抗人精浆蛋白单链抗体的构建及表达

目的构建抗人精浆蛋白单链抗体（γＳｍＳｃＦｖ）,为进一步应用基因工程抗体研究打下基础。方法从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体γＳｍＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ,经ＲＴＰＣＲ分离获得了γＳｍＭｃＡｂ轻、重链可变区（ＶＬ、ＶＨ）基因,用连接肽将其构建成具有ＶＨＬｉｎｋｅｒＶＬ结构的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ４Ｔ１中进行表达。结果经测序表明,ＶＨ、ＶＬ及Ｌｉｎｋｅｒ的序列均正确。ＳｃＦｖ在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的４０％。结论构建的抗人精浆蛋白单链抗体,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础     

3种体液细胞染色方法的效果比较

目的选择简单、快速且能反映体液细胞原有结构特征的染色最佳方法。方法比较临床较为常用的苏木精-伊红(HE)染色法、巴氏染色法及瑞-姬(WG)混合染色法对650份不同体液标本进行细胞染色效果及阳性检出率。结果 WG混合染色法操作简便快速,能使体液细胞结构最大限度地保持原有状态及特征,细胞质、细胞核及核仁之间的色差大,易于区分辨认,阳性诊断符合率为99.7%、灵敏度为79.0%、总有效率达94.0%。结论经对各种体液细胞染色观察分析,WG混合染色法效果优于HE和巴氏染色法,特适用于各级检验单位体液细胞的开展。     

尿液常规分析结果自动审核模块的建立与应用

随着电子信息技术的不断发展,LIS的普遍运用[1],医院检验科分析仪器的检测数据得到安全、灵活的管理.检验自动化仪器一般本身附有数据管理软件,在LIS中可根据需要设置数据的管理模式和规则,从根本上改变了以往的检验模式,提高了工作效率,而条形码的应用,简化了检验流程,极大限度地减少了标本传递中的差错[2].然而,目前LIS只是简单地接收样本的基本信息和检测数据,或者进行简单的判断,远不能满足临床审核要求,尤其是无论报告是否需要复查,审核人员都需逐条审核后才可发出报告,既费时,又费力.为此,本研究设计开发了尿液分析结果自动审核模块,并将尿液干化学分析仪和沉渣分析仪的检测数据信息与LIS中的样本信息融合,按照自定义规则进行智能化审核.     

尿液中不同形态的吞噬样细胞在泌尿系统疾病诊断中的临床价值

目的探讨尿液中不同形态的吞噬样细胞在泌尿系统疾病诊断中的临床价值。方法观察289例泌尿系统疾病患者的尿沉渣涂片中吞噬样细胞检出率,并通过瑞-姬染色方法对细胞形态以及吞噬物作对照比较。结果吞噬样细胞在肾盂肾炎患者、肾小球肾炎患者以及膀胱炎患者中均能检出,其中膀胱炎患者检出率96.5%,肾盂肾炎患者检出率78.9%,肾小球肾炎患者检出率为58.8%,而在健康人群中偶见吞噬样细胞,差异有统计学意义(P0.05),并且不同泌尿系统疾病中吞噬样细胞的形态也存在较大差异。在急性泌尿系统感染特别是急性下泌尿系统感染中吞噬样细胞多体积较大,且吞噬物较多,形态不规则,并且有伪足,而在肾小球肾炎患者尿液中的吞噬样细胞体积较小,形态规则,吞噬物均匀,无伪足出现。结论尿液中不同形态的吞噬样细胞在泌尿系统疾病诊断中有重要的临床应用价值。     

低MCV引起PLT计数假性增高的实验研究

目的 评价低红细胞平均体积(MCV)对PLT计数的影响,为实验室制定PLT复检规则提供依据。方法 随机收集2017年3～8月期间的466例门诊检测血细胞计数及五分类患者EDTA抗凝血标本,检验结果分为三组:A组MCV≤65fl,B组65fl9/L,PLT-F值=(282.60±100.5)×10⁹/L,二者之间差异有统计学意义(t=6.799,P<0.05); B组PLT-I值=(305.7±111.7)×10⁹/L,PLT-F值=(304.8±112.3)×10⁹/L; C组 PLT-I值=(292.2±84.4)×10⁹/L,PLT-F值=(291.6±84.4)×10⁹/L。结论 当存在小红细胞或红细胞碎片的情况下,即低MCV≤65fl时,电阻抗法(PLT-I)检测PLT结果,会引起PLT计数的假性增高。     

结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因的克隆表达及其促生长作用的研究

目的 构建结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌Rvl884c和Rv0867c基因的表达蛋白,并初步研究其促生长作用.方法 制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用PCR技术扩增目的 基因片段;将2个片段分别克隆入克隆载体pGEx-4T-1和pUC19,再分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1和pPRO-EXHT,经序列测定证实正确后,再经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST标记的Rv1884c融合蛋白和His标记的Rv0867c融合蛋白;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的相对分子质量大小及表达形式.结果 成功扩增出了结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因,构建了具有正确基因序列的质粒载体pGEX-4T-1-Rv1884c和pPRO-EXHT-Rv0867c,转化人大肠杆菌DH5α中经诱导产生高水平的表达产物.经SDS分析,在相对分子质量为45 000和80 000处出现新生蛋白带,凝胶薄层扫描检测表达量分别约占菌体蛋白的18.3%和23.7%.用GSTrap FF亲和层析柱和Ni2+-NTA纯化柱进行蛋白纯化,并研究这两种蛋白对藤黄微球菌、BCG和结核分枝杆菌H37Rv的促生长作用.结论 成功克隆了结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因并得到了其大肠杆菌表达产物,为进一步研究Rv1884c和Rv0867c基因蛋白的活性及其功能,以及研究结核分枝杆菌快速促生长作用奠定了基础.     

