实验诊断学教学改革中的几点认识

实验诊断学是临床医学各专业诊断学教学的主要内容,为基础课与临床课之间的桥梁课程,是解释疾病规律以及诊断和防治疾病最基本的理论和方法。实验诊断教学存在学时数少而内容多的矛盾,笔者在教学实践中对实验诊断学的教学进行了一系列的改革。     

尿常规检测方法对肾脏疾病诊断的临床研究

目的探讨尿液常规检测对肾脏疾病的诊断及影响因素。方法采用尿液常规自动化分析仪及显微镜分别对经临床及病理确诊的1 968例患者的尿液标本进行检测。结果肾小球性、非肾小球性疾病组红细胞(RBC)均升高,蛋白定性在2+~4+时前者占93.30%,以变形RBC为主高于后者的18.80%,以均一形RBC为主,差异均有统计学意义(P0.05)。RBC干化学隐血检测与显微镜检测符合率达91.70%,假阳性率为1.80%,假阴性率0.78%,白细胞(WBC)检测结果偏低或为阴性。肾小球性疾病组肾小管上皮细胞(REP)检出率为46.80%,明显高于非肾小球性疾病组(9.70%)和正常组,差异有统计学意义(P0.05)。结论尿液自动化检测均存在不同程度的缺陷,应结合尿沉渣金标准手工显微镜检查,才能确保检测结果的准确性,REP可作为肾小球性疾病的诊断指标。     

均相酶免疫法测定24h尿液香草苦杏仁酸在嗜铬细胞瘤中的应用与性能评估

目的探讨均相酶免疫法检测24h尿液香草苦杏仁酸(VMA)水平的性能参数,评估该方法在嗜铬细胞瘤诊断、原发性高血压中的应用。方法建立24h尿VMA水平的均相酶免疫检测方法,分别用均相酶免疫法和手工法同时检测嗜铬细胞瘤组(n=34)、原发性高血压组(n=40)、健康对照组(n=20)24h尿VMA水平。结果该方法重复性、正确度、线性范围、临床可报告范围均达到说明书所标识;灵敏度97.1%,特异度95.0%。均相酶免疫法和传统手工法两种方法呈正相关(r=0.85,P=0.135)。均相酶免疫法检测嗜铬细胞瘤组24h尿液VMA水平明显高于原发性高血压组、健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);原发性高血压组与健康对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论均相酶免疫法检测24h尿液VMA各项性能指标均符合临床要求,可改善检验科的工作模式,提高检测方法的灵敏度和特异度,为患者提供更为快速准确的检测结果。     

裸磁粒子对常见食源菌吸附效果的实验研究

目的 探讨裸磁粒子在不同实验条件下对常见食源菌的吸附效果,为进一步提高食(乳)品,以及水质中病原体污染的检出提供必要的前提条件. 方法采用化学反应沉淀法制备裸磁粒子,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌为实验条件选择用菌株;分别对常见食源菌进行吸附效果观察;采用裸磁粒子吸附后琼脂稀释法计数残留菌数,计算其吸附率. 结果裸磁粒子用量在0.5 ml和1 ml时吸附率效果最好,平均吸附率分别为:99.17%、99.2%,说明随着用量的增加其吸附率也随之提高;作用时间结果在30～60 min之间吸附率差异无统计学意义,对3种实验菌株的吸附率均可达97%以上;作用温度结果在室温(25℃)和37℃时对3种细菌的吸附率均可达到97%以上;对10种常见病原体的吸附效果显示均具有较高吸附率. 结论裸磁粒子作为提高食源性污染菌检测的一种吸附载体,实验证实裸磁粒子对常见食源性细菌均具有较高的吸附率,为提高食(乳)品中污染菌的检出提供条件.     

靶向survivin的microRNA和siRNA抑制前列腺癌细胞survivin基因表达和凋亡作用的比较

目的：构建靶向survivin的microRNA表达载体,观察其与siRNA表达载体对survivin基因表达的抑制作用。方法：以survivin为靶基因,根据pPRIME设计针对survivin的microRNA序列,获得目的片段克隆到相应载体中,序列正确的载体脂质体转染前列腺癌PC-3细胞,RT-PCR和Western Blot检测其对survivin基因表达的抑制作用,流式细胞术和电镜观察其对细胞凋亡的影响。结果：双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确,序列正确的microR-NA和siRNA表达载体在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制PC-3细胞中survivin的表达,流式细胞术和电镜结果显示其可促进PC-3细胞的凋亡,且microRNA表达载体的作用效果较siRNA表达载体强。结论：Survivin靶向microRNA和siRNA均能抑制靶基因的表达,诱导前列腺癌细胞凋亡,与siRNA相比,microRNA作用效果更强。     

肿瘤坏死因子拮抗剂、糖皮质激素、结节对γ-干扰素释放试验检测结果影响

目的 探讨肿瘤坏死因子拮抗剂、糖皮质激素、结节对γ-干扰素释放试验检测结果的影响.方法 选取琼海市人民医院2019年1—10月进行γ-干扰素释放试验(IGRAs)检测的221例患者为研究对象.根据不同年龄将221例患者分为年龄<15岁组(n=34)、16～30岁组(n=35)、31～45岁组(n=33)、46～60岁组...     

