分缺失变异已证实在几种ＨＢＶ感染的临床现象中存在[1 3 ] 。我们在一组 14例血清抗 ＨＢｅ阳性的无症状携带者中 ,发现有 9例在ｎｔ174 8(或ｎｔ174 7)至ｎｔ176 7间 2 0 (或 2 1)个核苷酸的缺失 ,此 9例中有 5例合并有ｎｔ1896Ｇ→Ａ点变异[4] 。本研究在此基础上 ,拟构建这种ＣＰ 2 0 / 2 1ｂｐ缺失及合并存在Ａ1896点变异的ＨＢＶ全基因重组真核表达载体 ,并转染ＨｅｐＧ2细胞 ,以研究此类变异株对病毒抗原表达的影响。一、材料与方法1 材料 :ＥＢＯ ｐｐｌｐ质粒由美国Ｓｃｒｉｐｐｓ研究所Ｆｒａｎ…     

干扰素α/β受体慢性乙型肝炎肝组织的免疫组化定位

目的:IFNα/βR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织内的免疫组化定位及其对干扰素应答的预测作用.方法:应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法,对40例慢性乙型肝炎患者肝脏组织内IFNα/βR的分布特点进行了观察.结果:IFNα/βR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织肝细胞膜和胞质内均有不同程度的表达,其中2例患者血管内也有分布.结论:慢性乙型肝炎患者肝肝组织内非溶性的IFNα/βR的表达量可能系IFNα干扰素应答率更为有效的预测指标.     

HBV核心启动子部分缺失重组质粒的构建

目的　构建乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心启动子（ＣＰ）部分缺失的真核表达质粒。方法　利用线性化的、从ＣＰ上游顺 序开始且含完整转录单元的ＨＢＶ 基因克隆（Ｐ３．８Ｉ质粒）为工具,采用分子克隆、人工定点突变、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ,鉴定和测 序分析等技术构建目的载体。结果　成功构建了ＨＢＶ全基因ＣＰ ２０／２１个ｂｐ缺失（ｎｔ １７４８／１７４７－１７６７）和ＣＰ２０／２１个ｂｐ 缺失＋１８９６热点变异的重组真核质粒表达质粒,并经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ序列分析证实。结论　此重组真核表达质粒构建可为 体外进一步研究上述变异的生物学意义奠定基础。     

乙型肝炎病毒前C变异体的体外转录和翻译

目的明确乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ第１７位和２９位密码子突变体对ｅ抗原合成和分泌的影响。方法用ＰＣＲ 方法扩增ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区,克隆后测序及进行序列分析。将ＨＢＶ前Ｃ区Ｔ１８６２／Ａ１８９９位点突变体亚克隆人表达 质粒 ｐＧＥＭＴ中,经体外翻译后,比较野毒株和变异株的表达产物。结果该前 Ｃ区突变株在体外仍能合成 ＨＢＶ ｅ前体 蛋白。结论前 Ｃ区 Ｔ１８６２／Ａ１８９９突变并不能阻断 ＨＢＶ ｅ抗原前体蛋白合成,ｅ抗原前体可能在分泌过程中受阻。     

慢性乙型肝炎患者HBcAg特异性Th细胞克隆的建立及初步分析

目的 了解Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎（CHB）外周血及肝组织中的分布情况。方法 采用有限稀释法,建立CHB患者外周血及肝组织HBcAg特异性Th细胞克隆,并对所获得细胞克隆进行分析。结果 发现自肝组织分离的HBcAg特异性T细胞克隆,92.5%为CD4+表型,以Th1为主;而来源于外周血的T细胞克隆主要以Th0 为主,并与HBeAg是否阳性无关。仅15% （6/40）的T细胞克隆呈现明显的HBcAg特异性淋巴细胞增殖反应。结论 在肝组织及外周血占主导地位的Th细胞极化群的不同,较高比例的Th1细胞在肝组织炎症局部的聚集,提示在HBV的免疫发病机制中,Th1细胞可能起重要作用。     

