乙肝病毒相关的慢性肝病中病毒血清标志物状态分析

目的调查分析乙肝病毒（HBV）相关的慢性肝病（CLD）[包括慢性乙型肝炎（CHB）、肝硬化（LC）、肝细胞癌（HCC）]中HBV血清标志物不同状态的构成比及其临床意义。方法对2006年1月-2007年12月于广州南方医院住院的2 482例CLD患者的临床资料进行统计分析。结果1 226例CHB中,HBeAg阳性、HBeAg阴性的病例分别占64.4%、35.6%；362例LC和894例HCC中,HBeAg阳性、HBeAg阴性、HBsAg阴性的病例分别占27.1%、66.0%、6.9%和16.4%、75.1%、8.5%。对每一种CLD而言,血清标志物不同状态的男女构成比无显著差异；HCC的男女比值显著高于CHB和LC。CHB中,HBeAg阴性患者的平均年龄显著高于HBeAg阳性者；而LC、HCC中,不同血清标志物状态的患者平均年龄均无显著性差异。HBeAg阴性与HBeAg阳性的CHB病例中,丙氨酸转氨酶（ALT）各区段构成比无显著性差异；而在LC、HCC中,随着HBeAg阳性、HBeAg阴性、HBsAg阴性方向的变迁,ALT低水平区段的构成比均逐渐增加。结论HBV血清标志物状态在慢性肝病中存在着不同的构成比并具有相应的临床意义。     

乙型肝炎病毒X蛋白对NFκB启动子和增强子反式激活作用

应用杆状病毒穿梭质粒载体与HBV X表达质粒共转染HepG2细胞，研究HBV X蛋白对杆状病毒载体中的NFκB启动子和增强子反式激活作用，作为进一步杆状病毒载体应用研究的基础。     

重型乙型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因启动子变异的研究

目的　了解重型乙型肝炎（ 乙肝） 病人血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡＣ基因启动子（ＣＰ） 的变异。方法　对用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 法扩增的血清ＨＢＶＤＮＡ 直接测序。结果　７ 例亚急性重型肝炎病人的ＨＢＶ 分离株ＣＰ区分别有２～１２ 个替代变异，１ 例病人有１１ｂｐ 的碱基插入。ＣＰ变异主要发生于ＣＰ的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，ｎｔ１ ７６２ 和ｎｔ１ ７６４ 的替代变异见于７ 例亚急性重型肝炎病人的４ 例中，是ＣＰ变异的热点，其中３ 例ＨＢｅＡｇ 阴性，说明和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关。ＣＰ的第３ 个ＡＴ丰富区、ＨＢＶ逆转录起始位点（ＤＲ１） 和前Ｃ基因、前基因组转录起始位点未见变异。结论　重型肝炎病人的ＨＢＶＣＰ区存在较多的变异，ＣＰ变异主要发生于和前Ｃ基因相关的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，可能和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关     

核心启动子部分缺失的乙型肝炎病毒基因的真核克隆及其意义

目的：构建乙型肝炎病毒（HBV）核心启动子（CP）20／21bp部分缺失（nt 1 748/1 747至nt 1 767)及同时存在的A1896点变异真核载体，以进一步研究其对病毒复制与转录的影响。方法：利用线性化的、从CP上游顺序开始的、含完整转录单元的HBV基因克隆（P3．8I质粒）为工具，采用分子克隆、人工定点突变等技术构建估变重组载体。用脂质体法将重组载体转染HepG2细胞，提取细胞内DNA和RNA分别进行Southern blot,Northern blot分析。结果：经聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）初步鉴定和测序最终鉴定，突变重组载体构建成功；重组载体转染HepG2细胞后，提取细胞内DNA的Southern blot分析及细胞内RNA的Northern blot分析结果，均提示各变异株较野生株的HBV DNA复制水平及前C／前基因组mRNA、前S／S mRNA转录水平均显著下降。结论：HBV CP 20／21 bp部分缺失株及同时存在的A1896点变异株的病毒复制及转录水平均较野株显著下降。     

乙肝病毒外膜基因变异研究

在我国发现30％～40％HBsAg阴性,所谓隐原性肝硬化,非甲-戊型慢性肝炎病患者仍为慢性HBV感染;有2％～3％的健康人群及献血员为低水平的HBV感染者,如供血仍可引起输血后肝炎。这是流行病学和临床工作的新课题之一。本研究在分子流行病学调查的基础上提出可能这类HBV感染与HBV变异有关。     

