HIV检测长寡核苷酸芯片的研制和临床初步应用

目的 研制人类免疫缺陷病毒(HIV)快速筛查的寡核苷酸芯片并初步应用于临床。方法 以HIV2个基因型(包括9个亚型)的32株典型性代表株和HIV-2特有的vpx序列的保守序列为靶序列,设计长寡核苷酸探针,并制备成Oligo芯片。样品经随机特异性引物PCR标记后与芯片杂交,PCR产物同时进行测序分析。结果 1例HIV患者芯片杂交结果阳性,20名健康对照血清均为阴性。阳性标本的序列分析表明,芯片杂交结果符合测序的分型结果。结论 此芯片可初步用于检测血清HIV RNA,并对HIV基因(亚)型进行分析。     

CML患者骨髓单个核细胞基因表达谱分析

目的 探讨慢性髓细胞性白血病(CML)的基因表达变化。方法 分别从正常人和CML患者骨髓样品中抽取骨髓单个核细胞,分离出cDNA片段,然后再逆转录成cRNA并标记后,与人的全基因组表达谱芯片杂交,ABI 1700芯片分析系统进行分析基因表达谱的差异。结果 总共发现差异表达的基因有6706个,其中与CML相关的差异基因有75个(上调19个,下调56个)。结论 全基因组寡核苷酸基因芯片在分析基因表达谱差异研究中具有广泛的应用价值。     

环介导等温扩增技术及其在病原微生物检测中的应用

 环介导等温扩增(LAMP)技术是近年发展起来的一项新的快速核酸恒温扩增技术,具有高效、快速、特异、易检测、易操作等特点,自面世以来被科学家认为是能替代常规PCR的一项扩增技术,非常适用于现场检测和基层检测。本文就LAMP技术的原理、特点、进展及其在病原微生物检测中的应用进行了简要的概述。     

基因诊断技术的临床应用进展

 近年来,基因诊断技术取得前所未有的进步,随着该技术在临床检测中的推广、应用,基因诊断技术为我们早期发现肿瘤以及其他遗传性疾病带来曙光。本文拟从基因诊断中常用的分子生物学技术及其在临床中的应用做一总结。     

FBXO6基因真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达

目的 构建F盒蛋白6(FBXO6)基因真核表达载体.方法 采用PCR方法合成含有EcoR Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切位点的FBXO6 cDNA全长.分别构建载体pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6,采用菌落PCR、双酶切鉴定以及测序证实cDNA片段大小和序列正确.将载体pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6分别转染HEK293T细胞,Western blot法检测FBXO6蛋白的表达.结果 pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6包含大小、序列正确的FBXO6片段;FBXO6蛋白在转染pEGFP-C1-FBXO6的293T细胞中高表达;在转染pEGFP-C1-anti-FBXO6的HEK293T细胞中表达降低.结论 成功构建FBXO6基因正义真核表达载体pEGFP-C1-FBXO6和反义真核表达载体pEGFP-C1-anti-FBXO6.     

PBL教学法在基因诊断及基因治疗教学中的应用?

分子生物学是现代医学的重要组成部分,其中基因诊断和基因治疗在临床医学中的应用越来越广泛。在这两个专题的教学中,如何帮助学生综合平衡分子生物学基础知识和前沿进展并加以灵活应用显得尤为重要。文章以遗传病“苯丙酮尿症”为典型案例,采用以问题为导向的教学方法( problem-based learning,PBL),综合了基因学、遗传学、氨基酸代谢、基因诊断、基因治疗等各章节的相关知识。通过结合具体案例,培养锻炼了学生自主思考和解决临床问题的能力,充分调动其学习积极性,同时对基因诊断和基因治疗等前沿技术加以掌握。     

柴胡皂甙d诱导K562细胞凋亡的差异基因筛选

目的 筛选柴胡皂甙d(SSd)诱导人白血病K562细胞凋亡的差异基因,为白血病的治疗奠定基础.方法 用Agilent Human 1A寡核苷酸芯片检测SSd处理前后K562细胞的基因表达谱变化,并筛选SSd诱导K562细胞凋亡的相关基因.结果 359个基因发生显著性变化,其中表达上调基因138个,表达下调基因221个.结论 SSd诱导K562细胞凋亡是一个多基因参与的过程,本文筛选出的差异基因有望成为人白血病治疗的靶基因.     

