shRNA-Bmi1重组载体构建及其对胆囊癌裸鼠移植瘤hTERT表达的影响

目的体外构建及鉴定sh RNA-Bmi1重组载体,探讨靶向沉默原癌基因Bmi1对人胆囊癌细胞Bmi1m RNA表达、蛋白表达及对裸鼠皮下移植瘤h TERT表达的影响.方法针对Bmi1不同位点构建4个sh RNABmi1重组质粒,采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和Western blot检测各组Bmi1m RNA和蛋白表达,选择有效干扰组进行体内实验.构建GBC-SD裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为sh RNA-Bmi-4组(实验组)、sh RNA-Scramble(错配组),Lipofectamine(阴性对照组),GBC-SD(空白对照组).成瘤后进行移植瘤治疗,治疗6周后处死裸鼠,免疫组化检测裸鼠移植瘤h TERT蛋白表达水平.结果成功构建了sh RNA-Bmi1重组载体.转染胆囊癌48 h后倒置荧光显微镜观察发现sh RNA-Bmi1-4组GBC-SD绿色荧光强度增强、转染效率最高,RT-PCR及Western blot结果显示sh RNA-Bmi1-4组m RNA及蛋白表达量均明显低于各对照组(P<0.05),对照组间表达量差异无统计学意义(P>0.05).选取sh RNA-Bmi1-4组作为有效干扰序列作后续体内实验.免疫组化检测sh RNA-Bmi-4组裸鼠移植瘤h TERT蛋白表达水平明显低于各对照组(P<0.05),对照组间蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05).结论体外成功构建了sh RNA-Bmi1重组载体,顺利进行重组载体的转化和转染实验。靶向沉默Bmi1基因可有效促进胆囊癌细胞Bmi1m RNA降解、抑制其蛋白的表达,同时有效抑制GBC-SD裸鼠移植瘤h TERT蛋白表达.     

生物工程骨在山羊脊柱横突间植骨融合的实验研究

目的构建一种理想的骨移植替代材料。方法以关中奶山羊为实验对象,体外分离并培养骨髓间充质干细胞（MSCs）;构建人工骨复合物,以珊瑚羟基磷灰石（CHA）为支架,加入经过血管内皮生长因子（VEGF）基因转染的MSCs为三联复合物进行联合培养;将自体髂骨和构建好的生物工程骨植入山羊腰椎横突间进行对比观察研究。结果 8周触诊发现2组均无活动度。8周后摄X线片结果显示2组均已形成骨小梁。HE染色发现,基因增强工程骨在12周形成更加成熟的骨组织。生物力学测量显示2组移植骨在最大压缩强度和弹性模量上差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 CHAMSCs-VEGF三联成骨复合物在成骨的速度和质量上接近生物自体移植骨,有望广泛应用于临床。     

舌癌VEGF-C表达与颈淋巴结转移的关系及其临床意义

目的 :研究淋巴管生长因子 (VEGF C)表达与舌癌颈淋巴结转移的关系及其临床意义。方法 :收集一期行颈淋巴清扫术的舌癌病例 74例 ,行原发灶的VEGF C免疫组化染色及颈淋巴结的细胞角蛋白 (Cytokeratin ,CK)AE1/AE3免疫组化染色 ,观察原发灶的VEGF C表达情况及颈淋巴结转移情况。结果 :74例患者中 ,VEGF C高表达 39例 (5 2 .7% ) ,VEGF C低表达 35例 (47.3% ) ,有颈淋巴结转移者 38例 (5 1.4 % )。Fisher’s精确概率检验表明T1、T2期舌癌VEGF C表达和颈淋巴结转移密切相关。单因素Logistic回归表明T1、T2期舌癌淋巴结转移与VEGF C表达、T分期及N分期相关 ,而多因素Logistic回归表明T1、T2期舌癌淋巴结转移仅与VEGF C表达相关(P <0 .0 1)。结论 :VEGF C表达对评估早期舌癌颈淋巴结转移有重要意义。     

经T管窦道带鞘管小儿经皮肾镜联合EMS三代超声/气压弹道碎石取石治疗肝内外胆道残石

目的探讨经T管窦道带鞘管小儿经皮肾镜联合EMS三代超声/气压弹道碎石取石治疗胆道术后残余结石的可行性、优越性及疗效。方法2004年8月～2007年8月,对32例胆总管切开取石T管引流术后胆道残余结石,经T管窦道用带鞘管小儿经皮肾镜联合EMS三代超声/气压弹道碎石取石。结果32例取石36次,手术时间33～78min,平均43min。一次取净结石28例,两次取净结石2例,结石取净率为94%（30/32）,术后随访26～48个月,平均29个月,无腹痛、发热、黄疸症状,B超未见结石复发。残留结石2例,其中1例为肝内广泛多发胆管结石,经3次取石仍残留有较多结石,行Roux-en-Y肝胆管空肠吻合术临床治愈,另1例为70岁老年人,一次取石后因不愿意再手术而放弃二次取石,残留肝右前叶少量结石。32例均无胆管撕裂、胆道大出血、胆漏、胆管炎、术后腹胀及其他严重并发症发生。结论经T管窦道带鞘管小儿经皮肾镜联合EMS三代超声/气压弹道碎石取石治疗胆道残石具有安全、快捷、简单、方便、并发症少等优点,而且设备损耗低、价格便宜、实用性和可操作性强,值得临床推广应用。     

