不同介质表面寡核苷酸固定化技术的研究

DNA微集阵列已广泛用于DNA测序、药物分析、基因表达等研究领域。在各种介质表面有效地固定DNA已成为该技术发展的瓶颈之一。本对当前一些主要介质材料和寡核苷酸的固定过程进行综述。     

鼠疫耶尔森菌基因组研究进展

鼠疫耶尔森菌的全基因组序列已测定完成 ,在染色体上有 4 0 0 0多个编码序列和 14 9个假基因 ,并含有大量的插入序列 ,3个毒性质粒上也含有诸多与致病性有关的基因。本文主要就鼠疫耶尔森菌的染色体及质粒p YV/ p CD1、p Fra/ p MT1和 PST/ p PCP1的基因结构、组成特征和已知的毒性基因定位等方面的研究作一综述     

血管生成抑制素canstatin的新发现

Ｃａｎｓｔａｔｉｎ是 2 0 0 0年 1月由Ｋａｍｐｈａｕｓ等[1] 发现的一种新的血管生成抑制素。它具有较强的抑制血管内皮细胞增殖、迁移及诱导内皮细胞凋亡 ,抑制肿瘤的作用 ,因此受到广泛关注。1　Ｃａｎｓｔａｔｉｎ的发现和命名研究表明 ,实体肿瘤生长和转移必需新生血管的形成[2 ] ,血管基底膜胶原的合成和沉积对血管形成和存活至关重要[3] 。血管基底膜由一系列细胞外基质蛋白构成 ,如ＩＶ型胶原层连蛋白、硫酸肝素糖蛋白、纤连蛋白等[4 ] 。其中以ＩＶ型胶原含量最为丰富。ＩＶ型胶原可促进细胞粘附、迁移、分化、生长。因此 ,ＩＶ型…     

鼠疫耶尔森氏菌F1抗原在酿酒酵母中的表达及鉴定

目的：构建含鼠疫杆菌F1抗原结构基因caf1的重组载体，并在酿酒酵母中表达。方法：将鼠疫杆菌的F1抗原结构基因caf1插入到pHSS6-mTn-3xHA／locz质粒中，构建重组载体pHSS6-mTn-3xHA／locz—caf1。将重组载体经NotⅠ酶切后，以醋酸锂法转化酿酒酵母，将转化的酿酒酵母接种于SCUra平板上筛选阳性克隆，表达产物用SDS—PAGE和Western blot进行鉴定。结果：经SDS—PAGE鉴定和Western blot分析表明，转化的酿酒酵母可表达鼠疫杆菌F1表面抗原蛋白。结论：成功地构建了重组载体pHSS6-mTn-3xHA／lacZ—caf1，并在酿酒酵母中稳定表达鼠疫杆菌F1表面抗原，为制备可经消化道途径免疫的鼠疫杆菌基因疫苗奠定了基础。     

两种冻存方法在肿瘤微转移检测中的运用

目的 建立科学的外周血有核细胞的冻存方法,为肿瘤的微转移逆转录ＰＣＲ检测打好基础。方法 分离１５例ＣＥＡ分泌性肿瘤患者外周血有核细胞,分别用两种方法冻存,设为两组。对细胞进行总结ＲＮＡ的抽提,测定ＲＮＡ ＯＤ值并行１％琼脂糖凝胶电泳,进一步逆转录ＰＣＲ反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析最终产物。结果 经两种方法冻存的细胞,其总ＲＮＡ ＯＤ值差异无显著性,电泳均见竹节样带。两组逆转录ＰＣＲ结果一致,阳性率     

融合基因Tat-HPV16L1的克隆及其在酿酒酵母中的表达

目的 构建人乳头瘤病毒16型L1基因和蛋白转导肽的Tat基因的融合表达载体,导人酿酒酵母表达系统进行诱导表达,为口服基因疫苗的制备打下基础.方法 以pBR322-HPV16质粒为模板扩增L1基因,与酿酒酵母表达载体pYES2连接.重组质粒再与自行设计的蛋白转导功能片段Tat连接,经测序鉴定后转入酿酒酵母表达菌株INVSc1诱导表达Tat-HPV16L1融合蛋白.结果 融合基因Tat-HPV16L1测序结果与预期完全符合,经过半乳糖诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和Western blotting分析.结果 表明诱导表达成功.结论 成功构建和表达了融合表达载体pYES2-Tat-HPV16L1,为制备以酿酒酵母为运送载体的口服人乳头瘤病毒疫苗打下基础.     

探针的纯化与否对基因芯片重复利用的影响

目的观察探针的纯度对基因芯片重复利用的影响。方法将探针分为未纯化、纯化两部分并分别与基因芯片杂交,扫描芯片后,用探针剥脱液洗涤芯片;同等条件成像后,进行下一轮杂交。结果未纯化的探针杂交结果背景高,阳性信号界限不清楚;经探针剥脱液洗涤后,仍留有较高强度的背景和原与靶基因片段杂交的阳性信号,即使洗脱4次后,仍有背景和阳性信号存在。纯化的探针杂交结果显示背景低,一般经2次探针剥脱液洗过后,可以完全去除信号并进行下一轮杂交。结论未纯化的探针与基因芯片杂交后,此芯片不能应用于下一轮的杂交;而纯化的探针杂交后,芯片可以再次利用。由此说明探针的纯化是基因芯片重复利用的前提条件。     

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的 应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段，并进行克隆、测序分析，制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法 利用Olig06．4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物，纯化PCR扩增产物，扩增后的产物克隆至pMDl8-T载体并进行快速鉴定，提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果 获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明，所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论 利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。     

人生长激素基因在酿酒酵母中的同源重组及初步鉴定

目的 :将人生长激素基因构建至pHSS6 mTn 3×HA/lacZ转座文库载体中 ,利用酿酒酵母同源重组稳定高效表达人生长激素。　方法 :通过两步PCR获得带有信号肽的目的基因 ,插入到文库载体的Sse8387I位点中 ,NotI酶切 ,酵母同源重组 ,SC Ura筛选 ,酵母菌落PCR及lacZ基因表达初步鉴定阳性重组子。　结果 :酵母菌落PCR初步鉴定 ,筛选出目的基因正确插入的重组子 ,其中两株有lacZ基因高表达。　结论 :对阳性重组子进行lacZ显色反应 ,筛选出可高水平表达x gal的菌株 ,以此推测重组位点前有强启动子 ,为目的基因的稳定高效表达奠定基础。