基因芯片用于鼠疫快速诊断的初步研究

目的将基因芯片技术用于鼠疫的快速诊断。方法分别采用RD标记技术对鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌的DNA样品进行标记,与芯片上的探针进行杂交。结果芯片能将鼠疫耶尔森菌与同属的2种致病性细菌鉴别开。结论基因芯片是一种有效的诊断工具,可用于鼠疫的诊断。     

两种微生物学等级老龄Wistar大鼠血清生化值比较

目的 探讨普通级、SPF级老龄Wistar大鼠血清生化值的差异。方法 用Coulter-JT全自动生化检测仪检测血清生化值。结果 在老年SPF级Wistar大鼠的雌性与雄性之间,谷丙酶、总蛋白、碱性磷酸酶、总胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、铁、磷、血糖、尿酸、低密度脂蛋白差异非常显著(P<0.01),白蛋白、乳酸脱氢酶、载脂蛋白B差异显著(P<0.05)。老年SPF级雄性Wistar大鼠与老年普通级雄性Wistar大鼠间的总蛋白、白蛋白、白球比、总胆固醇、甘油三酯、血糖、载脂蛋白Al、载脂蛋白B、尿酸、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、谷草酶差异非常显著(P<0.01),谷丙酶、铁、镁差异显著(P<0.05)。老年SPF级雌性Wistar大鼠与普通级雌性Wistar大鼠间的谷丙酶、总蛋白、白蛋白、白球比、碱性磷酸酶、甘油三酯、尿素氮、肌酐、铁、载脂蛋白Al、载脂蛋白B、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、胆汁酸差异非常显著(P<0.01),镁含量差异显著(P<0.05)。结论 微生物学等级因素对Wistar大鼠的血清生化值有影响。     

解毒利肺口服液药效学实验研究

目的对中药复方解毒利肺口服液进行药理学研究.方法运用中药药理学实验方法,对解毒利肺口服液的抗炎、止咳、平喘、祛痰等作用进行药理学研究.结果解毒利肺口服液不同剂量给药后,对止咳、平喘、祛痰、都有明显的作用,有一定的抗炎作用,且效果优于对照组药物.结论解毒利肺口服液是治疗呼吸道感染的较好的中药新制剂.     

解毒利肺口服液体外抑菌、抗病毒的实验研究

目的：为了观察解毒利肺口服液(以下简称JFY)在体外抑制细菌和抗病毒的作用。方法：采用体外抑菌活性试验和细胞培养技术,观察了JFY对9种细菌和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果：实验结果显示JFY对9种致病菌和RSV在体外具有不同程度的抑制和杀灭作用。结论：JFY在体外对9种致病菌和RSV具有明显的抑制作用。     

一种新的基因芯片检测荧光标记技术:通用引物U2联合标记法

目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用。     

不同分化程度卵巢癌细胞中胚胎干细胞相关通路的基因集富集分析

背景:近年来一些研究发现肿瘤细胞具有与干细胞类似的特征,因此,控制干细胞功能的某些基因调控网络,可能也在某些f肿瘤中同样发挥作用.目的:观察不同分化程度卵巢癌的分子特征,获得与胚胎干细胞相关基因的表达情况.方法:从美国国立生物信息中心(NCBI)共享数据库GEO下载原始基因芯片文件,登录号为GSE2109,选取卵巢癌样本作为研究材料.去除临床指标缺失的样本,按照组织学分级将卵巢癌样本分为高分化和低分化两组.原始数据经dChip进行质量检验和标准化,获得基因表达的矩阵.收集胚胎干细胞相关的基因集、生物学过程和KEGG通路在不同分化的卵巢癌中的富集情况,用GSEA进行基因集富集分析. 结果与结论:选取了13个与胚胎干细胞相关的基因集,低分化的卵巢癌细胞中有9个基因集上调,PR02靶点相关的4个基因集下调,说明与胚胎干细胞相关的基因集大多在低分化的卵巢癌细胞中上调.并且在低分化卵巢癌细胞显著上调的都是与细胞周期、细胞分裂、DNA复制等与增殖相关的通路.基因表达谱分析表明低分化的卵巢癌与胚胎干细胞具有相似的分子特征,这可以为卵巢癌的早期诊断和治疗提供新的思路.     

