pTn5GFP转座质粒用于耐药鲍曼不动杆菌生物被膜相关基因的研究

【立论依据】 鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是一种革兰氏阴性球杆菌,是引起院内感染的主要菌种之一,多重耐药和泛耐药AB菌株感染更是给临床治疗带来极大的困难。生物被膜形成能力与AB耐药以及致病性密切相关。寻找AB生物被膜形成的关键基因对于AB相关疾病的预防和控制具有重要意义。转座子是一段特殊的DNA片段,在转座酶的作用下,可随机插入细菌基因组,使插入基因失活,改变相关表型。应用转座子随机突变策略可以找出特定表型对应的基因,但是以传统的抗生素抗性基因作为报告基因显然不能满足对多重耐药菌株的研究。 【设计思路】 绿色荧光蛋白(GFP)因为不需要单独加入底物并且易于观察而被广泛用来标记生物分子或细胞。已有研究表明,GFP基因插入细菌的染色体上后,可以有效地对细菌进行标记。基于转座质粒以及GFP的特点,本研究拟构建具有Tn5转座子和GFP基因的pTn5GFP转座质粒,利用GFP作为报告基因,构建临床分离的多重耐药AB突变文库,进而筛选出AB生物被膜形成的关键基因,并对其功能进行研究。 【实验内容】 以pGFPmut3.1质粒为模板,扩增GFP基因,将其连接入含有Tn5转座子的pRL27质粒,构建pTn5GFP转座质粒。利用该质粒对多重耐药AB菌株进行转座子突变,构造突变文库。对突变株的生物被膜情况进行分析,确定转座子插入位点,找出生物被膜形成的关键基因,并对其功能进行研究。 【材料】 临床多重耐药AB两株,R005和R036,自北京大学人民医院获得。常用工具菌E.coli CC118λπ和E.coli DH5α。pRL27和pGFPmut3.1质粒由原实验室毕业研究生提供。 【可行性】 已成功构建了pTn5GFP转座质粒,该质粒在容纳菌株E.coli CC118λπ具有绿色荧光表型,并已通过预实验初步确定了两株多重耐药AB生物被膜形成能力和最适实验条件。 【创新性】 本研究将GFP报告基因的便捷性以及转座质粒的转座性结合起来,有效解决了因耐药性而无法对泛耐药菌株构建突变文库的问题,结果直观,易于筛选,可行性高。     

穿心莲内酯包合物微针的物理性状及肺靶向性研究

目的 制备穿心莲内酯包合物微针,评价其经皮给药的药物代谢动力学（简称药动学）特点及其肺靶向性。方法 采用微模塑法制备微针,以针体形态特征、机械强度和皮肤穿刺性能为指标,考察微针的物理性状;将72只大鼠分为对照组（灌胃穿心莲内酯滴丸溶液）和微针组（微针经皮给药）,测定血及肺组织中的药物浓度,计算药动学参数并比较,计算肺相对靶向效率。结果 微针呈圆锥形,针体均匀且表面平整,机械强度及皮肤穿刺性能良好。与对照组比较,微针组的半衰期缩短55.10%,达峰时间缩短20.00%,峰浓度增加633.85%,且药-时曲线下面积明显增大,药物平均驻留时间明显延长,肺相对靶向效率为20.46。结论 穿心莲内酯包合物微针具有足够的机械强度和皮肤穿刺性能,在皮肤中无蓄积,起效快,且肺靶向性良好,相对生物利用度明显高于口服穿心莲内酯滴丸。     

护士共情能力及其影响因素的调查

目的了解护士共情能力现状,探讨可能对共情能力有影响的因素,为护理管理者制定激励措施和管理方案提供科学依据。方法采取方便抽样方法抽取哈尔滨市9所医院439名护士,采用一般资料调查表、杰弗逊共情量表中文版来进行调查。结果不同医院等级、学历的护士共情能力的差异有统计学意义（P〈0．05）;不同年龄、职称、护龄、婚姻的护士共情能力的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论护士共情能力受多个因素的影响。提示护理管理者应对护士有针对性的进行管理,以提高护士的共情能力水平。     

当前形势下《医学微生物学》课程教学内容的与时俱进

本研究基于《医学微生物学》课程教学内容更新这一关键,以新形势下传染病疾病谱的变化和病原微生物感染模式的改变为切入点,配合实验课教学内容的整合和教材建设,将教学内容的与时俱进作为课程改革的核心,构建该课程新体系,充分发挥教学内容和教学过程在学生获得知识、培养能力中的作用,最终实现服务于社会的教学目的。     

不同护龄护士职业压力的调查

Objective To investigate the present situation of occupational stress and to compare occupational stress among nurses of different years of work experience. Methods 234 subjects were enrolled by using convenience sampling method. Research instruments used in this study were demographic questionnaire and the Nurse Working Pressure Test Table. SPSS version 13.0 was used for data analysis. Results The level of the overall occupational stress among nurses was moderate. The five subscales of occupational stress in descending order were workload and time management, professional and career issues, caring for and interaction with patients, problems with resource and working environment, interpersonal relationships and management issues. There was no significant difference of occupational stress by subscales among nurses of different years of work experience (P ＞ 0.05) while there was significant difference of the overall occupational stress level (P <0. 01). Conclusions Years of work experience affect overall occupational stress of nurses. Nursing managers should pay more attention to satisfaction of nurses and improve their mental health so as to increase their work initiative and level of nursing service.     