基于生物信息学的hsa-miR-32靶基因预测与功能分析

目的 利用生物信息学方法,预测hsa-miR-32的靶基因并分析其功能,为深入研究其生物学功能提供指导和思路。方法 利用miRBase数据库获取并分析不同物种的miR-32序列特征;从公共GEO（gene expression omnibus,GEO）数据库中下载不同疾病相关的microRNA表达谱芯片数据,通过miRGator v3.0在线工具和Qlucore Omics Explorer 3.0软件分析hsa-miR-32在不同疾病组织中表达情况;并用PicTar、DIANA-microT-CDS 7.0、PITA及miRanda等方法预测hsa-miR-32靶基因,对获得的靶基因集合分别进行功能富集分析（gene ontology analysis）和生物通路富集分析（pathway enrichment analysis）。结果 miR-32在不同物种间高度保守。与癌旁正常组织相比,hsa-miR-32在子宫癌、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌等多种癌组织中表达异常（均有P<0.05）。包括已被证实的靶基因,共得到168个候选基因,这些靶基因主要参与调控基因表达、细胞增殖、信号转导、细胞死亡等生物学过程（均有P<0.05）,涉及小细胞肺癌、前列腺癌、胶质瘤、黑素瘤等疾病相关通路,以及p53等肿瘤相关信号通路和细胞周期等信号转导通路（均有P<0.05）。结论 hsa-miR-32功能广泛,与癌症的发生、发展密切相关。     

钙载体A_(23187)快速诱导人外周血单核细胞成树突状细胞

 目的　探讨钙载体 (calciumionophore ,CI)A2 3 187对正常人外周血单核细胞来源的树突状细胞(Dendriticcell,DC)形态、表面分子表达及免疫功能的影响。方法　分离健康献血者外周血单核细胞 ,分别加入 :重组人粒 /单集落刺激因子 (rhGM CSF) 10 0ng/ml、rhGM CSF 10 0ng/ml +IL 4 5 0ng/ml、rhGM CSF +A2 3 187(钙载体 ,CI)各 10 0ng/ml。体外培养 4 0h后 ,于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志、MTT比色法检测上述细胞对同种异体T细胞的刺激增殖作用。结果　外周血单核细胞在GM CSF +A2 3 187各 10 0ng/ml的条件下培养 4 0h ,就可看到典型的DC形态 ,其表面单核细胞的特征性标志CD14分子表达减少 ,HLA DR、CD80、CD86及CD83分子的表达均明显增高 ,且具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力。结论　外周血单核细胞在钙载体A2 3 187及GM CSF的共同作用下 ,4 0h就能获得成熟的DC     

芪参益气方对心肌梗死治疗作用分子机制的生物信息分析

目的：运用生物信息学分析工具,从基因的角度阐述芪参益气方对心肌梗死治疗作用的分子机制。方法对基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)进行大数据分析,采用酷核组学分析器(Qlucore Omics Explorer, QOE)进行差异基因分析,筛选出治疗作用中的功效基因分子;采用可视化基因注释系统数据库(Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery online Gene Annotation system, DAVID)进行基因功能富集分析,确定所筛选基因在生物进程中的功能;采用基因/蛋白质相互作用检索数据库(Gene/protein interaction database, STRING)进行分析,确定关键基因在治疗过程中分子机制网络图。结果经分析,推论出芪参益气方在对心肌梗死治疗过程中主要上调了包括NFIL3、ARNTL、DBP、FGD4等特殊基因和基因受体基因(NR1D1、NR1D2)的表达,使得生物节律基因、特定结合基因(BHLHE40/41)得到调控。结论基因层面上,芪参益气方可调控细胞再生、炎症抵抗、酶活性等相关基因的表达,使心血管和心脏代谢相关的心肌梗死得到治疗。