寡核苷酸芯片技术在甲型流感及登革病毒检测分型中的初步应用

目的 建立寡核苷酸芯片检测技术,对甲型流感病毒及登革病毒进行早期检测及分型.方法 根据Genebank中病毒基因组序列的保守区域,设计病毒的特异性检测探针,制备病毒检测芯片;利用限制性显示技术标记样品中的病毒靶序列,将标记产物与芯片杂交、清洗、扫描及结果分析.结果 该方法可以正确检测到细胞培养所获得的甲型(H1N1,H3N2)流感病毒和登革四型病毒.结论 寡核苷酸芯片技术可应用于多种病毒及其亚型的早期检测.     

大肠杆菌poly(A)化mRNA cDNA文库的构建与鉴定

目的构建和鉴定大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库。方法应用限制性显示PCR技术构建大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库,筛选、收集cDNA片段,并进行测序。根据测序结果进行初步的生物信息学分析和结果验证。结果构建了大肠杆菌poly(A)化mRNA的限制性cDNA文库,并对其中66个基因片段进行了分析。结论所构建的大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库片段重复性低,质量高。     

基因芯片技术检测丁型肝炎病毒的研究

目的 制备检测丁型肝炎病毒(HDV)基因芯片。方法 针对HDV基因保守区域设计多对PCR引物。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术，样品标记后进行杂交。结果 运用PCR技术得到多个HDV特异性基因片段，序列分析表明，所扩增的片段均属于HDV特异基因。杂交结果显示，样品和HDV诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论 用基因芯片检测HDV具有敏感、高效、检测结果可靠的优点，有着较大的应用前景。     

应用RD—PCR方法制备K562细胞表达谱芯片基因探针

目的：收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法：培养K562细胞，抽提其mRNA，反转录为cDNA，应用限制性显示PCR技术（RD－PCR）分离K562细胞不同组别的产物片段，分别行PCR扩增。结果：制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论：RD－PCR方法适合于基因芯片探针的收集。     

基因芯片诊断病毒性乙型、丙型肝炎

基因芯片 ,又称ＤＮＡ芯片 (ＤＮＡｃｈｉｐ)、ＤＮＡ微阵列 (ｍｉｃｒｏａｒ ｒａｙ)。它是近年出现的ＤＮＡ分析技术 ,在基因治疗、基因诊断、基因克隆、基因表达分析等领域有着极为广泛的应用前景。1　基因芯片技术概述基因芯片技术是一种大规模集成的固相杂交 ,其基本原理是核酸分子杂交 ,即依据ＤＮＡ双链碱基互补配对、变性和复性的原理 ,以大量已知序列的寡核苷酸、ｃＤＮＡ或基因片段作探针 ,检测样品中哪些核酸序列与其互补 ,然后通过定性、定量分析得出待测样品的基因序列及表达的信息。与传统基因诊断技术相比 ,ＤＮＡ芯片技术具…     

含人自噬基因hAPG12穿梭载体构建及其在酵母自噬中的作用

目的该研究旨在构建大肠杆菌-酿酒酵母穿梭栽体pESC—URA—EGFP—hAPG12，将构建好的栽体转化到酵母菌内．以此研究hAPG12在酵母自噬过程中的作用。方法从pEGFP-C2-hAPG12中扩增出EGFP—hAPG12融合基因，鉴定正确后定向亚克隆到大肠杆菌一酿酒酵母穿梭载体pESC—URA中，构建载体pESC—URA—EGFP—hAPG12并将其转化到酵母，荧光显微镜下观察，用自噬诱导剂诱导酵母自噬以观察hAPG12在酵母内的表达定位。结果证实EGFP-hAPG12基因已完全正确亚克隆到pESC—URA中，荧光显微镜观察结果证明EGFP—hAPG12融合蛋白在酵母中成功表达，以诱导培养24h的荧光最强。EGFP—hAPG12定位于酵母的自噬体中。结论成功构建了具有报告基因的重组真核表达栽体pESC—LIRA—EGFP—hAPG12；EGFP—hAPG12融合蛋白在酵母中得到表达，hAPG12在酵母自噬体形成过程中起作用。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

鼠疫杆菌F1抗原结构基因caf1在酿酒酵母中的同源重组及初步鉴定

目的研究新型的防治鼠疫的基因疫苗。方法将鼠疫杆菌F1抗原结构基因caf1构建至pHSS6-mTn-3xHA／lacZ转座文库质粒中，将此重组质粒经Not Ⅰ酶切线性化，然后以醋酸锂法转化至酵母细胞中进行同源重组，再以尿嘧啶缺陷型培养基对阳性转化子进行筛选。结果转化子经菌落PCR方法分析鉴定，证明其为重组阳性转化子。结论以同源重组方式构建酿酒酵母表达系统，用以表达鼠疫杆菌F1表面抗原，为经消化道途径实现对鼠疫的基因防治创造条件。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的 探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法 对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA，用巢式PCR外侧下游引物进行反转录，以反转录产物为模板，进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMDl8-T载体后进行测序鉴定。结果 被检样品扩增出特异片段，经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论 反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列，证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

经癌胚抗原重组痘苗病毒转染的树突状细胞体外诱导特异性T细胞免疫

目的研究人癌胚抗原重组痘苗病毒(rV-CEA)转染外周血树突状细胞(DC)后能否在体外诱导CEA特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫。方法将rV-CEA转染外周血单核细胞来源的DC后用于激发同源的T细胞,检测其对T细胞的增殖作用以及对CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性,并与未经rV-CEA转染的DC激发的T细胞进行比较。结果经rV-CEA转染的DC激活的T细胞对CEA分泌性肿瘤细胞具特异性杀伤作用。结论rV-CEA转染的DC可以诱导CEA特异性T细胞活性。