人尿道高分化鳞癌系HUS-98的建立及生物学特性

目的 以尿道高分化鳞状上皮转移癌患者腹水为材料，建立体外培养的人尿道鳞癌细胞系HUS-98。方法 按照细胞系建立标准检测细胞的一系列生物学特性，包括光镜、电镜观察，生长曲线、染色体数目、裸鼠致瘤性、致瘤性病毒基因等。结果 细胞维持培养15个月，传120代，生长稳定。细胞群体倍增时间52.3h。细胞呈贴壁生长，趋向复层，无接触抑制。光镜和电镜检查均显示高分化鳞癌特征性结构。染色体数目分布 34～120之间，主流范围在62～72之间（57%）。PCR检测乳头瘤病毒12，18型、疱疹病毒Ⅱ型、EB病毒和巨细胞病毒均阴性；乙肝病毒基因阳性。三次裸鼠移植试验均未致瘤。结论 该细胞系的建立将有助于尿道肿瘤的生物学特性的研究。     

用噬菌体展示技术分析G-CSF受体的配体结合位点

目的：分析粒细胞集落刺激因子（G－CSF）受体中参与配体结合的关键性氨基酸残基。方法：以G－CSF为靶分子，对随机噬菌体文库进行筛选，阳性噬菌体克隆进行序列测定并与G－CSF受体进行同源性比较和分析。结果：得到一个保守性的序列模式SXXRVX，其中第4位氨基酸是高度保守的Arg，表明Arg在与G－CSF的结合中可能起重要作用。将此模式与G－CSF受体进行同源性比较和序列分析，发现G－CSF受体中第288位的Arg也是参与配体结合的关键性氨基酸。结论：模拟小肽和G－CSF 体中高度保守的Arg的存在，说明Arg在G－CSF受体与其配体的结合中起重要作用。     

酵母突变株的筛选

目的：建立快速、简便的筛选酵母突变株的方法。方法：利用同源重组技术，通过转座子上的LacZ报告基因，从酵母基因组文库中，将发生突变的菌株进行检测，从而筛选出酵母突变株。结果：在X－gal培养基上出现蓝色菌溶，即为所需的阳性菌落。结论：利用同源重组技术，初步筛选出所需的酵母突变株，为新的功能性基因组的研究和发展，为基因药物的研究与开发构建平台。     

提高消化道基因治疗转化效率的途径

消化道基因治疗是一种以口服的方式进行基因治疗的方法 ,通过口服含有治疗性目的基因的物质 ,利用消化道吸收目的基因 ,使目的基因到达机体的特定部位 ,纠正出错基因或者表达分泌出治疗性蛋白 ,从而达到治疗或预防疾病的目的。 1 994年郑文岭等[1] 通过对中药作用机制的分子生物学意义上的分析论证 ,以初步的实验证实了消化道转基因方式的存在 ,提出在消化道进行体细胞基因治疗的设想。他们所提出的消化道转基因的巧妙过程 ,为基因治疗提供一种更为简便易行、既符合生理特性又疗效确切的全新模式。　　消化道基因治疗既可以提供局部治疗 ,也…     

泛素启动子的研究进展

泛素系统广泛存在于真核生物 ,对调节细胞内蛋白周转 ,参与细胞多种生命过程有重要作用 ,其基因家族中的泛素启动子更是在增强基因表达的长期性 ,稳定性等方面有显著功效。人源性泛素启动子作为一种非病毒性的强启动子 ,将在基因治疗中起到举足轻重的作用。因而 ,对它的研究具有很强的现实意义。1　泛素启动子的结构泛素 (ubiquitin ,Ub)是一种高度保守的小分子蛋白 ,由 76个氨基酸组成 ,广泛存在于真核细胞。泛素可以作为一种大分子标记物共价结合并标记某种蛋白 ,再通过泛素 -蛋白水解酶复合通路降解该蛋白。人源性泛素基因家族包括UbA …     

一种以GFP为报告基因的酿酒酵母表达载体构建的新方法

利用通用载体质粒融合系统UPS（univector plasmid-fusion system)构建出了以GFP（绿色荧光蛋白）为报告基因的酵母表达载体。经PCR，电泳，测序等手段证明了构建的准确性。同时验证了UPS的高效性及简便性。     

炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针的制备

目的 快速制备炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针。方法 根据PubMed上公布的炭疽杆菌保护性抗原的DNA序列设计引物，扩增保护性抗原基因。利用酶切、AT克隆方法快速分析筛选出保护性抗原基因片段的重组子，从而制备成芯片探针。DNA自动分析仪对克隆片段进行序列测定，生物信息学软件对其基因序列进行分析。结果根据炭疽杆菌保护性抗原设计的引物，可以扩增出长2205bp的保护性抗原基因，经酶切、AT克隆方法筛选出约7个长度不一的片段，对其片段进行序列测定并进行Blast序列比对得知这些片段均属于炭疽杆菌保护性抗原基因。结论 利用PCR扩增产物并结合酶切、AT克隆方法可以快速、简便地制备基因芯片探针。     

N-ras基因在K562细胞中的表达研究

目的探讨N-ras基因突变及表达水平与慢性粒细胞白血病发病的关系。方法以慢粒细胞株K562细胞为研究对象，采用RT-PCR和直接测序的方法对N-ras的表达水平及突变进行检测。结果RT-PCR结果示N-ras基因在K562细胞中表达升高，直接测序结果表明N-ras基因在K562细胞中不存在突变。结论N-ras基因在K562细胞中高表达，而其高表达机制与突变无关。     

颞叶癫痫相关基因的生物信息学分析

目的从分子水平揭示癫痫的发病机制,为癫痫的基础研究和临床治疗提供新思路。方法从基因芯片公共数据库GEO中下载癫痫相关基因芯片数据,利用String、KEGG、Panther等在线分析软件对差异表达基因进行生物信息学分析。结果在71个差异表达基因所编码的蛋白中,有51个存在蛋白与蛋白的相互作用关系;其涉及的主要生物学通路包括刺激神经的配体-受体相互作用通路、促分裂原活化蛋白激酶信号通路、钙信号通路等。结论通过生物信息学分析癫痫相关基因芯片数据,提示癫痫发病是多种基因作用的结果,对相关基因的进一步分析有利于揭示癫痫的发病机制。