广州地区严重急性呼吸道综合征的临床特点

目的　探讨当前流行的严重急性呼吸道综合征 (SARS)的若干临床特点。方法　回顾性统计分析广州南方医院收治的 85例SARS患者的临床资料。结果　 85例SARS患者的年龄在 4～ 87岁 ,平均 ( 38.2± 16 .7)岁 ,男 41例 ,女 44例。该病的潜伏期为 2～ 16d ,平均为 ( 7.4± 3 .8)d ;主要临床表现有发热 ( 97.6 %)、咳嗽 ( 81.2 %)、乏力 ( 74.1%)、头痛 ( 6 3 .5 %)、肌肉酸痛 ( 41.2 %) ;热程多为 4～ 12d( 81.9%) ,平均热程为 ( 7.8± 3.5 )d ;外周血白细胞计数正常或降低 ( 82 .4%) ,淋巴细胞计数减少 ( 2 7.1%) ;血液生化示丙氨酸转氨酶升高 ( 44 .7%) ,天门冬氨酸转氨酶升高 ( 5 7.6 %) ,乳酸脱氢酶升高 ( 49.4%) ,肌酸磷酸激酶升高 ( 2 0 %) ;肺部X线摄片主要表现为片状或斑片状炎症渗出( 85 .9%) ,少数表现为间质性炎症改变 ( 14.1%) ;炎症多位于双侧下肺 /中下肺 ( 5 1.8%) ,其次为单侧下肺 /中下肺 ( 36 .5 %) ;发病至肺炎症渗出完全吸收的平均时间为 ( 2 0 .3± 8.4)d ,热退后至肺炎症渗出完全吸收的平均时间为 ( 13 .1± 6 .9)d ;经验性治疗为 :病毒唑、对症支持治疗及应用广谱抗生素。结论　SARS具有传染性 ,发热、咳嗽、胸片示肺部炎症表现及外周血白细胞正常或降低是该综合征的临床特点。     

HBe抗体阳性的肝炎静息与活动者HBV X及C基因变异的对比研究

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）X及C基因变异是否与e抗体阳性的HBV感染的不同临床现象相关。方法 对e抗体阳性14例无症状携带（AsC）者及e抗体阳性14例慢性活动性肝炎（CAH）患者的血清HBV X及前C/C基因序列进行克隆、测序。结果 AsC组中，12例（85.7%）X基因上出现核苷酸插入、缺失、点突变，导致X基因编码的框移而提前终止，或提前出现终止密码子，从而使X蛋白被截短，而14例CAH均编码154个氨基酸的完整X蛋白，没有出现上述X基因的变异；AsC与CAH组中，前C终28变异分别为7例和10例；CAH组C区平均发生氨基酸替代数量（5.71±2.20）显著高于AsC组（2.71±1.73，P<0.001）；C区Val60、Gly87、Leu97变异仅出现于CAH组而不见于AsC病例中，Gln79、Gln135变异多见于CAH而罕见于AsC病例中。结论 X基因的变异所致X蛋白的截短与e抗体阳性肝炎静息的无症状携带临床现象密切相关；C基因的热点变异与e抗体阳性的HBV感染肝炎活动的临床现象密切相关。     

HBV基因型(A～F)多引物对PCR分型法的初步建立

建立一种简便易行的乙型肝炎病毒基因型分型方法 (只需ＰＣＲ)。对ＧｅｎＢａｎｋ中查获的 114例ＨＢＶ全序列进行比较分析 ,找出每种基因型相对于其他 5种基因型的独特序列 ,并根据这些独特序列设计出 6对分别针对Ａ～Ｆ基因型的特异引物。用这 6对引物分别对标本进行ＰＣＲ ,根据阳性结果判断出标本的基因型。进一步简化该方法 ,用多引物对ＰＣＲ法 (ＭｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ) :将Ｂ、Ｃ、Ｄ 3种基因型的特异引物混合进行ＰＣＲ ,并根据扩增片断的大小判断基因型。用此方法对已鉴定的Ｂ、Ｃ、Ｄ型标本进行比较与验证。结果表明 ,单引物对…     

医用臭氧在内科临床中的应用

臭氧(臭氧,ozone,O3)是由3个氧原子组成的、空气中不稳定、常温常压下约45 min转化成氧气.医用臭氧是用医用纯氧通过臭氧发生器产生的臭氧与医用氧气的混合气体,所产生的臭氧浓度必须是能够精确调控的.……