人幽门螺杆菌热休克蛋白A基因的克隆、表达及初步应用

目的　获取重组表达人幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori ,Hp)热休克蛋白A(HspA)亚单位 ,并应用于临床诊断。方法　利用PCR技术扩增HpHspA基因 ,将其构建至PinPointTMXa 3载体中进行诱导表达 ,并对其产物进行SDS PAGE、免疫印迹等检测。同时 ,将纯化的重组蛋白结合ELISA方法对幽门螺杆菌感染患者清除治疗前后血清中的抗HspA抗体进行检测。结果　所克隆的HspADNA由 3 5 4个碱基组成 ,可编码 118个氨基酸残基的多肽 ,SDS PAGE和免疫印迹显示所表达的蛋白分子量约为 14× 10 3 ,并可与相应的抗血清发生特异反应 ;ELISA结果发现 ,消化性溃疡患者在清除治疗后早期只出现明显的抗HspA抗体滴度下降 ,而抗幽门螺杆菌抗体要在治疗后 6月才出现明显下降。结论　重组表达HspA为诊断、预防和治疗幽门螺杆菌的进一步研究奠定了重要实验基础     

单纯疱疹病毒型特异性的鉴别诊断

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)分为HSV-1、HSV-2两个型别。两型的DNA有50%的同源性。目前血清学检测无法区分HSV型别。有效地鉴别HSV两型对疾病的诊断治疗和患者的身心健康至关重要。现对Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的鉴别诊断方法作一综述。     

Hp中性粒细胞激活蛋白研究进展

幽门螺杆菌(Hp)是一种参与多种胃、十二指肠疾病的重要人类病原体,可引起慢性胃炎和消化性溃疡,并与胃癌密切相关.人类幽门螺杆菌感染的特征是胃黏膜炎症部位中性粒细胞持续浸润.幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(H.pylori neutrophil-activating protein,HP-NAP)正是由于其能活化中性粒细胞而被如此命名.HP-NAP不仅是重要的毒力因子,而且是主要的候选疫苗抗原.本文综述了HP-NAP的结构、生物学活性和致病机制等的研究进展,并对其应用前景进行了展望.     

重细胞分泌可溶怀IL—2R的动态检测及放免分析

ＩＬＩＳＡ检测表明：重组ＣＨＯ细胞产生的ＩＬ－２Ｒａ分子主要分布在细胞膜上，少量分泌到膜外成为可溶性ＩＬ－２Ｒ（ ｓＩＬ－２Ｒ）。ｓＩＬ－２Ｒ产生的时相与膜ＩＬ－２Ｒａ相似，但后有一个较长的高浓度稳定期。此结果提示：膜ｓＩＬ－２Ｒａ代谢比培养液中ｓＩＬ－２Ｒ明显活跃，但ｓＩＬ－２Ｒ的水平并不随膜ＩＬ－２Ｒａ含量增加而改变，ｓＩＲ－２Ｒ这种恒定的代谢方式可能包含着独特的免疫生物学意义。放免受体分析     

长程高脂饲料对雌雄大鼠胰岛功能损害差异的探讨

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响，并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只，抽签式随机分组，其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只，雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血糖的变化，在第14个月时进行腹腔注射糖耐量试验（IPGTT），检测葡萄糖耐量减退（IGT）的情况，测定第14个月时的空腹胰岛素分泌量及大鼠胰腺组织匀浆液中线粒体和微粒体的丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和过氧化氢酶（calalase，CAT）水平。结果第14个月时无论普食组或高脂组雄性大鼠腹腔注射糖耐量都受损，而雌性大鼠都未达到糖耐量受损，腹腔糖耐量测试表明雌雄大鼠在120min时血糖有显著性差异（P〈0．05）；14个月时高脂组雄性大鼠空腹胰岛素分泌量显著高于雌性大鼠（P〈0．05）；胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）显示高脂组雄性大鼠胰岛素抵抗程度较雌性大鼠显著升高（P〈0．05）；早相胰岛素分泌功能显示经过长程高脂喂养，雄性大鼠早相胰岛素分泌功能显著低于雌性大鼠（P〈0．05）；胰腺组织匀浆液中线粒体的MDA、细胞质的GSH和CAT的水平雌雄大鼠间虽然无显著性差异（P〉0．05），但总体趋势是无论是普食组还是高脂组，雄性大鼠氧化应激水平都高于雌性大鼠，抗氧化应激水平都低于雌性大鼠。结论雌性大鼠具有抵抗高脂诱导的糖耐量受损作用，其胰腺组织氧化应激水平较低可能是机制之一。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析。结果从EHEC O157∶H7 Sakai菌株中克隆出了1014bp的TccP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157∶H7致病机制中的作用奠定基础。     

幽门螺杆菌代谢组学研究进展

幽门螺杆菌是引起人类慢性活动性胃炎和消化性溃疡的重要病原菌,与胃癌和胃淋巴样组织淋巴瘤(MALT)的发生也高度相关.随着幽门螺杆菌26695和J99菌株基因组测序工作的完成,人们对该菌的基因组学特点有了较清楚的认识.在此基础上,后基因组学研究特别是代谢组学研究正成为幽门螺杆菌研究的前沿领域.本文根据近年来国内外的相关资料,对幽门螺杆菌的主要代谢途径、代谢产物以及环境因素引起的代谢调控特征等代谢组学研究现状进行了综述,同时对幽门螺杆菌的代谢组学研究面临的问题和发展趋势进行了展望.     

HSPC016的表达、纯化与生物学活性分析

目的:测定大肠杆菌中造血干细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)016融合蛋白的表达,纯化及其生物学活性。方法:采用PCR技术从pET-28a( )/HSPC016中扩增出目的基因HSPC016重组到质粒pET-22b( )中,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍离子亲和层析和分子筛法纯化;用胰蛋白酶消化对数期生长的第3代和第9代DPC,细胞记数法记录生长曲线。结果:原核表达载体pET-22b( )/HSPC016在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白表达率约28%,纯化后纯度达95%以上;经重组蛋白处理的DPC增殖活跃;细胞记数结果初步证实HSPC016重组蛋白能促进第9代DPC的增殖及其DNA合成,对第3代DPC无明显作用。结论:HSPC016基因在大肠杆菌中得到了高效表达;HSPC016重组蛋白具有促进高传代DPC增殖的作用。     

幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性研究

目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性进行研究,探讨Hp感染与胃内菌群的关系。方法建立Hp感染的蒙古沙鼠模型,空白对照组、阴性对照组、直接感染组和预处理感染组各15例,4周后采集胃黏膜样本,同时检测HP定植率,并提取细菌基因组DNA,采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE)对黏膜局部菌群进行指纹图谱分析,并对特异性条带进行测序鉴定分析。结果预处理感染组感染率(93.3%)与直接感染组感染率(26.7%)有明显差异(P<0.05);各实验组PCR-DGGE指纹图谱分析显示条带数量,空白对照组(21.6±2.5)、阴性对照组(3.3±1.1)、直接感染组(14.6±2.4)和预处理感染组(7.2±2.2),经统计学分析,各组间均有明显差异(P<0.05),提示蒙古沙鼠各组间菌群多样性存在显著的差异性。结论 Hp感染与胃黏膜菌群结构的变化密切相关。