乙型肝炎病毒D基因型系统进化树分析

目的：研究HBV D基因型不同毒株全基因进化关系。方法：用聚合酶链式反应（PCR）、克隆及核酸序列测定的方法，测定了1例中国人慢性无症状携带者感染的乙型肝炎病毒D基因型全基因序列。此D基因型毒株全基因序列GenBank Accession为AF280817，将GenBank中已发表的HBV D基因型30株的全序列进行了系统进化树分析。结果：中国株HBV D基因型与源于瑞典（Sweden）的4株HBV D基因型全基因的进化距离最近；地中海地区及欧洲国家系HBV D基因型分布的优势地域，亚洲并非HBV D基因型分布的优势地域。结论：HBV D基因型病毒株传入来源、迁移的方向不同以及病毒株在具有不同遗传和免疫特质的宿主中的长期选择是形成HBV D基因序列病毒进化差异的原因。     

RFLP基因分型在动态监测乙型肝炎病毒基因变异中的应用

目的探讨基因分型结合克隆后测序方法在动态监测ＨＢＶ基因变异中的价值。方法分析１例重型肝炎患者发 病后血清,用 ＰＣＲ扩增血清中 ＨＢＶ ｐｒｅＳ／Ｓ基因片段并克隆,２份标本各随机挑取 ３个阳性克隆进行测序;同时用 ＲＦＬＰ方法分析２份血清中ＨＢＶ毒株的基因型。结果ＰＦＬＰ分析２份血清为Ｂ基因型为主的Ｂ／Ｃ基因型混合毒株感 染;６个克隆中仅１株为Ｃ基因型。比较２份血清ＨＢＶ ｐｒｅＳ／Ｓ克隆核酸序列,有１７０个点位的差异,剔除Ｃ基因型株 后,仅５４个位点差异。结论克隆后测序结合ＲＦＬＰ对ＨＢＶ基因型测定有助于更准确地对ＨＢＶ基因变异进行动态分 析。     

首例中国株乙型肝炎病毒D基因型全序列测定及分析

目的　测定并分析１例中国慢性无症状携带者感染的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｄ基因型的全基因序列。方法　用聚合 酶链式反应（ＰＣＲ）扩增ＨＢＶ全基因,将ＰＣＲ产物克隆后对其进行核酸序列分析并与已发表的ＨＢＶ毒株全序列进行 同源性比较;对 ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的３０株ＨＢＶ Ｄ基因型毒株的全序列进行系统进化树分析。结果　该病毒全基因长 ３１８２ｂｐ,为ａｙｗ亚型,Ｄ基因型;此毒株全基因ＧｅｎＢａｎｋ　ＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ为ＡＦ２８０８１７;与ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的ＨＢＶＤ 基因型全序列同源性为９８．３％～９４．5％,与已发表的 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ和Ｇ基因型全序列同源性均小于８９．５％。结论　首例中 国株 ＨＢＶ Ｄ 基因型全序列与源于瑞典的四株 ＨＢＶ Ｄ 基因型全基因的进化距离最近。     

利用因特网资源进行传染病学教学

分析了当前传染病学新的发展趋势及传染病学教学中面临的“二 空”的困难,即旧的传染病缺乏临床病例及新的传染病缺乏教学资料。针对以上普遍存在的问题,介绍了我们利用因特网于传染病教学中的体会并简介了较有实用价值的有关传染病的一些网址。     

抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者血清HBsAg的下降特点及HBV基因型对其的影响

目的了解血清HBsAg在抗病毒治疗时的下降特点及HBV基因型在其中的作用。方法对在广州南方医院接受抗病毒治疗的80例（阿德福韦组47例、派罗欣组33例）慢性乙型肝炎患者系列血清进行HBsAg定量检测，PCR-RFLP方法进行HBV基因型检测；将基因A至D型的HBV复制质粒转染入Huh7细胞，添加干扰素-α2a并检测细胞内外HBsAg水平变化。结果阿德福韦或派罗欣均可降低血清HBsAg；12周时分别降至基线水平的59．8％和53．6％；治疗12至24周期间HBsAg下降不明显，下降速度仅为前12周的11．2％和9．2％。阿德福韦组HBV基因B型（n=20）和C型（n=24）患者的12周血清HBsAg下降无区别（分别为基线的39．4％和61．6％，P=0．092）；派罗欣组HBV基因B型（n=16）和C型（n=12）患者的12周HBsAg下降至32．6％和54．7％（P=0．174）。细胞内或细胞培养上清HBsAg下降在基因A至D型间无区别。结论阿德福韦和派罗欣治疗都可以降低血清HBsAg水平；下降主要发生在治疗的前12周，下降速度和HBV基因型（B／C）无关。