青蒿素作用前后K562细胞基因表达谱的改变

目的:利用基因表达谱芯片研究青蒿素对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响.方法:青蒿素处理K562细胞24 h后,分别提取处理组和对照组细胞的总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用Cy3和Cv5两种不同的荧光染料进行线性扩增标记,与人全基因组基因表达谱芯片杂交,采用生物信息学方法分析青蒿素处理前后K562细胞基因表达谱的改变.结果:总共发现差异基因238个,其中上调基因136个,下调基因102个,并对其进行生物学功能分类.结论:应用全基因组表达谱芯片并结合Panther生物学软件分析差异表达基因,青蒿素作用K562细胞主要是通过细胞毒作用诱导细胞凋亡,而抑制细胞生长作用并不明显.     

Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的 构建Has-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法 以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因.通过却Hpa I/Xho I双酶切及其后的连接将其插入Lentilox 3.7(pLL-3.7)质粒中.PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pLL-3.7-mir-196b、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒系统共感染HEK-293FT细胞,包装生产慢病毒.将所得病毒悬液梯度稀释后感染HEK293FT细胞,以检测病毒滴度,并用实时定量PCR检测慢病毒感染后Has-mir-196b的表达变化.结果 PCR及测序结果证明成功构建了pLL-3.7-mir-196b重组质粒.所得慢病毒上清滴度为(7.2±101)×107TU/ml.感染慢病毒的239FT细胞中,Has-mir-196b的表达量相对于未感染细胞提高了约24倍.结论 成功构建Has-mir-196b慢病毒表达载体.     

普通级、SPF级SD大鼠、Wistar大鼠血常规的测定与比较

目的　测定普通级、SPF级SD大鼠、Wistar大鼠血常规指标并进行比较。方法　Coulter -JT全自动血常规检测仪自动检测。结果　普通级、SPF级SD大鼠白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板计数、血小板平均分布宽度、红细胞平均分布宽度相差非常显著 (P <0 0 1) ;中性粒细胞、单核细胞相差显著 (P <0 0 5 )。普通级、SPF级Wistar大鼠白细胞计数、中性粒细胞、单核细胞、红细胞计数、红细胞平均体积、平均红细胞血色素量相差非常显著 (P <0 0 1) ;血红蛋白、血小板计数、血小板平均分布宽度相差显著 (P <0 0 5 ) ,其他指标相差不显著。结论　不同微生物学环境对SD、Wistar大鼠血常规指标有较大影响     

腺癌发生过程中的基因改变

目前已公认,肿瘤的发生是一个多步骤的过程,在这一过程中基因异常改变的积累,最终导致肿瘤表型的出现.基因改变导致肿瘤发生已经不是一个新假说了,很早就已发现了癌症的遗传易感性,癌细胞中染色体发生的改变,以及化学致癌剂引起的DNA的变化.肿瘤发生时的基因水平的改变是多种多样的.包括基因扩增、点突变、基因重排以及特殊基因的缺失.最近,作者提出了一个结直肠癌发生的基因改变模型,包括下列几个方面:首先,结肠癌的发生可能是由于癌基因的突变激活以     

怡欣乐口服液对慢性疲劳模型动物免疫调节作用的影响

目的 :研究中药复方制剂怡欣乐口服液 (简称YXL)治疗慢性疲劳综合征的作用机制。方法 :在应用复合应激因素建立慢性疲劳动物模型的基础上 ,将动物随机分为空白组、模型组、怡欣乐大、小剂量组和复方阿胶浆组 ,经治疗后对各组动物的IL 2、IFN、NK的免疫调节网进行了检测。结果 :模型组动物免疫调节网水平比正常动物明显降低 (P <0 0 1) ;而经YXL大、小剂量组和复方阿胶浆组治疗的动物的IL 2、IFN、NK活性皆有明显的提高 ,与模型组对照差异有显著性 (P <0 0 1) ;并恢复至接近正常水平 ,与空白组对照P >0 0 5。结论 :免疫调节网活性降低可能是慢性疲劳综合征发生的病理机制之一 ,提高和调整慢性疲劳模型动物低下的IL 2 IFN NK免疫调节网水平 ,可能是YXL发挥滋补肝肾、填精怡神功效 ,治疗慢性疲劳综合征的机理之一     