shRNA干扰A549细胞KIAA0101基因表达的初步研究

目的探讨小发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒介导的RNA干扰技术对人肺腺癌A549细胞KIAA0101基因表达的抑制作用。方法应用pSIREN-RetroQ载体构建KIAA0101基因shRNA重组质粒,经脂质体法导入A549细胞,分别设置为空白对照组、阴性对照组、干扰A组和干扰B组,采用实时定量PCR法和免疫印迹(Western blot)法检测检测转染后细胞KIAA0101基因mRNA与表达蛋白质的变化,四唑盐(MTT)比色法测定各组干扰细胞活性。结果成功构建KIAA0101基因shRNA重组质粒,相对阴性对照组与空白对照组,干扰B组KIAA0101的mRNA与蛋白质表达水平均下降达70%(P≤0.05)以上,MTT法结果显示降低KIAA0101的表达可抑制肺癌细胞的生长活性。结论shRNA干扰质粒可以显著降低细胞内KIAA0101mRNA与蛋白质的表达水平,并且抑制癌细胞的生长活性,为该基因在肺癌中的深入研究奠定了基础。     

不同分化程度卵巢癌细胞中胚胎干细胞相关通路的基因集富集分析

背景：近年来一些研究发现肿瘤细胞具有与干细胞类似的特征,因此,控制干细胞功能的某些基因调控网络,可能也在某些肿瘤中同样发挥作用。 目的：观察不同分化程度卵巢癌的分子特征,获得与胚胎干细胞相关基因的表达情况。 方法：从美国国立生物信息中心(NCBI)共享数据库GEO下载原始基因芯片文件,登录号为GSE2109,选取卵巢癌样本作为研究材料。去除临床指标缺失的样本,按照组织学分级将卵巢癌样本分为高分化和低分化两组。原始数据经dChip进行质量检验和标准化,获得基因表达的矩阵。收集胚胎干细胞相关的基因集、生物学过程和KEGG通路在不同分化的卵巢癌中的富集情况,用GSEA进行基因集富集分析。 结果与结论：选取了13个与胚胎干细胞相关的基因集,低分化的卵巢癌细胞中有9个基因集上调,PRC2靶点相关的4个基因集下调,说明与胚胎干细胞相关的基因集大多在低分化的卵巢癌细胞中上调。并且在低分化卵巢癌细胞显著上调的都是与细胞周期、细胞分裂、DNA复制等与增殖相关的通路。基因表达谱分析表明低分化的卵巢癌与胚胎干细胞具有相似的分子特征,这可以为卵巢癌的早期诊断和治疗提供新的思路。     

APC11基因真核表达质粒构建及鉴定

目的 克隆扩增APC11开放阅读框基因片段,构建其真核表达重组质粒,为后续研究其功能做准备.方法 按照GenBank中人APC11序列设计引物,以HeLa细胞cDNA为模板,扩增出基因片段.该片段与真核表达载体pEGFP-C1连接,得到的重组质粒经双酶切和测序鉴定后用Western印迹检验表达.结果 扩增片段长度为285 bp,重组真核表达质粒经双酶切鉴定后测序鉴定正确.Western印迹证实pEGFP-C1-APC11在真核细胞内表达.结论 成功克隆了APC11基因并构建了pEGFP-C1-APC11真核表达重组质粒,Western印迹证实其表达良好,对该基因功能的深入研究打下了坚实基础.     

人瘦素基因的克隆及在酿酒酵母中的表达和生物信息学分析

目的构建人瘦素基因和蛋白转导肽Tat基因的融合表达载体,转入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,并对融合瘦素蛋白进行生物信息学分析。方法脂肪组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板扩增瘦素基因,构建重组质粒pYES2-Tat-leptin,转入酿酒酵母表达菌株INVSc1诱导表达Tat-leptin融合蛋白,利用相关在线软件对融合瘦素蛋白相关的生物学功能进行分析。结果经SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定,酿酒酵母成功表达融合蛋白Tat-leptin。经生物信息学分析后获得了融合瘦素蛋白的相关生物学特性。结论 Tat-leptin融合蛋白在酿酒酵母中成功表达,并对融合瘦素蛋白的生物学特征进行了预测,为消化道基因治疗肥胖的研究奠定了基础。