荧光交换标记法基因表达芯片的数据挖掘

目的 探讨荧光染料交换标记设计的基因芯片数据挖掘方法,并对低剂量电离辐射影响人成纤维细胞基因表达谱数据进行分析.方法 应用GencSifter在线软件和 Panther 生物学信息数据库,对下载于NCBI的GEO数据库的 8 个样品 GSM(包含4个时间点),选择正确的参数设置上载数据,运用ANOVA方法进行数据挖掘,并对差异表达基因进行功能归类分析.结果 获得203条差异表达基因,合并相同基因名后为176条基因.双向聚类和主成分分析发现,样品的24 h时间点基因表达谱与前3个时间点有显著差异,功能归类分析提示,多个生物通路如细胞周期、核酸代谢、DNA代谢等被显著激活.结论 应用这种方法可以挖掘荧光交换标记的微阵列数据,低剂量电离辐射对人成纤维细胞基因表达有时间累积效应,可能引起DNA损伤、细胞周期阻滞等变化,诱导细胞凋亡.     

糖皮质激素治疗三氯乙烯药疹样皮炎患者外周血淋巴细胞基因表达谱研究

目的探讨三氯乙烯药疹样皮炎在糖皮质激素治疗前后的基因表达谱变化。方法从1例三氯乙烯药疹样皮炎患者糖皮质激素处理前后的外周血中分离淋巴细胞，提取总KNA，合成cKNA并分别用Cy3和Cy5标记，与Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片杂交，研究基因表达谱变化。结果在检测的20173个基因中，筛选出共同差异表达基因1016个，其中上调618个，下调398个，和免疫与防御相关基因52个。结论和免疫与防御相关的52个基因可能为三氯乙烯药疹样皮炎的疾病相关基因。     

自体恶性黑色素瘤抗原激活的树突状细胞体外诱导免疫试验

树突状细胞(dendritic cells,DC)是迄今为止所知的抗原呈递能力最强的抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APC).肿瘤患者因DC免疫功能低下致宿主抗肿瘤免疫无能.研究表明,人外周血单核细胞在体外用粒/巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)及白介素4(IL-4)诱导后,可培养出表达高水平MHCI、MHCII类抗原和CD80、CD86等因子的DC.本实验拟应用黑色素瘤患者外周血单核细胞,经GM-CSF及IL-4诱导后获得DC,再经自体肿瘤细胞冻融物冲击,在体外激活自体T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),观察其体外抗肿瘤作用.     

西尼罗Ⅰ型病毒亚克隆的构建及其鉴定

目的 构建西尼罗病毒基因组的cDNA亚克隆,为西尼罗病毒全长cDNA克隆的研发和应用打下基础.方法 根据基因组中限制性酶切位点的分布设计4对引物,QIAamp RNA抽提试剂盒提取西尼罗病毒培养细胞BHK-21的总RNA,长片段RT-PCR技术扩增目的 基因片段.将目的 基因片段与pMD18-T载体进行连接,转化入感受态细胞E.coli DH5α,进行蓝白斑筛选后得到阳性克隆,将重组质粒进行PCR和测序鉴定.结果 获得的目的 基因片段经PCR和测序结果表明西尼罗病毒功能基因正确地克隆进入载体.结论 成功获得西尼罗Ⅰ型病毒功能基因的cDNA亚克隆,可应用于西尼罗病毒全长cDNA克隆的制备.     

西尼罗I型病毒亚克隆的构建及其鉴定

目的构建西尼罗病毒基因组的cDNA亚克隆，为西尼罗病毒全长cDNA克隆的研发和应用打下基础。方法根据基因组中限制性酶切位点的分布设计4对引物，QIAamp RNA抽提试剂盒提取西尼罗病毒培养细胞BHK-21的总RNA，长片段RT-PCR技术扩增目的基因片段。将目的基因片段与pMD18-T载体进行连接，转化人感受态细胞E.coli DH5α，进行蓝白斑筛选后得到阳性克隆。将重组质粒进行PCR和测序鉴定。结果获得的目的基因片段经PCR和测序结果表明西尼罗病毒功能基因正确地克隆进入载体。结论成功获得西尼罗I型病毒功能基因的cDNA亚克隆，可应用于西尼罗病毒全长cDNA克隆的制备。     

使用GeneSifter对小鼠肺钩虫感染基因表达谱的分析

[目的]从基因水平探索肌萎缩侧索硬化(ALS)其发病机制并发现治疗ALS新靶点. [方法]通过GeneSifter软件对野生型(WT)和重度联合免疫缺陷型(SCID)小鼠肺组织钩虫感染微阵列表达谱进行分析,使用two-way ANOVA统计学方法对数据聚类,并结合 Gene Ontology 和 KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)生物学通路,深入分析具有种系效应517个差异基因(P＜0.001). [结果]显示ALS信号转导通路在两组小鼠间差异有统计学意义(Z＞2),与Th2反应相关多个基因对ALS代谢异常具有保护作用. [结论]筛选出3个特异基因,可作为治疗肌萎缩侧索硬化新候选基因.     

