Th17：新兴的辅助T细胞

Th17近来逐渐被认为是一个独立的辅助T细胞亚群, 以分泌IL-17主要特征.Th17在防御胞外细菌感染的免疫应答、介导慢性炎症和自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用.对Th17的进一步深入研究可以加深我们对相关疾病发病机制的认识并指导临床治疗.     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7 espA基因的克隆与表达

目的 通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7的EspA蛋白，并分析其免疫学性质。方法 采用PCR技术从EHEC O157：H7基因组中扩增espA基因，T／A法克隆，连接至pET-28a（＋）载体上，转化宿主细胞E．coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，亲和层析法纯化目的蛋白，SDS-PAGE测定其相对分子质量，同时分析其N端氨基酸序列，免疫家兔鉴定其抗原性。结果 重组espA基因片段的测序结果与GenBank上基因序列只有1个碱基不同，一致性为99．83％，所编码的氨基酸序列没有改变。重组EspA蛋白在工程菌中以包涵体的形式表达，表达量约30％。免疫家兔所得抗体滴度为1：32。结论构建高效表达EspA蛋白的重组载体pET-28a（＋）-espA，表达的蛋白具有良好的免疫原性，为进一步制备亚单位疫苗奠定基础。     

抗Stx2B单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的分泌表达

目的 构建重组志贺样毒素亚Ⅱ结合亚单位（Stx2B）单链抗体基因,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法借助连接肽（Gly4Ser）3将已成功扩增的抗Stx2B单抗1A5轻、重链可变区基因（VL、VH）连接成单链抗体（ScFv）基因VH-Linker-VL,并在VH5’端和VL3’端引入SfiⅠ和Not Ⅰ酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His之中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。亲和层析纯化抗体蛋白后,以SDS-PAGE、ELISA等方法分析鉴定表达产物。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实基因构建正确。SDS-PAGE、ELISA分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物的相对分子质量（Mr）为27000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功实现了抗Stx2B单链抗体的原核分泌表达,为探讨O157菌的感染机制及防治研究奠定了基础。     

致泻性大肠杆菌疫苗研究进展

大肠杆菌引起的腹泻多发生在儿童及发展中国家,发展致泻性大肠杆菌疫苗具有特殊的意义。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗和ghost疫苗技术为疫苗的研制提供了新的思路。本文综述了目前致泻性大肠杆菌疫苗研究的新进展。     

幽门螺杆菌分子内佐剂三价疫苗的构建、纯化及活性研究

目的构建幽门螺杆菌（helicobacter pylori,Hp）中性粒细胞激活蛋白基因napA、黏附素hpaA、尿素酶B亚单位活性功能片段ureB414与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（heat-labile enterotoxin Bsubunit,LTB）的分子内佐剂三价融合蛋白疫苗,并通过13服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带napA-hpaA．ureB414-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-NHUL,转化E．coliB121（DE3）,进行原核表达,重组表达蛋白采用HK26／60Superdex-75分子筛和亲和层析柱Chelating Sepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Westemblot鉴定,GM1-ELISA检测rNHUL与神经节苷脂的结合。口服免疫Balb／c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性。结果重叠延伸PCR扩增出了约1590bp的NHUL融合基因;其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的25％,Tris-Tficine初步测定目的蛋白的肘,约59000,纯化后纯度大于90％。Westemblot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性。动物实验表明,多亚单位疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG、IsA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sigA抗体显著高于单一亚单位疫苗。结论所获得重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础。     

表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒沙门氏菌工程菌株的构建

目的 采用平衡致死系统构建表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒沙门氏菌工程菌株。方法 PCR扩增幽门螺直菌尿素酶B亚单位,与pYA3149(asd^ ）载体质粒重组,转化减毒的伤寒沙门氏菌突变株,SDS-PAGE,用western-bolt分析其表达,并观察重组菌体外传代培养的稳定性。结果 利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的重组减毒沙门氏菌工程菌株,且在有选择压力的条件下在体外能稳定地繁殖、生长和传代。结论 表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒伤寒沙门氏菌工程菌株的成功构建为发展幽门螺杆菌的口服基因工程疫苗奠定了基础。     

人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位重组蛋白纯化及免疫活性研究

热休克蛋白 (ｈｅａｔｓｈｏｏｋｐｒｏｔｅｉｎ ,Ｈｓｐ)为幽门螺杆菌 (Ｈｐ)共同的抗原成分 ,分为Ａ(ＨｓｐＡ)、Ｂ(ＨｓｐＢ)两个亚单位。目前 ,通过细菌培养获得大量Ｈｐ,并从中纯化出足量的亚单位抗原非常困难。因此 ,我们采用基因工程技术构建重组ＨｓｐＡ基因工程菌 ,并对ＨｓｐＡ重组蛋白纯化条件及免疫学活性进行研究。试验证明ＨｓｐＡ以包涵体形式表达。采用本室建立的包涵体洗涤、溶解方法进行处理 ,溶解包涵体后ＨｓｐＡ纯度大于6 0 % (Ａ级纯化 )。之后我们采用分步稀释法将ＨｓｐＡ复性。对ＨｓｐＡ的Ｂ级纯化选择ＱＳｅｐｈ…     

西藏拉萨市1351例患者幽门螺杆菌感染情况分析

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是人类上消化道疾病的重要致病菌[1-3].HP的感染与社会经济状况、卫生习惯、饮食习惯有关,且有家庭聚集性,不同国家、地区、人群感染率有明显差异.为了解拉萨市居民HP的感染情况及与相关疾病的关系,对西藏军区总医院1351例随机就诊患者进行了调查分析.     

氨基酸钙复合物增加大鼠骨密度的研究

目的 研究氨基酸钙复合物对ＳＤ大鼠骨密度的影响。方法 将ＳＤ大鼠随机分成６组,分别喂养氨基酸钙复合物、碳酸钙和低钙饲料,通过测量相应饲料畏养大鼠的身长和体重,钙表观吸收率,以及股骨的长度、重量、骨密度、钙含量等指标,观察氨基酸钙复合物对ＳＤ大鼠骨密度的影响。结果 ３种剂量水平氨基酸钙复合物组及２种剂量水平碳酸钙对照组大鼠的股骨长度、股骨干重、股骨骨密度、股骨骨钙含量以及身长显著高于低钙饲料对照组（     

新型疫苗研究方兴未艾

<正>传统疫苗的研究是把原有的野生的病毒或细菌在实验室培养制备后,通过物理、化学的方式将其灭活,即为原始疫苗的主要成分,加上佐剂再通过注射或口服进行免疫,但这种方式也会带来比较大的毒副反应。因此,目前又进入到第三代亚单位或基因工程/多肽疫苗的研发。