胃肠手术患者瑞芬太尼相关基因位点检测在术中麻醉药物剂量评估中的应用

目的　通过检测麻醉药物瑞芬太尼（remifentanil,REM）体内代谢和转运相关基因位点,探讨其与术中瑞芬太尼使用剂量的关系,为患者提供精准的麻醉药物个体化用药指导。方法　收集5 249 例胃肠手术患者血液样本,应用荧光探针原位杂交技术检测瑞芬太尼相关基因位点OPRM1(118A ＞ G),CYP3A4*1G(25343C ＞ T),ABCB1(3435T>C),CYP3A4*18B(A>G) 并进行分析,评估不同基因型患者麻醉药物的使用剂量。结果　OPRM1(118A ＞ G) 位点AA/AG基因型4 636 例（88.32%）,GG基因型613 例（11.68%）,CYP3A4*1G( 25343C ＞ T) 位点CC/CT 基因型4 922 例（93.77%）,TT 基因型327 例（6.23%）,ABCB1(3435T>C) 位点TT 基因型1 842 例（35.09%）,TC/CC 基因型3 407 例（64.91%）,CYP3A4*18B(A>G) 位点AA 基因型5 149 例（98.09%）,AG/GG 基因型100 例（1.91%）。54 例OPRM1 AA/AG,CYP3A4*1G TT,ABCB1 TT 基因型患者麻醉诱导及术中维持中应减低瑞芬太尼剂量,严格控制静脉泵注速度;118 例OPRM1 GG,CYP3A4*1G CC 和ABCB1 CC 基因型患者,术中麻醉维持应根据其麻醉程度适当提高瑞芬太尼剂量和泵注速度;100 例CYP3A4*18B AG/GG 基因型患者适当减少瑞芬太尼剂量,降低静脉泵注速度。结论　不同患者应根据其瑞芬太尼基因型别合理用药,为麻醉药物使用的患者提供精准的用药指导。     

抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb).方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白.用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力.结果:在变性条件下用Ni2 -NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpf domain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽.结论:所获得的抗Rpf domain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具.     

免疫抑制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型的建立及病理分析

目的:建立侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,探讨免 疫抑制宿主曲霉菌病致病机制.方法:以甲基强的松龙为免 疫抑制剂,造成小鼠免疫抑制,对腹腔巨噬细胞和脾细胞进行 计数.双侧鼻孔滴注烟曲霉菌孢子引起侵袭性肺烟曲霉菌病, 不同时间点处死小鼠,进行组织培养及病理分析.结果:糖皮 质激素注射后小鼠免疫细胞数量急剧下降,腹腔巨噬细胞数 量明显减少[(6.33±1.76)×106vs(3.18±0.57)×106, P<0.01],脾细胞和外周血淋巴细胞数量下降(P<0.01);病 理切片可见免疫抑制小鼠感染烟曲霉菌后肺组织大量烟曲 霉菌聚积,组织坏死,形成肺脓肿.结论:成功建立了免疫抑 制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,为研究免疫抑制宿主 易于感染烟曲霉菌的致病机制以及疾病的发生发展奠定基 础.     

白细胞精子症患者精液中IL-2, 8及NO的变化

目的: 探索白细胞精子症的白细胞的产生,是否与IL-2, IL-8和NO有关. 方法: 白细胞精子症患者40例(平均年龄26±4岁),精液中IL-2,IL-8水平测定采用双抗体夹心ELISA法. 白细胞密度采用邻甲苯胺-过氧化物酶染色法. 用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐(NO-3). 结果: 白细胞精子症不育组精液IL-2,IL-8和NO水平分别为(20.5±5.4),(6.3±0.8) μg*L-1和(108.6±2.0) μmol*L-1;明显高于非白细胞不育组(11.8±6.7), (2.4±0.4) μg*L-1和(75.8±2.3) μmol*L-1及生育组(11.4±6.8), (1.8±0.4) μg *L-1和(40.8±1.5) μmol*L-1,(P<0.001). 非白细胞不育与生育组相比IL-2, IL-8水平无显著差异(P>0.05),NO有差异(P<0.01). 结论: 白细胞精子症不育精液IL-2, IL-8水平升高使男性生殖管壁中淋巴细胞活化,白细胞聚集于精液. IL诱导NO合成对精子和生殖组织具有毒性和损害作用致男性不育.