当前形势下《医学微生物学》课程教学内容的与时俱进

本研究基于<医学微生物学>课程教学内容更新这一关键,以新形势下传染病疾病谱的变化和病原微生物感染模式的改变为切入点,配合实验课教学内容的整合和教材建设,将教学内容的与时俱进作为课程改革的核心,构建该课程新体系,充分发挥教学内容和教学过程在学生获得知识、培养能力中的作用,最终实现服务于社会的教学目的.     

不同护龄护士职业压力的调查

目的了解护士职业压力的现状,比较不同护龄护士职业压力的差异,为改善护理管理提供依据。方法采用方便抽样的方法抽取哈尔滨市某所三级甲等医院在职临床护士共234名,采用一般情况调查表、护士工作压力源量表收集资料。应用SPSS13．0统计软件进行数据处理。结果护士总体工作压力处于中度水平,工作压力各维度得分依平均值降序排列依次为工作量及时间分配、护理专业及工作、患者护理、工作环境及资源、管理及人际关系。不同护龄护士各维度的工作压力源比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但总体工作压力源比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论总体职业压力受护龄的影响。护理管理者应重视提高在职护士对工作的满意程度,对护士应有针对性的进行管理,将护士压力控制在最佳水平,保持护士的身心健康,进而提高她们的工作积极性和护理服务水平。     

胃癌相关幽门螺杆菌蛋白图谱特征初步分析

目的：寻找幽门螺杆菌(Hp)与胃癌相关蛋白。方法：利用双向电泳分离Hp的全菌蛋白，应用ImageMaster2Dv3．1软件对3株分离自胃癌患者的Hp菌株、1株胃癌动物模型菌株及9株分离自非胃癌患者的Hp菌株的蛋白图谱进行比较，对目的蛋白进行基质辅助激光解析及电离飞行时间质谱分析，应用Mascot软件进行蛋白搜库。结果：发现3种蛋白可能与胃癌相关，经肽指纹图谱鉴定，一种为配基神经氨酸胞苷酰基转移酶，其Mowse分值为79，序列覆盖率为32％，另两种蛋白在现有的质谱库中无明确匹配蛋白存在。结论：配基神经氨酸胞苷酰基转移酶可能为与胃癌相关的Hp特异蛋白，另两种为新发现的可能与胃癌相关的Hp特异蛋白，其相关机制尚待进一步阐明。     

新时代背景下医学微生物学课程思政的建设与应用探索

近年来,高等教育已经步入了课程思政全面建设的新时期,积极有效地落实课程思政已经成为高校教学的重点。医学微生物学是医学各专业学生均需要学习的专业必修课。目前,各种新发传染病不断出现,给社会带来巨大威胁。在同传染病做斗争的过程中,一线医务工作者和科研人员表现出了极大的勇气和担当,为我国各种传染病的有效控制做出了突出贡献,因此在医学微生物学教学过程中进行课程思政具有极强的必要性。但目前对医学微生物学课程思政的探索尚非常有限,为此,本研究对医学微生物学课程思政进行了建设,设计了多种可执行的模式并进行了探索,收到了良好的效果。本研究可以为医学微生物学的课程思政提供参考。     

霍乱弧菌山梨醇发酵相关基因序列特征分析

目的 比较霍乱弧菌流行株与非流行株山梨醇发酵相关基因的差异，为采用分子生物学方法快速区分两类菌株提供理论依据。方法采用基因测序的方法，分别对42株霍乱弧菌(01群埃尔托型33株、0139群9株)流行株和非流行株的糖发酵激活蛋白、外周质麦芽糖结合蛋白、外周质磷酸盐结合蛋白和外周质氨基酸结合蛋白编码基因进行序列比较。结果糖发酵激活蛋白编码基因在霍乱弧菌流行株与非流行株共发现三个位置有单个碱基的差异，即第106、150和378位核苷酸(在流行株分别为A、A和T，而在非流行株分别为G、G和C)。第106位碱基的差异导致了氨基酸的不同(编码蛋白的第36个氨基酸在流行株和非流行株分别为苏氨酸和丙氨酸)。外周质麦芽糖结合蛋白和外周质磷酸盐结合蛋白编码基因各发现两个碱基的规律变化，外周质氨基酸结合蛋白编码基因未发现一致性碱基改变。结论在这些基因中存在着多个单核苷酸多态性，可能会成为快速区分两类菌株的重要依据。糖发酵激活蛋白第36位氨基酸的改变，可能会引起该蛋白活性的改变。