2006-2007年Mohnarin西北地区十家医院非发酵革兰阴性杆菌耐药性监测分析

目的 总结西北地区十家教学医院2006～2007年度临床分离非发酵革兰阴性杆菌的菌群分布和耐药状况.方法 常规方法培养分离医院内感染病原菌,并应用半自动或全自动细菌鉴定分析仪鉴定到种,药敏试验方法按CLSI规定的标准进行.监测数据按卫生部全国细菌耐药监测(Mohnarin)中心设计方案的要求定期上报.采用WHONET5.4软件进行数据统计分析.结果 2006～2007年度西北地区10家教学医院共分离出非发酵革兰阴性杆菌3 148株,其中假单胞菌属细菌1 414株,占分离菌的44.92%(1 414/3 148),不动杆菌属细菌1 403株,占分离菌的44.57%(1 403/3 148), 嗜麦芽窄食单胞菌150株,占分离菌的4.76%(150/3 148).结论 铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌仍是医院内感染的主要监控病原菌,碳青霉烯类和头孢吡肟对医院内感染分离的非发酵革兰阴性杆菌仍有较好的抗菌活性,但应根据细菌的耐药表型检测和药敏结果慎重应用,同时对临床常用其它抗菌药物普遍敏感性降低.应加强对产酶菌和多重耐药菌的监测,为临床正确合理使用抗菌药物提供实验依据.     

多药耐药铜绿假单胞菌的耐药表型及联合药物的体外抗菌活性分析

目的 了解多药耐药绿脓杆菌(MDRP)的产酶状况和耐药性,为临床治疗MDRP感染提供联合用药的实验室依据.方法 常规培养分离细菌,应用VITEK-2全自动细菌分析仪鉴定细菌,MIC检测采用琼脂平板倍比稀释法,按CLSI法规进行.结果 从临床感染的标本中分离出101株绿脓杆菌,MDRP23株占22.77%(痰标本占86.96%).产金属β-内酰胺酶的MDRP占91.3%,产诱导型AMPC酶和质粒型AMPC酶的MDRP分别为52.17%和21.74%.美罗培南与亚胺培南MIC比值≥1的占34.78%.多黏菌素B和亚胺培南对MDRP抑菌率为零,阿米卡星和头孢他啶的抑菌率为4.35%,环丙沙星和头孢哌酮/舒巴坦的抑菌率为43.38%,帕珠沙星和哌拉西林/他唑巴坦的抑菌率为21.74%和26.07%.美罗培南的抑菌率为47.83%.联合药物头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦与阿米卡星的协同作用分别为65.2%、47.8%、43.5%.结论 MDRP主要来源于呼吸道标本,其耐药性与多种耐药机制并存有关,临床应高度重视MDRP的防治,应首选含酶抑制剂复合药物(如头孢哌酮/舒巴坦或哌拉西林/他唑巴坦)联合阿米卡星或多黏菌素B来治疗MDRP引起的感染,并密切结合病情和感染特征及根据感染菌的耐药表型、药敏结果和经验用药的药物疗效等综合情况合理用药.     

藤黄微球菌Rpf基因的克隆表达及纯化鉴定

目的:克隆藤黄微球菌Rpf基因,序列测定正确后进行融合表达纯化.方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法,从藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行纯化.结果:获得藤黄微球菌Rpf基因,得到融合6个组氨酸残基的藤黄微球菌Rpf蛋白,可溶性分析发现融合蛋白主要在包涵体中存在,最后在变性条件下,用Ni2 -NTA 亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的融合蛋白纯度大于90%,Western-Blot证实获得的蛋白为所需要的目的蛋白.结论:构建了藤黄微球菌Rpf基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.     

UF-100尿沉渣分析仪鉴别血尿来源

目的　探讨UF 1 0 0尿沉渣分析仪鉴别血尿来源的临床应用价值。方法　用UF 1 0 0尿沉渣分析仪对 1 5 9例肾小球性血尿和 2 1 3例非肾小球性血尿标本进行检测 ,统计红细胞各项数据 ,并将仪器红细胞提示信息与普通光学显微镜检查结果进行比较。结果　肾小球性血尿和非肾小球性血尿标本的红细胞平均前向散射强度 (RBC MFsc)分别为 5 6 .9± 1 6 .3和 1 0 1 .7± 5 .8(P <0 .0 1 )、红细胞平均前向散射光分布宽度 (RBC Fsc DW)分别为 36 .1± 1 2 .8和 1 5 .4± 6 .2 (P <0 .0 5 )、70 %红细胞前向散射光强度 (RBC P70 Fsc)分别为 5 7.8± 1 5 .8和 1 2 1 .1± 6 .2 (P <0 .0 1 ) ;红细胞提示信息与普通光学显微镜检查结果判断肾小球性血尿的敏感性分别为93.7%和 80 .5 % ,差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ,特异性分别为 83.1 %和 87.3% ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　UF 1 0 0尿沉渣分析仪检测方法简便、快速 ,无主观因素干扰 ,结果敏感准确、客观可靠 ,是一种有价值的鉴别肾小球性与非肾小球性血尿的过筛试验