RT-PCR检测CEA分泌性肿瘤患者血中的CEAmRNA

建立一种外周血循环中肿瘤微转移检测的方法。方法：２０例ＣＥＡ分泌性肿瘤患者及８例健康对照,用逆转录ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｒｉｃｐｔｉｏｎ－Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ,简称为ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测血中的ＣＥＡｍＲＮＡ,同时用放免法检测血甭ＣＥＡ水平。     

胚胎植入前遗传学诊断的研究进展

自从1990年首例植入前遗传学诊断(PGD)应用于临床以来，这项技术在多个临床生殖中心迅速的开展起来，对于辅助生殖技术(ART)产生了巨大影响，这主要得益于人类对遗传性疾病认识的深入和分子诊断技术的不断提高，综述了这些遗传学检测技术的新进展，并对存在的问题和发展的前景做了进一步的阐述和展望。     

外源重组基因表达产物亚细胞定位的研究现状

目的：将外源基因通过重组然后在宿主细胞中表达,以研究其功能.资料来源：应用计算机检索Medlinel997-01/2004-12与外源基因重组表达产物亚细胞定位的相关文献,检索词“foreign recombined gene,subcellure location”等分别进行检索提炼,限定文献语种为English.资料选择：就检索到的500余篇资料进行初审,纳入标准：①有关外源基因重组策略.②与表达产物定位检测方法相关.排除标准：文献中重复研究、综述、Meta分析类文章.未排除文章中资料是否应用了随机、对照和盲法.资料提炼：共收集到80余篇关于外源基因重组表达后定位相关的文章.其中研究内容相似的,以近5年内发表在较权威杂志者优先.对符合标准的38篇文献进行分析.资料综合：外源重组基因在宿主细胞中表达后,可以通过多种方法进行亚细胞定位,如报告基因,免疫电镜,免疫荧光技术等,且大规模的外源重组基因亚细胞定位具有重要的意义.结论：因为外源重组基因表达产物的功能与其在宿主细胞中的定位有重要的关系,所以研究其在宿主细胞中的亚细胞定位,对研究外源重组基因表达产物的功能或未知新基因的功能来说有很重要的意义.     

缺血性老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化

背景：神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在神经元的生长、存活、分化、保护神经元的退行性改变及神经损伤的自我保护与修复中具有重要作用，目前NGF保护神经元的分子病理学机制还有许多需要深入探讨的。目的：观察脑缺血老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化。设计：完全随机对照实验研究。地点与材料：本研究的地点为广州军区广州总医院实验科：材料为36只SD大鼠2～2．5年龄，雌雄不限。干预：用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型，将SD大鼠随机分成正常对照组(A组)、假手术组(B组)、缺血30min再灌注6h(C组)、12h(D组)、24h(E组)、48h(F组)、7d(G组)和14d(H组)，用免疫组织化学ABC染色法检测部分脑区神经元及小脑NGF的表达。在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化。主要观察指标：各组神经元NGF表达定性及定量观察。结果：除A、B组外，各组顶叶皮质神经元均有NGF表达，其中E组和G组中量表达，神经元数量分别为(58．4&;#177;9．18)mm^2和(56．2&;#177;10．87)mm^2；除A组、B组、F组和H组外各组海马均有少量表达，神经元数量C组为(28．8&;#177;6．42)mm^2、D组(30．4&;#177;12．12)mm^2、E组(24．2&;#177;5．18)mm^2、G组(15．6&;#177;4．39)mm^2；小脑均没有表达；再灌注超过48h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重，顶叶皮质神经元轻度水肿；结论：老年大鼠在受到缺血性脑损伤时，内源性NGF在大脑皮质和海马有部分表达，小脑始终没有表达。内源性NGF对脑组织具有一定的保护作用，早期注射外源性NGF可能对脑组织损伤后修复具有重要意义。