非小细胞肺癌组织SOX4基因突变分析

目的研究不同病理类型和病理分期的非小细胞肺癌组织中SOX4基因序列突变情况,探讨SOX4基因在肺癌发生过程中的作用。方法PCR扩增肺癌及癌旁组织SOX4基因HMG-box,并对经单链构象多态性分析有差异的20例病例进行测序。DNA及氨基酸序列比较利用Clustal和DNAStar软件。结果90例肺癌组织标本中,有18例发生碱基突变。其中,鳞癌有7例,腺癌5例,腺鳞癌混合型6例,对照的癌旁组织中未检测出突变。临床Ⅱ、Ⅲ期的突变率明显高于Ⅰ期。结论SOX4基因突变与肺癌肿瘤的病理类型无关,但与其病理分期有很大关系,提示SOX4基因突变可能与肺癌的发展和转移有某种关系,为探索SOX基因突变与人类肿瘤发生之间的关系提供了分子依据。     

用DNA内在分子电荷来探测DNA

随着生命科学的发展,DNA的标记和检测已经成为关键的瓶颈技术.利用DNA内在的分子电荷,并结合半导体传感器技术,可以对DNA分子电荷状态进行快速检测,为基因诊断开辟全新的技术途径.     

诱导多潜能干细胞

通过病毒载体导入4个外源转录因子Oct4、Sox2、c-Myc、Klf或者Oct4、Sox2、Nanog、Lin28入体细胞,可以诱导产生具有胚胎干细胞特性相似的诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS).iPS在疾病治疗和药物研究等领域具有非常重要的应用前景,但是目前存在诱导效率低以及致肿瘤性等缺点,采用改良方法诱导产生iPS是将来研究的重点.     

重组载体pEGFP-ANG的构建及ANG基因在HUVEC中的表达

目的 :建立血管生成素 (angiogenin ,ANG)基因的真核表达系统。方法 :采用化学合成拼接法 ,获得人ANG全长cDNA并测序 ,构建重组荧光真核细胞表达质粒 pEGFP ANG ,然后经脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。应用荧光显微镜观测及免疫组化染色 ,对转染细胞内 pEGFP ANG的表达进行鉴定。结果 :测序表明 ,编码的氨基酸序列与人ANG完全一致。荧光显微镜下可见转染的HUVEC内发出强绿色荧光。免疫组化检测显示 ,转染的HUVEC中有棕色颗粒。结论 :获得了人ANG的全长编码基因。构建的重组体pEGFP ANG转染HUVEC后 ,可表达人ANG蛋白     

Myc-Max二聚体及其功能调控

Myc是癌基因myc编码的一族调控蛋白,均具有b-HLH-ZIP结构域,其功能依赖于Myc-Max二聚体的形成。Myc-Max二聚体在核内可与具有CACGTG核心序列的靶基因结合,反式激活靶基因的转录。Myc的功能受Myc、Max的相对浓度及其半衰期的影响,新近发现的Mxil、Mad具有Myc类似的结构特征,亦可与Max形成二聚体,但却具有与Myc相拮抗的功能。Max的功能还可被磷酸化所修饰。     

鼠疫诊断芯片的探针制备

目的 探索制备鼠疫诊断芯片特异性探针的新方法。方法 直接采用限制性核酸内切酶Sau3A Ⅰ消化鼠疫耶尔森菌3个致病性质粒，克隆在T载体上，再经巢式PCR扩增制备成打印芯片的探针。结果 该法收集到250条探针用于打印芯片。分别与鼠疫耶尔森菌，同属的假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌杂交，可筛选出杂交信号强阳性的特异点阵。结论 该法简便可行，适于制备鼠疫诊断芯片的探针。     

LRRK2基因G2019S突变帕金森病相关基因的生物信息学分析

目的 从分子水平揭示富亮氨酸重复激酶2（LRRK2)基因G2019S突变帕金森病的发病机制,为临床诊断及治疗提供新思路。 方法 在公共基因芯片数据库（GEO）中下载LRRK2基因G2019S突变帕金森病的相关基因芯片数据（GSE22491）,其中LRRK2(G2019S)突变帕金森病样本10 例,正常控制组样本8 例,利用Qlucore Omics Explorer（QOE）3.0 软件、DAVID、STRING等在线分析软件对LRRK2基因G2019S突变帕金森病差异基因进行生物信息学分析。结果 QOE3.0分析筛选出1752个LRRK2基因G2019S突变帕金森病差异基因,其中上调191个,下调1561个。对其进行生物信息学分析发现,SKP2、RBX1、SKP1、CUL1、CUL4A 等基因以及核糖体信号通路、氧化磷酸化信号通路、蛋白酶体信号通路、白细胞跨内皮迁移信号通路、磷酸戊糖途径信号通路、枸橼酸信号通路、Fcγ受体（FcγR）介导的吞噬通路等在LRRK2基因G2019S突变帕金森病的发生发展中可能起着重要作用。 结论 通过生物信息学分析LRRK2基因G2019S突变帕金森病相关基因芯片数据,提示LRRK2基因G2019S突变帕金森病发病是多种基因、多种分子机制相互作用的结果,对相关分子机制的进一步分析有利于揭示LRRK2基因G2019S突变帕金森病的发病机制。     

不同介质表面寡核苷酸固定化技术的研究

DNA微集阵列已广泛用于DNA测序、药物分析、基因表达等研究领域。在各种介质表面有效地固定DNA已成为该技术发展的瓶颈之一。本文对当前一些主要介质材料和寡核苷酸的固定过程进行综述。     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片,提高检测灵敏性,对Patrick Brown 实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化,然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能,并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果方法改进后芯片表面性能优良:固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论利用共价连接,方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸,解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷,提高了芯片检测的灵敏性。     

男性免疫性避孕疫苗的应用研究

近年来男性免疫性避孕控制生育的研究日益增多.男性免疫避孕的理想目标是在不影响性激素水平、性欲和性功能的基础上研制出一种高效、安全、可逆的避孕疫苗,其基本原理是通过外源性靶抗原抗体中和体内生殖激素的作用,抑制精子发生,进而避孕.研究方法主要从生殖激素(GnRH、FSH、LH及其相应受体)和精子中筛选最为合适的靶抗原用于免疫避孕疫苗的研究,睾酮激素下降明显、抗体滴度小、精子不可逆抑制是目前存在的常见问题.当今选择特异结合靶点抗原以及精子相关靶抗原进行免疫性避孕的方法有效促进了男性避孕疫苗的开发,是有前景的研究重点之一.