GFP基因真核表达质粒的构建及其在人胚肾293细胞中的表达

目的 克隆绿色荧光蛋白（GFP）基因并构建真核表达载体，观察其在人胚肾293（下称293细胞）细胞中的表达和分布，为制备自行设计的以λ噬菌体为载体的人类免疫缺陷病毒（HIV）核酸疫苗的阳性对照奠定基础。方法 以克隆好的pUC18／GFP为模板，根据Genbank中GFP的核苷酸序列设计引物，并在引物的5′端分别引入BamHⅠ及XhoⅠ酶切位点，特异性扩增GFP基因。TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒，再经双酶切、连接构建含GFP编码基因的真核表达载体，酶切鉴定分析后，将该重组质粒通过脂质体介导，转染293细胞。荧光显微镜观察GFP在细胞内的表达和分布。结果重组质粒经Barn HⅠ、XhoⅠ双酶切成5．4kb与0．7kb的片断，表明表达载体pcDNA3．1（＋）中插入了GFP基因片断，测序结果表明编码框正确，并在293细胞中获得了表达，分布均匀。结论 pcDNA3．1（＋）／GFP真核表达载体已成功构建，并可在293细胞中表达。     

乳酸菌超氧化物歧化酶基因的克隆与特性分析

目的：克隆乳酸菌超氧化物歧化酶（SOD）基因并进行特性分析。方法：根据已报道的乳酸菌SOD基因序列,采用PCR技术获得SOD碱基序列,将所得的PCR产物插入克隆载体pMD-18T中,重组质粒经酶切,PCR鉴定及测序,获得的序列进行生物信息学分析。结果：成功克隆了SOD基因,序列分析表明,该SOD基因由621bp组成,编码206个氨基酸残基,蛋白分子量为23KD,等电点为4．96。结论：该蛋白氨基酸序列主要以α-螺旋为主。     

hsa—miR-30e的克隆及其慢病毒表达载体的构建

目的克隆hsa—miR-30e并构建其慢病毒表达载体。方法PCR扩增hsa—miR-30e的前体序列,克隆于慢病毒载体p113．7,转染包装细胞293FT细胞,收获病毒颗粒,荧光定量PCR检测hsa—miR-30e的表达。结果经双酶切及测序鉴定,hsa—miR-30e的慢病毒表达载体构建成功,倒置荧光显微镜下观察转染后293FT细胞发出绿色荧光。结论成功构建hsa—miR-30e的慢病毒表达载体,为进一步研究hsa-miR-30e的生物学功能奠定了基础。     

Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因。通过HpaⅠ/XhoⅠ双酶切及其后的连接将其插入Lentilox3.7（pLL-3.7）质粒中。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLL-3.7-mir-196b、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒系统共感染HEK-293FT细胞,包装生产慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染HEK293FT细胞,以检测病毒滴度,并用实时定量PCR检测慢病毒感染后Hsa-mir-196b的表达变化。结果 PCR及测序结果证明成功构建了pLL-3.7-mir-196b重组质粒。所得慢病毒上清滴度为（7.2±1.1）×107TU/ml。感染慢病毒的239FT细胞中,Hsa-mir-196b的表达量相对于未感染细胞提高了约24倍。结论成功构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体。     

肝细胞癌基因表达谱分析

目的：通过分析肝细胞癌（HCC）基因表达谱改变来探讨HCC发病机制。方法：从GEO数据库中下载HCC基因表达数据GSEl4215和GSE29217,采用Genespring11．0软件分析差异表达基因,运用统合分析（meta—analysis）方法确定共同差异表达基因,利用DAVID、KEGG、String和FABLE等生物信息学软件确定相关的生物学过程、分子功能、相互作用通路等。结果：HCC组织与正常肝组织相比,共同下调、上调的差异表达基因分别是281和227个,其中作为转录因子36个;与文献报道的HCC相关基因一致的有181个。差异表达基因主要与细胞周期调控、代谢调节、药物代谢酶系、DNA的损伤复制、p53和过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路（PPAR）等信号通路有关。结论：HCC基因表达谱数据分析表明,细胞周期紊乱主要发生在S、M期;转录因子FOXM]／HNF3高表达与HCC的细胞周期紊乱密切相关。