多功能阑尾悬吊器辅助两孔法腹腔镜阑尾切除术

目的:探讨多功能阑尾悬吊器辅助两孔法腹腔镜阑尾切除术的可行性、疗效及临床价值。方法:回顾分析2005年1月至2008年5月为49例患者行多功能阑尾悬吊器辅助两孔法腹腔镜阑尾切除术的临床资料。结果:49例手术均获成功,无中转开放手术,手术时间19～120min,平均27min,术后顺利康复,仅在脐缘及耻骨上方阴毛区留下2个小且隐蔽的切口瘢痕,随访24～60个月,平均33个月,无切口感染、肠粘连、大网膜粘连、切口疝等并发症发生,患者均对手术及美容效果感到满意,满意率达100%。结论:多功能阑尾悬吊器辅助两孔法腹腔镜阑尾切除术具有戳孔少、术后瘢痕小且隐蔽、戳孔感染率低、美容效果好等优点,是腹腔镜阑尾切除术的另一选择。     

腹腔镜与开腹手术治疗原发性肝癌的围手术期情况比较

目的了解腹腔镜肝切除术（1aparoscopichepatectomy,LH）与开腹肝切除术（openhepatectomy,OH）治疗原发性肝癌的围手术期状况的变化。方法回顾性分析2012年1月至2013年6月期间青岛大学医学院附属医院肝胆外科收治的40例原发性肝癌患者的临床资料,其中20例行LH,20例行OH,比较2组患者的术前一般情况、术中情况和术后恢复情况。结果2组患者术前一般情况的差异均无统计学意义（P〉0．05）;在切口长度、术中出血量、术后肝功能指标、胃肠功能恢复情况和术后住院时间方面LH具有明显的优势（P〈0．05）,而在手术时间、术后并发症和住院总费用方面2组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LH较传统的OH可明显改善肝癌患者的围手术期状况,值得在有条件的情况下开展推广。     

pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因靶向性治疗人原发性肝癌的实验研究

目的研究pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因对人肝癌细胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治疗作用。方法建立人原发性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分成肿瘤对照组、空质粒组、丙氧鸟苷（GCV）组、pcDNA3/TK/Angio组及pcDNA3/AFP/TK/Angio组5组。于瘤体内分别直接注射不同的质粒,同时于裸鼠腹腔内注射GCV,观察不同时段皮下肿瘤的生长情况并做病理学检查,免疫组化法检测肿瘤微血管密度（MVD）以及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达量,原位末端标记（TUNEL）法检测细胞原位凋亡。放免法检测裸鼠血清甲胎蛋白（AFP）的变化,透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化。结果裸鼠皮下成瘤率100%;pcDNA3/TK/Angio组及pcDNA3/AFP/TK/Angio组的肿瘤体积、血清AFP含量、肿瘤MVD和VEGF表达强度均明显低于对照组、空质粒组和GCV组（P〈0.05）,细胞凋亡指数都明显高于后3组（P〈0.05）,可见较多的凋亡细胞。而pcDNA3/AFP/TK/Angio组的肿瘤体积、AFP、MVD及VEGF表达强度又明显低于pcDNA3/TK/An-gio组（P〈0.05）,凋亡指数高于后者（P〈0.05）。结论pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因系统可显著抑制肿瘤的生长,有望成为治疗原发性肝癌的新型生物制剂之一。     

内镜诊断儿童少年上消化道溃疡362例分析

目的提高对儿童少年上消化道溃疡的认识，儿童少年内镜检查是安全可靠的。方法本组362例，男302例，女60例，男女之比为5．03：1。结果本组受检查占同期的4．38％（1013／23138），诊断为上消化道溃疡362例，检出率为35．74％（362／1013）。儿童少年内镜检查对明确上消化道溃疡诊断作出及时处理，优于X线上消化道钡餐检查，认真做好内镜术前儿童少年心理护理的准备工作，消除儿童少年对内镜检查的心理恐惧、紧张情绪，本组共检查1013例儿童少年，均一次检查成功。结论儿童少年内镜检查是安全可靠的。应作为儿童少年上消化道疾病的一项常规检查。     

靶向性融合基因对人肝细胞性肝癌治疗作用的体外研究(摘要)

目的观察由人甲胎蛋白(AFP)启动子调控的单纯疱疹病毒II型胸苷激酶基因(HSV-Ⅱ-tk)与血管生成抑制素基因(Angio)的融合基因对人肝细胞性肝癌的体外治疗作用·方法通过PCR技术,从临床肝癌标本中克隆AFP启动子;通过基因重组技术,构建的真核表达载体pcDNA3/AFP/tk/Angio;通过阳离子脂质体Liofectamine介导,体外转染人肝细胞性肝癌细胞株SMMC-772l和Bel7402加入GCV,细胞培养·用RT-PCR、光镜、透射电境、MTT,流式细胞仪等方法检测HSV-Ⅱ-tk和An-giostatin基因在SMMC-7721和Bel 7402细胞中的表达及其对该细胞的杀伤作用·结…     

“仙灵液”治疗中、晚期食管癌、贲门癌50例临床观察

临床研究显示“仙灵液”治疗食管癌、贲门癌的临床短期有效率为 62 % ,明显高于对照组 ( P<0 .0 5)。治疗主张在现代医学的基础上 ,用药以扶正为主 ,加大峻猛药物的运用。在其作用机理研究中 ,“仙灵液”可明显改善肿瘤患者 T淋巴细胞的免疫效应 ,认为本方疗效与其增强机体免疫效应有关